基于對照制劑的牛黃清胃丸中冰片的質量評價

查祎凡 聶黎行?于健東?戴 忠馬雙成

（1.中國食品藥品檢定研究院，北京100050；2.中國藥科大學，江蘇 南京211198）

牛黃清胃丸收載于《衛生部藥品標準中藥成方制劑（第一冊）》，由牛黃、大黃、菊花、麥冬、薄荷、石膏、梔子、玄參、番瀉葉、黃芩、甘草、冰片17味中藥組成，具有清胃瀉火、潤燥通便的作用，用于心胃火盛、頭暈目眩、口舌生瘡、牙齦腫痛、乳蛾咽痛、便秘尿赤［1］。方中冰片功效清熱止痛，但執行標準中缺乏其質量控制項目；另一方面，在合成過程中會產生副產物樟腦，氣味和外形相似，但具有毒性［2］，同時市售品存在該成分含有量超標的問題［3-4］，故需要進行檢查。

中成藥中冰片質量控制的方法常采用GC 技術［5-10］，但其易揮發，含有量限度設定往往無據可依。為了科學地評價牛黃清胃丸中冰片質量，本實驗創新性地引入對照制劑，采用GC 法測定龍腦、異龍腦含有量，對樟腦進行限量檢查，同時研制了相關對照制劑，考察了生產、貯存過程中冰片轉移和損失情況，以期為含冰片原粉制劑的質量和安全控制提供參考。

1 材料

AE240（十萬分之一）、FX-200（萬分之一）電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；Agilent 7890N 氣相色譜儀（美國Agilent 公司）；Climacell 恒溫恒濕箱（德國MMM公司）；KQ3200DB 數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

樟腦（110747-201409）、異龍腦（111512-201603）、龍腦（110881-201508）對照品，以及人工牛黃（121197-201204）、大 黃（120902-201311 ）、菊 花（121384-201504）、麥 冬（121013-201310 ）、薄 荷（120916-201310）、梔 子（120986-201610 ）、玄 參（121008-201609）、番瀉葉（120996-201205）、黃 芩（120955-201309）、甘 草（120904-201620 ）、桔 梗（121028-201612）、黃 柏（121510-201606 ）、連 翹（120908-201216）、牽牛子（121024-201606）、枳 實（120936-201606）對照藥材均由中國食品藥品檢定研究院提供；石膏購于北京華邈藥業有限公司，經中國食品藥品檢定研究院聶黎行副研究員鑒定為正品。牛黃清胃丸對照制劑由中國食品藥品檢定研究院按大生產規模自行研制，其中冰片來自福建青松股份有限公司。煉蜜由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠提供。無水乙醇、乙酸乙酯，硅藻土為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）。

2 方法

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取樟腦、異龍腦、龍腦對照品適量，無水乙醇制成每1 mL 分別含三者10 μg、0.1 mg、0.1 mg，即得。

2.1.2 供試品溶液 取重量差異項下丸劑適量，研細，精密稱取3 g，加入無水乙醇30 mL，稱定質量，冰浴超聲（100 W、40 kHz）45 min，冷卻至室溫，無水乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液 按照丸劑處方和制法，制備缺冰片的陰性樣品，按“2.1.2”項下方法制備，即得。

2.2 色譜條件［11］HP-INNOWax 色譜柱（0.32 mm×30 m，0.25 μm）；進樣口溫度250 ℃；柱溫100 ℃；FID 檢測器溫度300 ℃；載氣體積流量1.8 mL／min；進樣量1 μL；分流比10 ∶1。

3 結果

3.1 樣品溶液制備方法 本實驗對是否加硅藻土、提取溶劑種類和用量、提取時間進行了比較，發現不加硅藻土直接研磨時冰片提取效率更高；無水乙醇提取效率高于乙酸乙酯；無水乙醇加入量30 mL、超聲時間45 min 時，龍腦、異龍腦含有量不再增高。

3.2 方法學考察

3.2.1 專屬性試驗 取對照品、供試品、陰性樣品溶液，在“2.2”項色譜條件下進樣測定，結果見圖1。由圖可知，陰性樣品在對照品保留時間處無干擾，表明該方法專屬性良好。

圖1 各成分GC 色譜圖

3.2.2 檢出限、定量限 取質量濃度已知的樟腦對照品溶液，在“2.2”項色譜條件下進樣測定，測得檢出限（信噪比3 ∶ 1）為0.26 μg／mL，定量限（信噪比10 ∶ 1）為1.51 μg／mL。

