MyD88在骨巨細胞瘤中的表達及其與微血管密度的相關性

劉文博 李曉菊

骨巨細胞瘤是一種潛在惡性或介于良惡性之間的溶骨性腫瘤，約占原發骨腫瘤4%[1-2]。骨巨細胞瘤的腫瘤組織主要由多核巨細胞和基質細胞組成，來源于中胚葉細胞，易發生腫瘤轉移，預后相對比較差[3-4]。現代研究表明骨巨細胞瘤的發生與發展為多階段協同與多基因參與的結果，Toll樣受體4(Toll-like Receptor 4，TLR4)可通過識別病原相關的分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)及內源性配體，從而在天然免疫防御中發揮重要作用[5-6]。髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)是TLR4信號通路中的一個關鍵銜接分子，包括N端的死亡區(death domain，DD)、中間區域及C端的Toll區，其為一種胞質可溶性蛋白，在信號傳導中發揮重要作用[7-8]。微血管密度(microvessel density，MVD)是指一定體積的組織中微血管的數量，腫瘤組織的MVD不僅可定量地反映腫瘤血管生長情況，也能預測腫瘤的生物學行為[9-10]。本文具體探討了骨巨細胞瘤的MyD88病理學表達特征與微血管密度的相關性，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

研究時間為2016年2月到2018年7月，采用回顧性總結研究方法，選擇安康市中醫醫院診治的骨巨細胞瘤患者101例作為研究對象。納入標準：臨床與病理學資料完整；病理組織學證實為骨巨細胞瘤；患者簽署了對本研究的知情同意書；入院前未行任何治療；年齡20～80歲；研究得到了醫院倫理委員會的批準。排除標準：臨床與病理學資料缺項者；妊娠與哺乳期婦女；精神疾病患者。

101例患者中男性61例，女性40例；平均體重指數為(21.42±2.13)kg/m2；平均病程(1.82±0.82)年；年齡最小26歲，最大78歲，平均年齡(56.22±5.29)歲；組織學分化：高分化40例，低分化40例，中分化21例；臨床分級：Ⅰ級60例，Ⅱ級30例，Ⅲ級11例；發病部位：肱骨9例，橈骨21例，尺骨20例，髂骨10例，股骨30例，脛骨10例，腓骨1例；轉移情況：淋巴結轉移33例，肺轉移20例，肝轉移11例。

1.2 MyD88免疫組化分析

兔抗人MyD88多克隆抗體來自美國Santa Cruz公司，免疫組化試劑盒來自北京中杉金橋生物技術有限公司。選擇所有患者的瘤組織標本與瘤旁組織標本，瘤旁組織標本為距瘤腫邊緣2 cm以內細胞組織為瘤旁組織。選擇標本進行10%福爾馬林固定，24 h內常規脫水、浸蠟、包埋。在顯微鏡100倍視野下觀察切片，每張切片隨機選擇5個區域，根據棕黃色陽性信號的強弱和面積判斷結果。MyD88于細胞質中顯示陽性信號，MyD88的陽性細胞百分比得分為0～4分(0分：陰性或基本不著色定；1分：≤10%；2分：>10～30%為；3分：>30～50%；4分：>50%)，0～1分判定為陰性，2～4分判定為陽性。

石蠟切片標本經染色后由兩位病理科醫生獨立閱片，共同判斷組化結果。

1.3 MVD計數方法

在光學顯微鏡下觀察所有組織標本免疫組化標記CD34、CD31的內皮細胞分布，CD31、CD34的陽性染色為棕黃色色素沉積，定位于血管內皮細胞胞膜和胞質中。MVD計數方法參照文獻[11]，每個高倍鏡下視野面積為0.474 mm2，每平方毫米的血管數為MVD。

1.4 統計方法

選擇SPSS 20.00軟件進行分析，計數數據、計量數據采用例數或者百分比、均數±標準差表示，對比采用卡方分析與t檢驗，相關性分析采用直線相關分析，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 Myd88陽性表達率對比

MyD88在瘤旁組織中的陽性表達率為9.9%(10/101)，在瘤組織中的陽性表達率為66.3%(67/101)，對比差異有統計學意義(χ2=58.187，P=0.000)。

