淺談弓形蟲病免疫診斷技術

丁治南

摘要：弓形蟲病是一種寄生蟲病。弓形蟲可隨著血液流動到各部位，從而引發多種疾病，且感染率高，致死率高，是危害動物和人體健康的重要疾病。因此，本文將簡單介紹弓形蟲病的幾種免疫診斷技術，以期為準確預防和治療弓形蟲病提供理論依據。

關鍵詞：弓形蟲病;免疫;診斷

弓形蟲是一種專性的細胞內寄生單細胞真核生物（特別是一種無融合生殖的真核生物），可引起弓形蟲病。在全世界發現的弓形蟲幾乎能感染所有的溫血動物，但貓（如家貓）是唯一已知的寄生蟲可能進行有性繁殖的確定宿主。弓形蟲病是指由于感染弓形蟲導致動物發燒、呼吸受阻、食欲下降等一系列臨床癥狀，嚴重影響動物生長性能的寄生蟲病。弓形蟲病是一種人畜共患病，感染率高，感染嚴重時半個月內就會出現死亡。本文主要對弓形蟲病的免疫診斷技術進行簡述。

1弓形蟲病的危害

弓形蟲寄生在豬的細胞中，可隨著血液而流動，到達機體的大腦、肝臟等各個部位，引發各種疾病[1]。感染弓形蟲病的豬一周內的癥狀和豬瘟十分相似，體溫升高，臟器出血，半個月內得不到正確及時的治療會導致病豬死亡。對病豬的淋巴結、肝臟以及脾臟進行染色，鏡檢，均發現了弓形蟲。死亡后的病豬作為新的感染源，其糞便或感染器官被鳥類或其他動物啄食后也會被感染，若不及時處理感染病豬，感染范圍越擴越大，情況不容樂觀。孕婦感染弓形蟲病會通過胎盤傳染給胎兒，降低胎兒的免疫力，引發各種疾病，嚴重時可導致流產，胎兒畸形，危害極大。因此，必須加強弓形蟲病的診斷技術，并采取措施提前預防弓形蟲病的感染。

2弓形蟲病的診斷方式

目前實驗室和臨床上使用的弓形蟲病的診斷方式有鏡檢法、動物接種法、影像學診斷法、免疫診斷法和比較先進的基于弓形蟲遺傳物質的分子生物學診斷法等。其中，使用最為廣泛的屬免疫診斷法。

3弓形蟲病免疫診斷技術

弓形蟲病免疫診斷技術主要依靠的是免疫學研究，抗原遇到相應的抗體時發生反應，再經過染色或者其他方式表示弓形蟲病的存在[2]。本文將介紹以下6種弓形蟲免疫診斷技術：

3.1弓形蟲病的染色試驗

染色試驗是診斷弓形蟲病的經典方法之一[3]。染色試驗的原理是抗原與血清中的抗體結合，從而破壞弓形蟲體表膜結構，使之可以被美藍染色。該方法操作簡單，不需要借助儀器，結果準確，使用范圍較廣，缺點是需要活的寄生蟲，存在局限性。

3.2免疫結合技術

采用免疫結合技術可檢測出人和動物血清中循環弓形蟲抗原。用硝酸纖維素紙直接點樣檢測弓形蟲抗原，是一種靈敏的弓形蟲抗原檢測方法。從實驗感染弓形蟲RH株的小鼠和家兔中采集血清樣本，從感染第2天開始收集的小鼠血清和感染后2周和3周的家兔血清中檢測到循環弓形蟲抗原。該方法靈敏度高，重現性好，操作簡便。它避免了特殊設備的需要，而大部分必要的試劑都可以在市場上買到。這種方法的主要缺點是可疑結果的比例很高。

3.3改良凝集試驗

弓形蟲發育到速殖子的階段時，將其用福爾馬林浸泡固定，并吸取微量加到含有稀釋待檢血清的測試板上。如果速殖子和血清形成一層薄片狀物質，漂浮在測試孔上面，測試結果為陽性;若是速殖子和血清形成顆粒狀物質，沉在底部，測試結果則為陰性[4]。

3.4間接熒光抗體試驗

帶有熒光的抗體單獨不會發出熒光，和抗原特異性結合后才能激發熒光。間接熒光抗體實驗是將發熒光的特異性抗體與速殖子結合后放在顯微鏡下是否能觀察到熒光，以此來診斷機體是否感染了弓形蟲病。實驗首先將沒有活性的速殖子進行培養，重新獲得活力后方可繼續實驗。

3.5親和力試驗

動物感染弓形蟲分為慢性感染和急性感染，剛感染弓形蟲時自身免疫系統發生免疫應答產生的抗體親和力較弱，隨著機體感染時間的延長，抗體的親和力會越來越強，與抗原的結合力也隨之增強。因此，通過測定親和力可以判斷感染的時間。但是這種方法精確度不高，參考性較低。

3.6免疫印跡鑒定試驗

用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離弓形蟲蛋白，然后用電泳印跡法將其轉移到硝酸纖維素膜上。用以前已知的弓形蟲抗體水平的人血清檢測免疫反應性多肽。以重鏈特異性、過氧化物酶標記的抗人免疫球蛋白為指示性抗體，分別鑒定lgG和lgM反應多肽。弓形蟲抗體能與Mr-27，000-670，000的幾種抗原反應，而弓形蟲特異性lgM似乎只能檢測到少數多肽。以lgM反應多肽為主的Mr為35，000。

除此之外，基于核酸技術的現代生物學診斷方法為弓形蟲病診斷和治療提供了一種新思路[5]。

目前用于診斷弓形蟲病的免疫學技術比較多，如比較經典的染色試驗，精確度高的免疫結合技術等，每種技術都有其優缺點和使用局限性，在具體操作時，應按需選擇，提高弓形蟲病診斷的準確率。

參考文獻：

[1]金春梅，劉超，梁晚楓，等.豬弓形蟲病的實驗室診斷與治療[J].安徽農業科學，2015，43（8）：100-101

[2]馮嘉軒，趙永坤，孟繁平，等.弓形蟲病診斷方法研究進展[J].傳染病信息，2016，29（3）：139-143

[3]羅瀟，張莉，呂艷，等.我國弓形蟲病誤診現狀及其研究進展[J].中國病原生物學雜志，2018，13（5）：556-558

[4]郭朝剛.弓形蟲病免疫診斷技術研究進展[J].甘肅畜牧獸醫，2011，41（2）35-38

[5]王朝蘭，姚湧，王業梅.弓形蟲病分子生物學診斷技術的研究進展[J].中國民族民間醫藥雜志，2012（14）：27-29