陳 貴，夏稷子，徐作剛，史 娟，鄧言歡，張 華，王 濤，安 軍

（黔南州檢驗檢測院，貴州 都勻558000）

地桃花為錦葵科梵天花屬植物地桃花Urena lobataL.的干燥全草，具有祛風利濕、活血消腫、清熱解毒的功效，主治感冒、風濕痹痛、跌打腫痛、毒蛇咬傷等［1-3］，主要含有黃酮、有機酸、多酚，功效抗氧化、抗菌、抗炎等［4-10］，其中黃酮類化合物銀鍛苷有著顯著的抗氧化、抗炎作用［11-12］。1990年版《廣西中藥材標準》 和2009年版《湖南中藥材標準》 收載了地桃花，其入藥部位為地上部分，但其質量控制指標僅有性狀和水分，尚無顯微鑒別、薄層鑒別、浸出物、成分含有量測定等項目［13-14］；蘇聰等［15］采用HPLC 法測得廣西、廣東產地桃花地上部分銀鍛苷含有量范圍為0.010%～0.064%。本實驗對12批地桃花進行性狀鑒定及顯微、TLC 鑒別，測定水分、總灰分、浸出物含有量，并建立HPLC 法測定銀鍛苷含有量，為該藥材質量控制提供依據。

1 材料

DM2500型顯微鏡（德國Leica 公司）；LC-2010A 型高效液相色譜儀（日本島津公司）；Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；雙光束TU-1901型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；AG135型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；BSA224S 型電子天平［賽多利斯科學儀器（北京）有限公司］；HH-6型數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；SK250LHC 型超聲波清洗儀（上海科導超聲儀器有限公司）；101-1AB 型電熱鼓風干燥箱、SX-4-10型箱式電阻爐（天津市泰斯特儀器有限公司）。銀鍛苷對照品（批號170305，含有量99.34%），購于北京世紀奧科生物技術有限公司。G 型硅膠板（青島海洋化工有限公司，批號20 180621；青島基億達硅膠試劑廠，批號20150910）；H 型硅膠板（青島海洋化工有限公司，批號20160226）。乙腈為色譜純；其余試劑為分析純；水為娃哈哈純凈水。地桃花于2015至2016年采自貴州都勻、興仁、思南等地，經貴州省食品藥品檢驗所中藥標本館李楊館長鑒定為錦葵科植物地桃花Urena lobataL.的干燥全草，具體見表1。

2 方法與結果

2.1 形態鑒定［1］藥材根呈圓柱形，略彎曲，支根少數，上生多數須根，表面淡黃色，具縱皺紋，質硬，斷面呈破裂狀；莖下部棕黑色至棕黃色，上部灰綠色至暗綠色，具粗淺的網紋，質硬，木部斷面不平坦，皮部纖維性；葉多已破碎，完整者多皺縮，上表面深綠色，下表面粉綠色，密被短柔毛和星狀毛，掌狀網脈，中脈基部有一腺體，葉腋常有宿存的托葉；具花者花梗長約3 mm，被綿毛；小苞片5，長約6 mm，基部1／3合生；花萼杯狀，裂片5，較小苞片略短；花瓣多皺縮，常脫落；具果者果扁球形，每一分果呈球狀五等分楔形，具星狀短柔毛和錨狀刺，種子腎形；氣微，味淡。見圖1。

表1 樣品信息Tab.1 Information of samples

圖1 地桃花形態鑒定Fig.1 Morphological identification of U.lobata

2.2 顯微鑒定 藥材粉末呈黃綠色或棕黃色；色素塊棕黃色或棕紅色，形狀不規則；單細胞非腺毛眾多，單生或2～8個星狀簇生，平直或稍彎曲；腺毛頭部3～9細胞，柄部1～2細胞；纖維成束或散在，壁厚；氣孔平軸式；草酸鈣簇晶多見，直徑10～50 μm；導管多為孔紋導管和螺紋導管。見圖2。

圖2 地桃花顯微鑒定Fig.2 Microscopic identification of U.lobata

2.3 TLC 定性鑒別［16-17］取藥材粉末1 g，加80%甲醇25 mL，水浴回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加2 mL 甲醇溶解，作為供試品溶液；取適量銀鍛苷對照品，加甲醇制成每1 mL 含該成分約0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。按2015年版《中國藥典》 四部通則0502薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液1 μL、供試品溶液2 μL，點于同一G 型硅膠薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（30 ∶1 ∶3 ∶0.5）的上層溶液為展開劑，置于展開缸中展開，取出后晾干，噴以三氯化鋁試液，并用熱風吹干，于365 nm 紫外光燈下檢視，結果見圖3。由圖可知，在供試品、對照品色譜相應位置上顯相同的黃綠色熒光斑點。

圖3 地桃花TLC 色譜圖Fig.3 TLC chromatogram of U.lobata

2.4 檢查項及浸出物［18］采用2015年版《中國藥典》 四部通則0832水分測定法第二法（烘干法）測定含水量，通則2302總灰分測定法測定總灰分含有量，通則2201項下醇溶性浸出物測定法（熱浸法）測定浸出物含有量（溶劑為乙醇），平行3份，結果見表2。根據測定結果，初步擬定含水量不得超過15.0%，總灰分含有量不得超過11.0%，浸出物含有量不得少于5.0%。

2.5 含有量測定

2.5.1 色譜條件 島津InertSustain? C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相乙腈-0.1% 冰醋酸（22 ∶ 78）；柱 溫 30 ℃；體積流量1.0 mL／min；檢測波長315 nm；進樣量10 μL，色譜圖見圖4。在此條件下，銀鍛苷理論塔板數大于6 000，與相鄰成分色譜峰的分離度大于1.5。