2.2 Myd88陽性表達率與臨床病理資料的相關性

在瘤組織中，MyD88陽性表達與臨床分級、分化情況、淋巴結轉移、肺轉移、肝轉移都有顯著相關性(P<0.05)。見表1。

表1 Myd88在骨巨細胞瘤中的表達與臨床病理資料的相關性(例，%)

2.3 MVD對比

瘤組織中的CD31-MVD與CD34-MVD值都顯著高于瘤旁組織(P<0.05)。見表2。

表2 不同組織的MVD值對比(個，

2.4 相關性分析

在瘤組織中，直線相關分析顯示MyD88的陽性表達率與CD31-MVD、CD34-MVD值都呈顯著正相關性(P<0.05)。見表3。

表3 骨巨細胞瘤的Myd88病理學特征與微血管密度的相關性(n=101)

3 討論

骨巨細胞瘤是一種常見的骨原發性腫瘤，早期多為良性腫瘤，但是隨著病程的發展，惡變的幾率顯著增加[12]。骨巨細胞瘤的病變主要見于骨骺與四肢，較大的病灶可擴展到干骺端，甚至骨干[13]。骨巨細胞瘤的復發率比較高，少數患者會發生肺轉移與肝轉移[14]。

當前骨巨細胞瘤的具體發病機制還不明確，相關的信號通路作用機制也尚待闡明[15]。TLR4/MyD88 信號通路在許多臟器的腫瘤組織中有表達，MyD88在二乙基亞硝酸胺誘導肝癌發生中起著關鍵性的促進作用，具有促進腫瘤發展的關鍵作用[16]。本研究顯示MyD88在瘤旁組織中的陽性表達率為9.9%，在瘤組織中的陽性表達率為66.3%，對比差異有統計學意義(P<0.05)，表明MyD88在骨巨細胞瘤中呈現高表達狀況。

MyD88是TLRs通路中共有一個關鍵的轉導分子，在誘導炎癥細胞因子中起著重要作用，其能夠引起多種細胞因子的釋放，促進骨巨細胞瘤細胞的增殖和抗凋亡作用，從而導致骨巨細胞瘤的發生、發展、侵襲及轉移[17]。本研究顯示在瘤組織中，MyD88陽性表達與臨床分級、分化情況、淋巴結轉移、肺轉移、肝轉移都有顯著相關性(P<0.05)，提示MyD88陽性表達可增加骨巨細胞瘤的惡性程度，提高其轉移浸潤性。最近研究證明表達MyD88的腫瘤細胞還可主動攻擊與之接觸的免疫活性細胞，肝癌細胞可通過表達MyD88傳導信號殺傷浸潤的淋巴細胞[18]。

本研究顯示瘤組織中的CD31-MVD與CD34-MVD值都顯著高于瘤旁組織(P<0.05)。在腫瘤的生長過程中，腫瘤細胞可分泌大量的血管生長因子，促使腫瘤新生血管的生長。原發腫瘤可通過腫瘤血管從宿主獲取營養和氧氣，也通過血管向宿主輸送轉移細胞，導致腫瘤轉移，為此MVD值能反映腫瘤狀況，且MVD與腫瘤的轉移復發有很好的相關性[19-20]。

MyD88陽性的腫瘤細胞還可主動攻擊與之接觸的免疫活性細胞，同時腫瘤也可以通過MyD88的高表達被動地逃避機體免疫監控[21]。腫瘤血管形成是腫瘤生長、浸潤及轉移的重要條件，正常細胞是非血管新生性的，在癌變過程中，需要經過從無血管新生性到血管新生性的表型轉變[22]。相關研究也顯示CD31標記MVD高的患者預后較差，提示腫瘤血管形成在骨巨細胞瘤的發病中起到重要作用[23]。本研究直線相關分析顯示瘤組織的MyD88陽性表達率與CD31-MVD、CD34-MVD值都呈顯著正相關性(P<0.05)。相關研究表明MyD88傳導多種信號通路介導的促進炎癥和致癌作用，從而引發腫瘤細胞生長、分化、增生、腫瘤免疫抑制細胞凋亡，從而調節MVD值[24-25]。

總之，MyD88在骨巨細胞瘤中呈現高表達狀況，與骨巨細胞瘤的臨床病理特征有一定相關性，與MVD有顯著相關性。