不同采收期廣升麻產量及其蛻皮甾酮含量動態變化研究

吳佳 匡艷輝 劉湘丹

摘要：目的? 研究不同采收期廣升麻產量及其蛻皮甾酮的含量，為廣升麻標準化栽培過程中采收期的確定提供依據。方法? 于不同采收期采集廣升麻植株，稱重法測定其根質量;HPLC測定根中蛻皮甾酮含量，色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-水（45︰55，V/V），流速1.0 mL/min，檢測波長248 nm，柱溫30 ℃，進樣量10 μL。結果? 不同采收期廣升麻植株根質量和根中蛻皮甾酮含量均呈動態變化。根質量在10月下旬達到最大值，之后基本穩定;蛻皮甾酮含量于11月上旬達到最高，其后稍有下降。結論? 綜合根產量、蛻皮甾酮含量和廣升麻植株物候期，確定廣升麻根的最佳采收期為11月上、中旬。

關鍵詞：廣升麻;采收期;根;蛻皮甾酮

中圖分類號：R284.1??? 文獻標識碼：A??? 文章編號：1005-5304（2019）10-0081-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.10.018????? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract： Objective To study the dynamic change of the yield and ecdysterone of Serratulae Chinensis Radix in different harvest time; To provide scientific basis for determination of harvesting time in its standardized cultivation. Methods The weight of the root of Serratula chinensis at different harvest time was measured by weighing method. The content of ecdysterone in the sample was determined by HPLC. The column was ZORBAX Eclipse XDB-C18 （250 mm × 4.6 mm， 5 μm） and the methanol-water （45：55， V/V） was mobile phase. The velocity of flow was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 248 nm with column temperature of 30 ℃. The injection volume was 10 μL. Results The root weight and ecdysterone content in different harvest time showed dynamic changes. The weight of root reached the maximum in late October， and then basically stabilized. The content of ecdysterone in root reached the maximum in early November， and then decreased slightly. Conclusion Integrating root yield， ecdysterone content and phenological phase of Serratula chinensis can determine that the best harvest time is the early and middle November.

Keywords： Serratulae Chinensis Radix; harvest time; root; ecdysterone

廣升麻來源于菊科植物麻花頭Serratula chinensis S. Moore的干燥塊根，其味辛、苦，性寒，歸胃、肺經，具有解毒透疹、升陽舉陷功效，用于熱毒咽腫、風熱頭痛、麻疹不透等[1]。廣升麻主要分布于廣東、湖南、江西、浙江、福建、廣西等地，其中廣東韶關、湖南郴州、江西贛州交界地為其道地產區，而產于湖南郴州桂東、汝城地區者習稱汝升麻。研究表明，廣升麻中主要化學成分為蛻皮甾酮類、揮發油、腦苷脂、神經酰胺類化合物等[2-7]。其中蛻皮甾酮是一種昆蟲蛻皮活性的天然甾體化合物，能促進蛋白質的合成，具有抗脂質過氧化、抗內皮細胞損傷、調節基因表達、降低膽甾醇等作用[8-9]。廣升麻根部入藥有降低膽固醇和治療腦血管疾病等作用，其治療腦缺氧、腦缺血效果尤為顯著，藥理研究表明該作用與蛻皮甾酮相關[10-11]。

隨著心腦血管疾病發病率不斷上升和年輕化，廣升麻的市場需求也日趨增長，由于其野生資源減少，人工種植廣升麻供不應求，探究廣升麻最佳采收期使其資源利用最大化具有十分重要的研究意義。因此，本試驗采用HPLC測定2016年9月中旬-12月中旬采收的廣升麻樣品中蛻皮甾酮的含量，結合廣升麻物候期和根產量，以探究廣升麻的最佳采收期，為充分合理地利用廣升麻資源提供依據。

1? 儀器與試藥

1260Agilent型HPLC儀（包括G14212A型紫外檢測器、G4220A型二元泵、G1316C型色譜工作站和手動進樣器），美國Agilent公司;KQ-500DE數控超聲波清洗器（功率500 W，頻率40 kHz），昆山市超聲儀器有限公司;DK-98-1數顯電熱水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司;LK-600A搖擺式高速萬能粉碎機，上海精勝科學儀器有限公司;BT214D萬分之一電子天平、CP225D十萬分之一電子天平，德國Sartorius公司。

蛻皮甾酮對照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號MUST-12122111，純度>98%）;甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純凈水。結合傳統采收時間和廣升麻物候期，于2016年9月10日-12月9日每隔10 d采挖樣品（編號1～10），每號地塊隨機取樣5株，共3個重復，取樣在樣地中具代表性，樣品經湖南中醫藥大學藥學院中藥資源教研室周日寶教授鑒定為菊科植物麻花頭Serratula chinensis S. Moore的干燥塊根。樣品來源信息見表1。

2? 方法與結果

2.1? 色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：甲醇-水（45︰55，V/V）;流速：1.0 mL/min;檢測波長：248 nm;柱溫：30 ℃;進樣量：10 μL。

2.2? 溶液制備

2.2.1? 對照品溶液

精密稱取蛻皮甾酮對照品20.48 mg，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為204.8 μg/mL的對照品溶液;用移液管量取5 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為102.4 μg/mL的對照品溶液，置4 ℃冰箱避光保存。

