高效液相色譜法測定復方醋酸曲安奈德溶液中2種抗氧劑含量

王彩媚，伍偉聰，王 淼

（廣東省藥品檢驗所，廣東 廣州 510700）

復方醋酸曲安奈德溶液為皮膚科類藥品，臨床用于治療神經性皮炎、慢性濕疹、結節性癢疹、皮膚淀粉樣變、疥瘡結節等。某些復方醋酸曲安奈德溶液處方中以3-叔丁基-4-羥基苯甲醚（BHA）和2，6-二叔丁基對甲酚（BHT）為抗氧劑，為控制制劑質量，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測定復方醋酸曲安奈德溶液中兩者的含量。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測器、紫外檢測器（美國Agilent公司）；CP224D型電子分析天平（德國Sartorius公司）。

圖1 高效液相色譜圖

1.2 試藥

復方醋酸曲安奈德溶液（A公司，3批，規格為每瓶15 mL）；BHA對照品（美國 Macklin公司，批號為C10013313，含量大于98%）；BHT對照品（國藥集團化學試劑有限公司，批號為F20100917，含量大于98%）；甲醇為色譜純，乙醇為分析純，水為去離子水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Merck RP-18 Endcapped柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脫（10 min時 40%A，10～40 min時 40%A→90%A，40～50 min時 90%A，50～51 min時 90%A→40%A，51～60 min 時 40%A）；流速：1.0 mL ／min；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL[1-2]。

2.2 溶液制備

取BHA和BHT對照品各10mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加85%乙醇溶解并定容，搖勻，即得混合對照品溶液。取樣品作為供試品溶液。取85%乙醇（本品的處方溶劑）作為陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗：取2.2項下對照品溶液、供試品溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，見圖1。理論板數以BHA和BHT峰計均大于5 000，分離度均大于1.5，基線分離良好。

專屬性試驗：取2.2項下對照品溶液、陰性對照品溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，見圖1。結果陰性對照品溶液在與混合對照品溶液保留時間相同處無干擾峰，表明方法專屬性良好。

線性關系考察：取BHA及BHT對照品各適量，精密稱定，加85%乙醇溶解，制成BHA和BHT質量濃度均分別為 0.04，0.08，0.10，0.12，0.16，0.20 g ／L 的系列溶液，精密量取10 μL，按擬訂色譜條件進樣測定，以峰面積為橫坐標（X）、質量濃度為縱坐標（Y，μg／mL）進行線性回歸，得BHA和BHT的回歸方程分別為Y1=0.1219X1+1.257 5（r1=0.999 6）、Y2=0.215 3X2+1.331 6（r2=0.999 7）。結果表明，BHA 和 BHT質量濃度均在0.04～0.20 g／L范圍內與峰面積線性關系良好。

檢測限與定量限考察：精密量取2.2項下對照品溶液各適量，倍比稀釋，并按擬訂色譜條件進樣測定，以信噪比（S／N）10∶1和3∶1分別計算定量限與檢測限。結果BHA和BHT的定量限分別為0.2μg／mL和 0.4μg／mL，檢出限分別為 0.04 μg ／mL 和 0.10 μg ／mL。

精密度試驗：取2.2項下對照品溶液各適量，按擬訂色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果BHA和 BHT峰面積的RSD分別為 0.2%和 0.1%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.2項下供試品溶液適量，分別于室溫下放置 0，2，4，8，10，19 h 時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果BHA和BHT峰面積的RSD分別為0.3%和0.4%（n=6），表明供試品溶液室溫放置19 h內基本穩定。由于85%乙醇揮發性強，建議8 h內完成檢測。

重復性試驗：精密量取同一批樣品適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果BHA和BHT平均含量分別為0.09g／L和 0.10 g／L，RSD分別為0.4%和0.9%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的樣品2 mL，共9份，分別加入低、中、高質量濃度的BHA和BHT對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表1。

2.4樣品含量測定

取3批樣品各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，平行3次，記錄峰面積，并計算樣品含量。結果3批樣品中BHA 含量均為0.09g／L，BHT含量均為 0.10g／L。

3 討論

根據復方醋酸曲安奈德溶液的處方溶劑性質及BHA和BHT的結構性質，可選擇HPLC法和氣相色譜法進行分析測定[3-4]，由于前法使用更普遍，分析更簡單，更經濟，故最后選擇HPLC法進行測定。根據BHA和BHT的結構性質首選C18色譜柱；從環保角度流動相首選甲醇-水系統，經試驗，BHA和BHT在甲醇-水系統中能得到較好的分離度和峰形；為將處方中極性較大的成分如水楊酸等先沖洗出系統，故設計甲醇-水梯度洗脫；流速采用常用流速1.0 mL／min；柱溫選擇高于藥典規定室溫（25℃），設定為30℃；利用甲醇-水系統經過全波長掃描，BHA和BHT在280 nm波長處均有較大吸收；且供試品溶液與對照品溶液中BHA和BHT保留時間一致的色譜峰紫外吸收圖譜一致，說明無干擾峰，故設定波長均為280 nm。該樣品性狀為澄清液體，直接濾過后測定發現，峰面積和峰形均在合理范圍內，設定直接取樣品作為供試品溶液。配制對照品選用該樣品處方中的85%乙醇作為溶劑。

表1 加樣回收試驗結果（n=9）

綜上所述，本研究中所建方法的精密度、穩定性、重復性均較好，可用于測定復方醋酸曲安奈德溶液中BHA和BHT的含量。