免疫誘抗劑保康靈1號誘導水稻、葡萄抗病性效果評價

肖文斐，忻雅，裘劼人，應武，馬華升，王漢榮，阮松林*

(1.杭州市農業科學研究院 a生物技術研究所，b作物研究所，浙江 杭州 310024；2.浙江省農業科學院 植物保護與微生物所，浙江 杭州 310021)

植物免疫誘抗劑主要通過激活植物的免疫系統并調節植物的新陳代謝，從而增強植物抗病和抗逆能力。這種誘導抗性具有廣譜、穩定、持久等優點，可解決化學防治帶來的病原菌抗藥性、環境污染和對人畜副作用問題，實現農產品無害化生產，確保農產品質量安全。近年來，我國已研制出蛋白類、寡糖類的植物免疫誘抗劑，對西瓜枯萎病、病毒病均表現出良好的抗病效果。殼寡糖是從海洋甲殼生物外殼提取酶解而來的安全、無毒、無殘留的寡糖類免疫誘抗劑，對蘋果花葉病、西瓜病毒病、枯萎病、辣椒疫病等多種病害均有較好的防效[1]。杭州市農業科學研究院于2013年研制出3%殼寡糖水劑型的高效廣譜免疫誘抗劑保康靈1號(BKL1)。據報道，BKL1能加快水稻種子萌發[2]，提高甜瓜、西瓜和黃瓜種子成苗率[3]，增加葡萄和黑李葉片的面積和厚度[4-5]，提高作物葉片葉綠素含量和抗性相關的酶活性[3-7],進而增加作物產量[6-7]。此外，BKL1能夠提高抗性相關的酶活性[1,3-4]，激活作物的免疫系統，增強抗病能力[3-6]。本試驗在溫室可控條件下用免疫誘抗劑BKL1及其組分處理水稻、葡萄等作物，然后進行相應病原菌接種鑒定，以期評價免疫誘抗劑的誘導抗性及其對靶標病原菌的防治效果。

1 材料與方法

1.1 材料

供試水稻品種中浙優1號(稻瘟病)和岡優(白葉枯病)由中國水稻研究所提供。葡萄品種甬優1號由臨安橫街村葡萄專業合作社提供。試驗在浙江省農業科學院植物保護與微生物所基地溫室內進行。

1.2 處理設計

供試藥劑免疫誘抗劑BKL1(水劑，300倍液)、BKL1組分I(BKL1-Ⅰ)和BKL1組分II(BKL1-Ⅱ)由杭州市農業科學研究院生物技術研究所提供。試驗設5個處理，分別為3個免疫誘抗劑處理BKL1、BKL1-Ⅰ和BKL1-Ⅱ，化學農藥(CF)和清水對照(CK)。

水稻育秧。試驗于5月29開始浸種，采用機插標準秧盤(規格58 cm×28 cm×2.8 cm)育秧，用上述5個藥劑室溫浸種2 d，清洗后35 ℃催芽1 d，種子露白后播種，播種量30 g·盤-1，每處理3盤。播種后將秧盤直接放在溫室中育秧。

1.2.1 接種鑒定

水稻稻瘟病接種鑒定。等秧苗長到1周，用免疫誘抗劑噴施1次，隔1周再噴施1次，噴施日期分別為5月29日、6月9日、6月16日。清水噴施作對照。噴霧接種：將稻瘟病菌混合孢子液(孢子濃度為100倍顯微鏡下每視野30～35個孢子)噴霧在稻穗上，每m2噴霧孢子液250～300 mL；接種后搭架覆蓋塑料薄膜罩，加蓋遮陽網保濕24～48 h，保持空氣濕度在100%，以后每天定時噴水保濕，促使發病。2 d后噴施化學農藥(瘟特靈，500倍液)，保濕1～2周鑒定發病情況(表1)。葉片稻瘟病病級：0級，葉片上無病斑；1級，病斑為針頭大小褐點；3級，圓形或橢圓形的灰色病斑，邊緣褐色，病斑直徑約1～2 mm；5級，典型稻瘟病斑，受害面積不超過葉面積的10%；7級，典型稻瘟病斑，受害面積不超過葉面積的11%～50%；9級，全葉枯死。

