Sp1和miR-92b在口腔癌組織中的表達及與其臨床病理特征的關系

王曉庚 劉 林 左 健 張非煜 李若萱

近年來，口腔癌病例不斷增加，并逐漸趨于年輕化，由于口腔癌患者細胞生長分裂速度較慢，擴散轉移晚，往往患者確診時已處在癌癥中晚期，雖然臨床上對患者予以外科手術及聯合藥物治療可取得令人滿意的療效，但其預后生存情況仍然不樂觀[1]。口腔癌患者的，尤其對于已經發生遠處轉移的患者，治療仍然十分困難[2-3]。因此，積極探討預后評估指標具有重要意義，本文探討Sp1和miR-92b在口腔癌組織中的表達與臨床病理特征的關系分析，取得滿意效果，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2014年1月至2018年1月行手術切除的口腔癌組織60例作為研究組；另選取癌旁正常口腔組織60例作為對照組。納入標準：患者年齡>18歲，口腔癌均經病理及組織學檢查確診，所有病例均具有完整的臨床病理資料；排除標準：排除合并其他惡性腫瘤，如胃癌、食管癌、肝癌等，排除全身系統性疾病；研究組男性38例，女性22例；年齡為28～72歲，平均年齡為(63.14±5.18) 歲;腫瘤直徑平均為(2.25±0.16)cm。癌旁正常口腔組織均腫瘤邊緣距離5 cm以上，平均(6.84±1.12)cm，均經病理證實無腫瘤細胞浸潤，男性39例，女性21例，年齡為26～75歲，平均年齡為(63.25±4.92) 歲，兩組年齡、性別等基本資料上相比差異無統計學意義，具有可比性(P>0.05)。

1.2 試劑與方法

試劑：顯色劑為 DAB(廠家：北京中杉金橋生物技術公司) ，miR-92b inhibitor(廠家銳博生物)兔抗人Sp1單克隆抗體(廠家：北京博奧生物公司)，PV9000 免疫組織化學二抗試劑盒(廠家：上海嶸葳達實業有限公司，生產批號:11719386001)。;Lipofectami-ne TM2000轉染試劑盒(Invitrogen)。

采用 SP 法免疫組織化學染色檢測口腔癌組織Sp1和miR-92b水平：先采用10%甲醛將組織進行固定后，用石蠟包埋，石蠟切片常規脫蠟至水，抗原熱修復，采用山羊血清進行封閉，并滴加一抗、二抗，進行HE、DBA染色，復染，脫水，然后在顯微鏡下觀察。

1.3 陽性判斷

癌組織陽性：在腫瘤細胞胞質或胞核中呈現棕褐色或棕黃色顆粒者。癌旁正常口腔組織：0 分：無陽性細胞；1 分：陽性細胞所占比例30.0%以下；2 分：陽性細胞所占比例30.0%或以上；根據陽性細胞表達強弱分為:0 分：未出現著色；1 分：淺黃色或者黃色記為；2分：棕黃色；3分：棕褐色。將兩項的評分相乘，0～1分為陰性，2～6分為陽性。

1.4 觀察指標

回顧性分析研究對象的臨床病例特征。兩組Sp1和miR-92b在組織中的表達差異，并比較不同淋巴結轉移情況、分化程度及臨床分期組織Sp1和miR-92b表達水平；采用Logistic回歸分析口腔癌組織中Sp1和miR-92b表達水平與臨床病理特征的關系。

1.5 統計學方法

應用SPSS 19.0統計學軟件分析，比較計數資料采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組組織中Sp1和miR-92b表達情況比較

Sp1和miR-92b在研究組中的陽性表達率分別為80.00%(48/60)、73.33%(44/60)，明顯高于對照組陽性表達率[8.33%(5/60)、11.67%(7/60)]，差異有統計學意義(P<0.05)。如表1所示。

表1 兩組組織中Sp1和miR-92b表達情況比較/%

2.2 不同臨床病理特征口腔癌組織中Sp1和miR-92b表達情況

口腔癌組織中腫瘤分化類型中～高分化與低～未分化Sp1和miR-92b表達均無統計學意義(P>0.05)；有36例出現淋巴結轉移，其中91.67%Sp1表達陽性，86.11%miR-92b表達陽性。40例臨床分期Ⅲ+Ⅳ，其中90.00%Sp1表達陽性，85.00%miR-92b表達陽性，差異具有統計學意義(P<0.05)，如表2所示。

表2 不同臨床病理特征口腔癌組織中Sp1和miR-92b表達情況/%

注：a為與同組不同分化程度相比，χ2=1.79，1.17，P>0.05；b為與同組淋巴結轉移相比，χ2=5.94，7.51，P<0.05；c為與不同臨床分期相比，χ2=5.74，8.35，P<0.05。

2.3 Sp1和miR-92b在口腔癌組織中的表達與其臨床病理特征的關系

采用Logistic回歸分析顯示，口腔癌組織中Sp1和miR-92b表達水平與臨床病理特征有關(P<0.05)，如表3所示。

表3 口腔癌患者組織中Sp1和miR-92b水平與臨床病理特征的關系

3 討論

口腔癌是1種由多種因素參與的頭頸部較常見的惡性腫瘤之一，而其中主要影響因素包括飲酒、吸煙、營養不良、病毒感染、局部刺激慣和飲食習等，其中飲酒和吸煙的危險性最大[4-6]。最近有學者提出，口腔癌的發生、發展、轉移及預后等各個方面與免疫相關的細胞因子及其相關的調節因子密切相關[7]。

本研究結果臨床分期越晚和淋巴結轉移Sp1和miR-92b越呈現高陽性表達，Sp1和miR-92b水平表達與口腔癌患者臨床病理特征密切相關。Sp1是廣泛存在于細胞核中的轉錄因子中的一員，在腫瘤的發生發展過程中Sp1起著重要的調控作用，其在腫瘤患者中均有較高的陽性表達率[8-9]；microRNA(miRNA) 是1種以特異的序列調控基因表達的小非編碼RNA，其參與細胞增殖、分化、凋亡等多種細胞生命活動過程[10]。已有研究報道，miR-92b在腫瘤細胞中表達顯著高于正常，其扮演著致癌基因角色，且表達越高腫瘤的浸潤性和轉移性越強[11]。本研究結果發現口腔癌組織Sp1陽性表達率80.00%(48/60)和miR-92b陽性表達率73.33%(44/60)均明顯高于癌旁正常口腔組織，與上述結論一致。侵襲轉移是導致惡性腫瘤難以治愈的關鍵生物學特性之一[12]。既往有研究表明[13]，異常表的炎癥因子達會使同源細胞的致癌潛能提高，也使會癌細胞的轉移能力提高。陳峰等[14]研究發現，通過抑制Sp1和miR-92b水平可抑制癌細胞的生成和轉移，同時使癌細胞的侵襲轉移能力降低。

綜上所述，Sp1和miR-92b在口腔癌組織中的陽性表達率高，其表達水平與腫瘤分期及淋巴結轉移密切相關，檢測Sp1和miR-92b對口腔癌預后的評估具有重要意義。