杭州地區正常人群CYFRA21-1臨床參考區間研究

楊海明 丁禹 夏駿 冷建杭*

血清細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)來源于上皮細胞胞質骨架蛋白,作為角蛋白19的可溶性片段,CYFRA21-1在腫瘤細胞壞死破裂及受蛋白酶降解時釋放增多,進入組織和血液,作為晚期非小細胞型肺癌(NSCLC)療效評價指標具有重要的臨床價值,CYFRA 2l-1水平升高幅度以鱗癌最明顯[1],是NSCLC的首選標志物.其對NSCLC的早期診斷、療效監測和預后判斷均有重要意義,含量與病情嚴重程度相關[2].杭州各大醫院的CYFRA21-1參考區間大多采用配套試劑盒說明書上所提供的參考區間,但各個醫院間由于使用儀器不同,所對應的參考區間差異也較大,較少有醫院建立符合本實驗室參考范圍.醫院實驗室信息系統存儲有大量檢測數據,國外文獻報道了多種基于現有數據建立參考區間的方法,如EM算法[3]、分段擬合[4]、線性回歸[5]等.但國內鮮有這方面的報道[6].為確定符合本實驗室的血清CYFRA21-1參考范圍,更好地應用于臨床.作者統計分析杭州市第一人民醫院體檢中心21821例健康人群血清CYFRA21-1,采用間接法建立參考區間,現報道如下.

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析杭州市第一人民醫院自2015年7月至2016年7月間21821例健康體檢人群的血清CYFRA21-1測定結果.其中男14815例,年齡15~98歲,平均(55.41±15.65)歲;女7006例,年齡15~95歲,平均(49.39±15.71)歲.所有患者均于早晨(7~9時)空腹采集靜脈血3ml于血清分離管中,2h內分離血清,4h內上機檢測.經過篩查,剔除體檢報告中提示觀察對象體檢結果異常的人群,剩余所有觀察對象均體格檢查正常,排除晚期的胰腺癌、各類腫瘤疾患及肺部良惡性疾病.本研究得到了杭州市第一人民醫院醫學倫理委員會批準.

1.2 方法 實驗儀器為羅氏cobas 601全自動電化學發光分析儀,使用配套試劑盒、定標液,質控品采用美國BIO-RAD公司生產的腫瘤標記質控物,并按照儀器的標準操作規程進行操作分析.使用Andersondarling法對數據進行正態性分析.使用Tukey法(杜奇法)對各數據進行離群值剔除,再重新使用Anderson-darling法對數據進行正態性分析.生物參考區間建立和驗證使用非參數法建立參考區間.

1.3 統計學處理 采用minitab16.0軟件.完成杜奇法剔除離群值,獲取參考區間,參考值區間用單側界值95%區間范圍表示.

2 結果

2.1 數據分布分析和處理 對所收集數據使用Anderson-darling法檢驗,得出數據呈非正態分布(P<0.05).因此,將數據使用Y=lnX公式進行正態化處理,使其呈正態分布,見圖1.

圖1 Y=lnX正態化后總體數據分布圖

2.2 剔除離群值 使用杜奇法,將正態化處理后的數據確定下四分位數(Q1)、上四分位數(Q3)、四分位間距(IQR).剔除(Q1-1.5IQR)~(Q3+1.5IQR)之外的數據.剔除數值在-0.0980~0.8456之外的對應樣本.剔除后剩余樣本數為21563例.

2.3 CYFRA21-1檢測結果分析 年齡≤70歲時,各年齡段中位數差異不大,但年齡>70歲時,中位數明顯較≤70歲時增大,因此,建議 CYFRA21-1檢測結果根據年齡分為兩組.用雙樣本Kruskal-Wallis檢驗不同年齡組間性別差異無統計學意義(P>0.05),故無需按性別分組.見表1.

表1 不同年齡、性別健康人群電化學發光法CYFRA21-1檢測結果分析(μg/L)

2.4 參考區間的建立與驗證 用非參數法對剔除離群值數據以單側界值95%作為參考區間的上限,年齡≤70歲上限值為4.3μg/L,年齡>70歲時上限值為5.7μg/L.按照WS/T402要求[7],對于某些重要項目的參考區間驗證,可以加大參考個體的樣本量(n=60),將其測得值與參考區間的原始參考值相比較.按篩選標準得到120例參考個體,其中年齡≤70歲的60例,年齡>70歲的60例.年齡≤70歲組60例參考個體只有3例測定值超出上述間接法測定的參考區間,驗證通過.年齡>70歲組60例參考個體也只有3例測定值超出上述間接法測定的參考區間,驗證通過.

3 討論

CYFRA21-1存在于許多正常和腫瘤上皮細胞的細胞質中,可溶性CYFRA21-1在血清和其他體液中被廣泛應用于多種腫瘤,尤其是非小細胞肺癌(NSCLC).而且在食管癌患者中CYFRA21-1的水平均高于健康者[8],在惡性胸腔積液的患者中,CYFRA21-1結果也有升高[9].

實驗室現使用參考區間為試劑供應商羅氏公司提供的參考范圍為≤3.3μg/L,但在臨床工作中發現部分無臨床癥狀和體征的健康體檢者其CYFRA21-1比正常參考值稍高,造成臨床醫生、體檢者對檢驗結果的質疑.因此需要實驗室建立自己的參考區間.

美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)和國際臨床化學聯合會(IFCC)共同修訂的指南《臨床實驗室如何確定和建立生物參考區間,批準指南-第3版,EP28-A3C》指出,國內外推薦選取足夠參考樣本(≥120例)并建立排除標準的直接法是建立生物參考區間的標準方法,同時指出允許臨床實驗室通過小樣本或統計學方法建立參考區間,必須通過驗證[10].但直接法建立參考區間操作過程復雜、耗時長、成本高,難以大規模推廣至全部檢驗項目及各級實驗室.

為建立符合實際情況的血清CYFRA21-1的參考范圍,本實驗采用間接法,以21821例健康成人為參考個體,剔除離群值后剩余21563例,觀察CYFRA21-1變量指標,根據所得樣本數據,采用非參數法以單側界值95%作為參考區間的上限,建立CYFRA21-1檢測結果的參考區間:當年齡≤70歲參考區間為0~4.3μg/L,當年齡>70歲時參考區間為0~5.7μg/L.

目前有研究[11]表明,采用非參數法計算中國漢族健康成人的參考區間為0~4.47μg/L,由于上述研究中未按照年齡區分不同參考范圍,因此與本研究參考范圍略有差異.總之,使用間接法確立參考區間是一種相對簡便和經濟的方法,尤其適合實驗室自建參考區間[12].