水稻白葉枯病接種鑒定。8月10日(成株期)，開始噴施1次免疫誘抗劑，每隔1周噴施，共噴3次，噴施日期分別為8月10日、8月16日、8月22日。清水噴施作對照。剪葉接種在劍葉完全抽出時進行，菌齡3 d，菌液濃度3×108mL-1。用手術剪剪去劍葉頂端2～3 cm。2 d后噴施化學農藥葉枯靈(25%可濕性粉劑，500倍液)，3周后調查發病情況(表1)。水稻白葉枯病病級：0級，病斑面積小于5.0%；1級，病斑面積占葉面積的5.1%～12.0%；3級，病斑面積占葉面積的12.1%～25.0%；5級，病斑面積占葉面積的25.1%～50.0%；7級，病斑面積占葉面積的50.1%～75.0%；9級，病斑面積大于葉面積的75.1%。

葡萄霜霉病接種鑒定。等葡萄苗長出葉片完全展開，于9月12日開始噴施，每隔1周噴施，共噴3次，噴施日期分別為9月12日、9月19日、9月26日。清水噴施作對照。然后用霜霉病菌液噴施接種，保濕，2～3周后調查發病情況(表1)。按葉片的感病面積分9級記載，分級標準：0級，葉片無病斑；1級，病斑占葉面積5%以下；3級，病斑占葉面積6%～25%；5級，病斑占葉面積26%～50%；7級，病斑占葉面積51%～75%；9級，病斑幾乎布滿葉片或葉片枯死。

1.2.2 發病情況調查

水稻稻瘟病、水稻白葉枯病：每小區取200株(稻瘟病)和40株(白葉枯病)，葡萄霜霉病：每小區取40片葉片。分別調查發病率，并進行分級記載，計算病情指數和防效。

2 結果與分析

2.1 免疫誘抗劑誘導水稻稻瘟病抗性效果

從表1可以看出，與清水對照相比，所有處理的水稻稻瘟病發病率和病情指數均有不同程度降低，依次為CF< BKL1

表1 免疫誘抗劑誘導水稻稻瘟病抗性鑒定結果

2.2 免疫誘抗劑誘導水稻白葉枯病抗性效果

從表2可以看出，與清水對照相比，所有處理的水稻白葉枯病發病率和病情指數均有不同程度降低，依次為CF< BKL1< BKL1-Ⅱ< BKL1-Ⅰ。其中，化學農藥CF處理的水稻白葉枯病發病率和病情指數最低，BKL1次之；CF防效最高，BKL1、BKL1-Ⅱ次之，BKL1-Ⅰ最低。就相對農藥CF防效而言，免疫誘抗劑BKL1最高，達到82.8%，BKL1-Ⅱ次之，BKL1-Ⅰ最低。此外，就上述各項指標而言，免疫誘抗劑BKL1均優于其單一組分BKL1-Ⅰ和BKL1-Ⅱ，說明兩者復合存在明顯協同效應。

表2 免疫誘抗劑誘導水稻白葉枯病抗性鑒定結果

2.3 免疫誘抗劑誘導葡萄霜霉病抗性效果

從表3可以看出，與清水對照相比，所有處理對葡萄霜霉病的發病率和病情指數均有不同程度降低，BKL1最低，BKL1-Ⅱ次之，BKL1-Ⅰ最高；而防效則免疫誘抗劑BKL1最高，達到71.2%，BKL1-Ⅱ次之，BKL1-Ⅰ最低。此外，就上述各項指標而言，免疫誘抗劑BKL1均優于其單一組分BKL1-Ⅰ和BKL1-Ⅱ，說明兩者復合存在明顯協同效應。

表3 免疫誘抗劑誘導葡萄霜霉病抗性接種鑒定結果

3 小結與討論

從3種病原菌接種結果來看，免疫誘抗劑BKL1發病率和病情指數比其單一組分低，防效明顯高于其單一組分。免疫誘抗劑BKL1對葡萄霜霉病的防效為71.2%，均高于其對水稻稻瘟病和白葉枯病的防效，說明免疫誘抗劑BKL1防治葡萄霜霉病的效果優于其防治水稻稻瘟病和白葉枯病的效果。相對農藥CF防效而言，免疫誘抗劑BKL1最高，BKL1-Ⅱ次之，BKL1-Ⅰ最低。免疫誘抗劑BKL1對水稻稻瘟病和白葉枯病的相對防效均達80%以上。免疫誘抗劑BKL1各項指標均優于其單一組分BKL1-Ⅰ和BKL1-Ⅱ，說明單一組分BKL1-Ⅰ和BKL1-Ⅱ復合存在協同效應。