天麻醇提取物對(duì)模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的改善作用*

馮 晉，何芳雁，夏霜莉，鄭秋合，代 蓉

（云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，云南 昆明 650000）

天麻，又名赤箭，作為我國名貴中藥，可作為保健食品的材料，并進(jìn)入了食藥物質(zhì)目錄[1]。《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“赤箭辛，溫，無毒，久服益力氣，長陰肥健，輕身增年。”本課題組前期研究表明，天麻乙酸乙酯提取物可改善模型小鼠學(xué)習(xí)能力，降低腦內(nèi)膽堿酯酶的活性[2]，提示天麻可輔助改善記憶[3]。本實(shí)驗(yàn)中對(duì)天麻醇提取物在改善記憶方面的效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)[3]。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、儀器與試藥

動(dòng)物：清潔級(jí)昆明種小鼠100只，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半。由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（湘）2019-0004。標(biāo)準(zhǔn)條件飼養(yǎng)，自然進(jìn)食、飲水，適宜溫度、濕度，人工黑暗／光照交替。

儀器：TM-Vision型Morris行為學(xué)水迷宮（成都泰盟軟件有限公司）。

試藥：天麻醇提物（自制）；吡拉西坦片（杭州民生藥業(yè)有限公司，批號(hào)為 20171204，規(guī)格為每片 0.4 g）；氫溴酸東莨菪堿注射液（遂成藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為2017110908，規(guī)格為每支 1 mL ∶0.3 mg）；氯霉素注射液，國藥集團(tuán)容生制藥有限公司，批號(hào)為151108，規(guī)格為每支 0.25 g ∶2 mL）；0.9% 氯化鈉注射液（廣西裕源藥業(yè)有限公司，批號(hào)為P15070303，規(guī)格為每瓶100 mL∶0.9 g）；無水乙醇為分析純，水為蒸餾水。

1.2 方法

分組、給藥及建模：將100只小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A組，等體積蒸餾水），模型組（B組，等體積蒸餾水），吡拉西坦組（C 組，700 mg／kg），天麻醇提取物高、低劑量組（D1組、D2組，1.0，0.4 g ／kg），灌胃給藥，灌胃體積為每10 g體質(zhì)量0.2 mL，每天1次，連續(xù)30 d。灌胃結(jié)束第2天開始，B組，C組、D1組、D2組大鼠均先后予以腹腔注射東莨菪堿（1 mg ／kg）、氯霉素（200 mg ／kg），以及灌胃20%乙醇（每10 g體質(zhì)量0.2 mL），依次復(fù)制小鼠記憶獲得、鞏固和再現(xiàn)障礙模型[4]，均每天1次，連續(xù)6 d，間隔5 d再進(jìn)行下個(gè)建模。A組小鼠腹腔注射等體積0.9%氯化鈉注射液和灌胃給予等體積蒸餾水。

Morris水迷宮試驗(yàn)[5-7]：行為學(xué)檢測與建模同時(shí)開始，共進(jìn)行6 d，第1～2天為訓(xùn)練期，第3～5天為測試期，以小鼠平均游泳時(shí)間作為衡量其學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)，第6天為空間探索測試期，判斷小鼠學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知能力。測定小鼠120 s內(nèi)的逃避潛伏期和空間搜索距離，計(jì)算滯留時(shí)間、搜索距離百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)量資料以表示，行t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)記憶獲得障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶行為的影響

與A組比較，B組小鼠逃避潛伏期、搜索距離均顯著延長，滯留時(shí)間百分比、搜索距離百分比均顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）；與B 組比較，C 組、D1組、D2組逃避潛伏期和搜索距離均顯著縮短（P＜0.01或P＜0.05）。詳見表1。

表1 天麻醇提取物對(duì)記憶獲得障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶行為的影響（X ± s，n=10）

2.2 對(duì)記憶鞏固障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶行為的影響

與A組比較，B組小鼠逃避潛伏期、搜索距離均顯著延長，滯留時(shí)間百分比、搜索距離百分比均顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）；與 B 組比較，C 組、D1組、D2組小鼠逃避潛伏期和搜索距離均顯著縮短，C組和D1組小鼠滯留時(shí)間百分比和搜索距離百分比均顯著升高，P＜0.01或P＜0.05。詳見表 2。

表2 天麻醇提取物對(duì)記憶鞏固障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶行為的影響（X ± s，n=10）

2.3 對(duì)記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶行為的影響

與A組比較，B組小鼠逃避潛伏期顯著延長（P＜0.01）；與B組比較，C組和D1組小鼠逃避潛伏期顯著縮短（P＜0.01）。詳見表 3。

表3 天麻醇提取物對(duì)記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶行為的影響（X ± s，n=10）

3 討論

學(xué)習(xí)和記憶的基本過程可分為獲得、鞏固、再現(xiàn)3個(gè)階段。東莨菪堿作為M膽堿受體拮抗劑，可降低大腦皮層和海馬膽堿能系統(tǒng)活性，阻礙記憶的獲得[8]；蛋白質(zhì)是長期記憶形成的內(nèi)在基礎(chǔ)，記憶鞏固與腦內(nèi)蛋白質(zhì)的合成密切相關(guān)，氯霉素是蛋白質(zhì)合成抑制劑，可干擾記憶鞏固過程；乙醇為中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制劑，可導(dǎo)致記憶再現(xiàn)障礙。本實(shí)驗(yàn)中采用東莨菪堿、氯霉素、乙醇分別建立小鼠學(xué)習(xí)記憶（獲得、鞏固和再現(xiàn)）障礙模型。

Morris水迷宮是檢驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力最常用的方法，可評(píng)價(jià)空間學(xué)習(xí)記憶能力[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，天麻醇提取物能縮短模型小鼠的逃避潛伏期和搜索距離，延長滯留時(shí)間百分比和搜索距離百分比，提示其對(duì)學(xué)習(xí)記憶過程的不同階段、不同環(huán)節(jié)均有一定改善作用。

本課題組前期對(duì)天麻藥材粉進(jìn)行了安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示，天麻醇提取物按最大給藥量5 g／kg灌胃給予實(shí)驗(yàn)小鼠，未發(fā)現(xiàn)與受試物相關(guān)的毒性作用，相當(dāng)于成人用量的140倍。故本實(shí)驗(yàn)中設(shè)置高劑量組為人體推薦量的25倍，即1.425 g／kg，低劑量組為人體推薦量的 10 倍，即 0.57 g／kg，經(jīng)換算，分別為 1.0，0.4 g／kg。

綜上所述，天麻醇提取物對(duì)模型小鼠的學(xué)習(xí)、記憶具有一定改善作用。