表2 水分、總灰分、浸出物含有量測定結果（n=3）Tab.2 Results of content determination of water，total ash and extract（n=3）

圖4 銀鍛苷HPLC 色譜圖Fig.4 HPLC chromatograms of tiliroside

2.5.2 對照品溶液制備 取對照品11.99 mg，置于50 mL 量瓶中，加入80%甲醇，即得（每1 mL含238.2 μg 銀鍛苷）。

2.5.3 供試品溶液制備 精密稱取藥材粉末（過3號篩）約1 g，精密加入80%甲醇25 mL，稱定質量，水浴回流提取1 h，放冷，80%甲醇補足減失的質量，微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

2.5.4 線性關系考察 精密吸取對照品溶液1 mL，置 于2、10、50、250、500 mL 量瓶中，80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，在“2.5.1”項色譜條件下進樣測定。以溶液質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行回歸，得到方程為Y=31 242X＋475（r=1.000 0），在0.476 4～238.2 μg／mL范圍內線性關系良好。

2.5.5 精密度試驗 取“2.5.4”項下同一質量濃度對照品溶液，在“2.5.1”項色譜條件下進樣6次，測得銀鍛苷峰面積RSD 為0.14%，表明儀器精密度良好。

2.5.6 穩定性試驗 取藥材粉末（批號161014），按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，于0、2、4、6、12、24 h 在“2.5.1”項色譜條件下進樣，測得銀鍛苷含有量RSD 為0.56%，表明溶液在24 h內穩定性良好。

2.5.7 重復性試驗 取藥材粉末（批號161014）6份，按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.5.1”項色譜條件下進樣，測得銀鍛苷含有量RSD 為0.28%，表明該方法重復性良好。

2.5.8 加樣回收率試驗 取4.87 mg 對照品于200 mL 量瓶中，80%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL 含24.2 μg 該成分的貯備液。精密稱取含有量已知的藥材（批號161014）6份，每份0.5 g，精密加入貯備液15 mL、80% 甲醇10 mL，稱定質量后水浴回流提取1 h，放冷，80%甲醇補足減失的質量，微孔濾膜過濾，取續濾液，在“2.5.1”項色譜條件下進樣測定，計算回收率，結果見表3。

表3 銀鍛苷加樣回收率試驗結果（n=6）Tab.3 Results of recovery tests for tiliroside（n=6）

2.5.9 樣品含有量測定 取不同產地藥材粉末各約1 g，按“2.5.3”項下方法平行制備3份供試品溶液，在“2.5.1”項色譜條件下進樣測定，計算含有量，結果見表4。由表可知，除了1批樣品中銀鍛苷含有量較低，僅為0.130 mg／g 外，其余各批均高于0.300 mg／g，故初步擬定其限度不得低于 0.300 mg／g，即按干燥品計算不得低于0.030%。

表4 銀鍛苷含有量測定結果（n=3）Tab.4 Results of content determination of tiliroside（n=3）

3 討論

3.1 TLC 法耐用性考察 本實驗考察了溫度（4、25、40 ℃）、相對濕度（30%、52%、80%）、廠家、類型（G 型、H 型）薄層硅膠板對銀鍛苷TLC鑒別的影響，發現各廠家G 型硅膠板在不同溫度、相對濕度下，TLC 色譜圖中銀鍛苷斑點清晰，與相鄰斑點分離度較好，而H 型硅膠板效果較差，故選擇G 型板。

3.2 檢測波長選擇 銀鍛苷檢測波長包括266 nm［19］、315 nm［20-21］、316 nm［22］等，其中在265、315 nm處有最大吸收。本實驗結合HPLC 色譜圖中銀鍛苷吸收強度、相鄰峰干擾等因素，最終選擇315 nm作為檢測波長。

3.3 流動相選擇 本實驗參考文獻［15］報道，將水相用0.1%冰醋酸替代，可使銀鍛苷色譜峰對稱性更好。同時，用等度洗脫代替梯度洗脫時，操作更簡便，所得色譜峰基線更平穩。

3.4 提取條件選擇 本實驗考察了提取方式（回流、超聲）、提取時間（30、60、90 min）、提取溶劑（90%、80%、70%、60% 甲醇，甲醇和稀乙醇）對銀鍛苷提取的影響，發現80% 甲醇回流提取60 min 時效率較高。

3.5 粉末用篩選擇 本實驗考察了篩網（2號、3號）對銀鍛苷含有量測定的影響，發現2號篩處理后藥材含有大量纖維，粉末均勻性較差，平行樣偏差易超出范圍；3號篩處理后既能保證取樣均勻，又有較高的得粉率，故選擇3號篩。

3.6 HPLC 法耐用性考察 本實驗考察了島津InertSustain? C18、Waters Symmetry? C18、Agilent ZORBAX SB-C18、AlltimaTMC18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱 溫（20、25、30、35、40 ℃），色譜儀（LC-2010A、Agilent 1260），發現柱溫對銀鍛苷檢測影響較大，在20、25、30 ℃時峰形對稱性理想，可與相鄰峰達到基線分離，含有量測定結果無明顯差異；在35、40 ℃時出峰時間變短，與相鄰峰未達到基線分離。

4 結論

本實驗對地桃花性狀、顯微、TLC 定性鑒別、HPLC 含有量測定進行較為全面的研究，可為有效控制該藥材質量提供科學依據，同時也為相關地方標準的制定及現有質量標準的提升提供參考。