3.2.3 線性關系考察 精密稱取各對照品適量，無水乙醇制成每1 mL 分別含樟腦19.26 μg、異龍腦1.01 mg、龍腦1.01 mg 的貯備液，將其稀釋成不同質量濃度，在“2.2”項色譜條件下各進樣1 μL 測定。以溶液質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行回歸，結果見表1，可知各成分在各自范圍內線性關系良好。

表1 各成分線性關系

3.2.4 精密度試驗 取供試品溶液（批號20170602），在“2.2”項色譜條件下進樣測定6次，測得樟腦、異龍腦、龍腦峰面積RSD 分別為2.33%、1.79%、1.43%，表明儀器精密度良好。

3.2.5 穩定性試驗 取供試品溶液（批號20170602），室溫下放置0、1、2、4、6、8 h 后在“2.2”項色譜條件下進樣測定，測得樟腦、異龍腦、龍腦峰面積RSD 分別為2.37%、1.70%、1.04%，表明溶液在8 h 內穩定性良好。

3.2.6 重復性試驗 取同一批丸劑（批號20170602），按“2.1.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，在“2.2”項色譜條件下進樣測定，測得樟腦、異龍腦、龍腦含有量RSD 分別為2.38%、2.37%、2.94%，表明該方法重復性良好。

3.2.7 加樣回收率試驗 取含有量已知的丸劑（批號20170602），研細，精密稱取1.5 g，按高、中、低3個水平精密加入對照品溶液，每個水平按“2.1.2”項下方法平行制備3份供試品溶液，在“2.2”項色譜條件下進樣測定，計算回收率，結果見表2。

表2 各成分加樣回收率試驗結果（n=9）

3.3 樣品含有量測定 取46批樣品，每批按“2.1.2”項下方法平行制備2份供試品溶液，在“2.2”項色譜條件下進樣測定，計算含有量，結果見表3。

表3 各成分含有量測定結果（n=2）

3.4 冰片轉移率、損失率測定 取對照制劑及冰片，同法測定，以龍腦含有量為指標，根據冰片處方量和對照制劑中煉蜜加入量，測得冰片轉移率為38%。再取新制備、包裝完好的對照制劑，置于溫度60 ℃、相對濕度60%的恒溫恒濕箱中10 d，于第0、5、10天取樣，同法測定，以龍腦含有量為指標，測得損失率分別27%、48%。由此確定，冰片在貯存過程中的損失率暫以48%計。

4 討論

4.1 牛黃清胃丸中與冰片質量相關的安全性評價《中國藥典》 規定，冰片中樟腦含有量限度為0.50%［12］。牛黃清胃丸用量為1次2丸，每天2次，最大日服用劑量為24 g，按樟腦每天最大服用量1.5 mg 計算，本實驗擬定樟腦安全限度為62 μg／g，并發現46批樣品中有1批超過限度。另外，10批樣品中樟腦含有量占樟腦、異龍腦、龍腦總量的比例大于0.50%，可能是由于企業投料用的冰片雜質過多，故建議提高原料質量。

4.2 牛黃清胃丸中與冰片質量相關的有效性評價 《中國藥典》 規定，冰片中龍腦含有量不得低于55.0%［12］。本實驗發現46批樣品中龍腦占樟腦、異龍腦、龍腦總量的比例均在55.0%左右，表明投料用冰片中龍腦含有量基本符合規定。按處方量折算，牛黃清胃丸中龍腦理論含有量為0.36%，但“2.4”項下結果顯示對照制劑所含冰片在生產過程中的轉移率為38%，貯存過程中的損失率為48%，故擬定其含有量限度為0.12%。同時，有16批樣品達到該擬定限度，占34.8%，提示企業應加強生產過程控制，改善包裝材料，以降低冰片損失；D 廠家2批樣品、N 廠家1批樣品測定值明顯偏低，僅在0.03%左右，可能是企業未按處方量投料。

4.3 對照制劑在中藥質量控制中的應用 對照制劑作為中藥標準物質的新形式，是指采用道地、優質、規范加工的原料藥材（飲片）和輔料，嚴格按照制法和生產工藝規程，并遵循藥品生產質量管理規范制備的實物對照，主要用于中成藥質量控制，評價產品投料真實性（是否投入正確原料）和投料量可靠性（是否按處方量投料）［13］。將對照制劑用于中藥研究、生產、質量控制時，可提供化學成分（群）從原料到制劑的轉移率等關鍵信息，有助于完善質量標準，提高工藝水平，保證用藥安全有效。