2.2.2? 供試品溶液

將廣升麻樣品烘干，粉碎，過40目篩。取各采收期粉碎樣品約0.5 g，精密稱定，分別置于250 mL圓底燒瓶中，加甲醇50 mL，稱定質量，75 ℃加熱回流提取60 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量。取一定量的提取液，過0.45 μm微孔濾膜，取續濾液，即得，置4 ℃冰箱避光保存。

2.2.3? 陰性對照溶液

取甲醇50 mL，置于250 mL圓底燒瓶中，稱定質量，75 ℃加熱回流提取60 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量。取一定量的提取液，過0.45 μm微孔濾膜，取續濾液，即得。

2.3? 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下對照品、供試品和陰性對照溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，色譜圖見圖1。在該色譜條件下，蛻皮甾酮與其他峰分離良好，分離度>1.5，理論塔板數以蛻皮甾酮峰計為8482，保留時間約8.4 min。其他成分對測定無干擾。

2.4? 線性關系考察

分別精密量取“2.2.1”項下對照品溶液2、4、6、8、10、20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=1869.3X+6.751（r=0.999 7）。結果表明，蛻皮甾酮的線性范圍為0.204 8～2.048 μg。

2.5? 精密度試驗

精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液10 μL，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次測定，記錄峰面積，結果蛻皮甾酮峰面積RSD=1.67%，表明儀器精密度良好。

2.6? 穩定性試驗

取7號供試品溶液適量，分別于室溫放置0、4、8、10、12、24 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，結果蛻皮甾酮峰面積RSD=1.98%，表明供試品溶液在室溫放置24 h內穩定性良好。

2.7? 重復性試驗

取7號樣品，按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量，結果蛻皮甾酮的平均含量為0.83%，RSD=1.23%，表明本方法重復性良好。

2.8? 加樣回收率試驗

精密稱取已知蛻皮甾酮含量的7號樣品粉末0.25 g，共6份，置于50 mL棕色量瓶中，分別加入“2.2.1”項下濃度為204.8 μg/mL的對照品溶液10 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表2。

2.9? 樣品測定

樣品采收后稱重，記錄各編號樣品干重、鮮重。按每株占地40 cm×40 cm，每畝3125株（666.7 m2÷0.16 m2×75%，排水溝占地25%），計算畝產量。前期試驗測得折干率（干重/鮮重）為31%，計算折干畝產量。樣品按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品蛻皮甾酮含量，結果見表3。不同采收期畝產鮮重動態變化見圖2，蛻皮甾酮含量動態變化見圖3。

由表3、圖2、圖3可知，不同采收期廣升麻產量及蛻皮甾酮含量呈動態變化：9月中旬至12月上旬，隨著采收期的推遲，廣升麻畝產鮮重呈現先上升后平穩的趨勢，10月下旬達到最大值，其后直至12月上旬基本保持穩定;蛻皮甾酮含量于9月中旬至12月上旬呈現先升高后緩降直至基本平穩的趨勢，10月底達峰值，11月上旬稍有下降后直至12月上旬基本趨于平穩，且較10月底前蛻皮甾酮含量處于較高水平。

3? 討論

本試驗進行了提取方法考察，對比超聲提取和回流提取樣品前處理方法，結果回流提取效率高;對比提取溶劑乙醇、甲醇，回流時間30、60 min，結果甲醇回流提取60 min樣品的蛻皮甾酮提取效率更高。因而最終選擇甲醇75 ℃回流提取60 min。本試驗對色譜條件中的流動相比例進行了優化，結果表明，以甲醇-水（45︰55，V/V）流動相，蛻皮甾酮分離效果好，與其他物質分離度良好，且方法學穩定，可用于廣升麻中蛻皮甾酮含量測定。

本研究對不同采收期廣升麻產量及蛻皮甾酮含量的變化規律進行比較研究。廣升麻畝產量于9月中旬至12月上旬呈先上升后平穩的趨勢，于10月下旬達峰值;蛻皮甾酮含量于9月中旬至12月上旬呈先上升后緩降直至平穩的趨勢，10月下旬達峰值。10月中旬至10月下旬，蛻皮甾酮含量呈急劇上升趨勢，且10月下旬畝產量已達峰值。綜合考慮2項指標，10月下旬即可開始采收，再結合廣升麻物候期及農藝性狀，初步確定廣升麻的最佳采收期為11月上、中旬，即植株地上部分枯萎時期，以保障畝產量、蛻皮甾酮含量均高，為合理采收廣升麻藥材提供了依據。

廣升麻的常規入藥部位為干燥塊根，在產地采收加工時多除去蘆頭及須根[12]。本研究發現，廣升麻須根數量多，相對產量較大，故進行了不同粗細廣升麻蘆頭、須根中蛻皮甾酮含量初步比較，結果同一時期采收的不同規格（直徑<2 mm、2 mm<直徑<6 mm、直徑>6 mm）的廣升麻蘆頭、須根中蛻皮甾酮含量差異無統計學意義（P>0.05），提示可進行擴大廣升麻入藥部位的相關研究，使其資源利用最大化。

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（收稿日期：2018-09-21）

（修回日期：2019-02-18;編輯：陳靜）