正交試驗優化八味茵術顆粒劑提取工藝及其顆粒劑的制備研究

戈大春 王卓君* 韋翠萍

（1 蘇州市吳中人民醫院 江蘇 蘇州 215128）

（2 蘇州衛生職業技術學院 江蘇 蘇州 215128）

濕疹是一種過敏性炎癥性皮膚病，為皮膚科常見多發病，易成慢性，病程遷延，容易反復發作。李東垣在《脾胃論·脾胃盛衰論》中說：“百病皆由脾胃衰而生也。”有些慢性、難治性皮膚病的病因病機都與脾胃功能失調有著相當密切的關系。脾失健運，則濕從內生，浸淫皮膚，如濕瘡、濕疹、奶癬、老年性皮膚瘙癢癥等。其治療也要以健中補脾，促進運化為基本方。八味茵術顆粒為我院的自擬協定處方，由茵陳、生白術等八味中藥組成，經過多年臨床使用，療效確切，主要的功效是健脾利濕，方中白術健脾益氣[1-2]，茵陳利濕退黃[3-4]，共為君藥，在皮膚科得到廣泛應用。臨床用于皮膚科濕瘡、濕疹，對于脾失健運的胃腸道癥狀，如胃納差、惡心腹脹、大便溏泄等也具有很好的效果。為了方便臨床應用，對方中有效成分提取工藝進行多指標優化，經減壓干燥得到干膏為原料，干法制粒的方法來制備顆粒劑。

1.儀器與試藥

1.1 儀器

SHIMAZU LC-2030C 3D高效液相色譜儀(日本SHIMAZU公司)；Sartorius BT125D電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）；fzg-16板式真空干燥箱（杭州三特醫藥化工設備有限公司）；Buchi小型噴霧干燥儀（Germany）；GX-10B多功能粉碎機（浙江高鑫工貿有限公司）；GL-25干法制粒機（江蘇張家港市開創機械制造有限公司）；AC220-240V超聲波清洗機（深圳深華泰超聲洗凈設備有限公司）。

1.2 藥材與標準品

藥材：生白術購自于江蘇福源中藥飲片有限公司，茵陳、蒼術等其余七味藥材購自天馬（安徽）國藥科技股份有限公司；標準品：6,7-二甲氧基香豆素（批號：111740-200702，中國藥品生物制品檢定所）；白術內酯Ⅲ（批號：111978-201501，中國藥品生物制品檢定所）

1.3 試劑

乙腈（HPLC，MERCK，Germany）；甲醇（HPLC，MERCK，USA）；硬脂酸鎂（批號：20170329，CP，國藥集團化學試劑有限公司）

2.方法與結果

2.1 6,7-二甲氧基香豆素、白術內酯Ⅲ的HPLC測定

色譜條件：inertSustain? C18色譜柱（4.6mm×250mm，5 μm，Japan），柱溫30℃，DAD檢測（200nm～400nm），流速為1 mL·min-1，進樣量為5 μL，流動相為水（A）-乙腈（B）梯度洗脫，0～10.0min，55% MPB，10.0～25.0min，55%～95%MPB，25.0～25.1min，95%～55%MPB，25.1～30.0min，55%MPB。

對照品溶液的制備：取6,7-二甲氧基香豆素、白術內酯Ⅲ對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含1.0mg的溶液。精密量取1mL，置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得。

供試品溶液的制備：精密量取八味茵術顆粒20.0g，置20 mL具塞錐形瓶中，加入25mL甲醇：水（1∶1），室溫超聲提取15min，過濾，取續濾液5mL，轉移至50mL容量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得含量測定的樣品溶液。

2.2 提取工藝的研究

對提取工藝進行正交試驗，參考方中君藥白術、茵陳提取工藝的文獻，提取效率的影響因素主要包括：加水量、提取次數、提取時間，確定加水量和優化工藝，分析是否有顯著性差異。取出的樣品液經過適當的稀釋處理，HPLC進行指標性成分含量檢測。

2.2.1 正交試驗的設計 提取效率的影響因素主要包括：加水量（A）、提取次數（B）、提取時間（C），正交試驗采用四因素、三水平的正交表進行試驗，其因素水平表見表1，正交試驗表選用L9(34)，未能安排的空白列作為誤差。

表1 因素、水平表

2.2.2 正交試驗結果分析

以指標性成分6,7-二甲氧基香豆素、白術內酯Ⅲ的含量為優先考慮指標，綜合干膏得率，采用方差分析F檢驗進行試驗結果的統計分析，選取最佳的提取工藝。見表2～5。

表2 八味茵術顆粒提取正交試驗結果表

表3 八味茵術顆粒提取正交試驗方差分析表（6,7-二甲氧基香豆素含量）

表4 八味茵術顆粒提取正交試驗方差分析表（白術內酯Ⅲ含量）

表5 八味茵術顆粒提取正交試驗方差分析表（出膏率）

經方差分析，因素A、B有顯著差異，其中對于茵陳的指標性成分，因素A有顯著性差異，對于白術的指標性成分，因素B有顯著性差異，對于干膏得率來說，各因素都沒有顯著差異，八味茵術顆粒這一協定方為復方制劑，不能單純以其中某一味藥物的含量來確定提取工藝，綜合含量和干膏得率的分析，相對于因素A、B，因素C無顯著性差異，結合臨床實際工作，在本實驗的條件下八味茵術顆粒提取工藝組合為A3B2C1的提取液有效成分煎出率相對高，故最終確定提取工藝為加水量10倍、8倍，提取2次，提取時間0.5 h、0.5 h。

2.2.3 提取工藝的驗證試驗

取三份合格飲片，每帖100 g，按優化后的煎煮方法進行提取（藥材煎煮前浸泡30min，加入10倍量水煎煮30min，藥渣加入8倍量水煎煮30min，將兩次的湯液合并濃縮），比較分析提取液指標性成分、干膏得率（總提取物量），確定提取工藝。試驗見表6，所得指標性成分的含量與正交試驗表中的結果相比有明顯提高，且平行性良好，工藝較為穩定。

表6 續斷優化工藝的驗證試驗結果（n=3）

2.3 濃縮工藝研究

取八味茵術顆粒大提提取液（30公斤藥材提取）適量于60℃、70℃、80℃的水浴中，以提取液在指標性成分6,7-二甲氧基香豆素、白術內酯Ⅲ的含量為指標，分別考察提取液在0h、2h、4h、6h、8h的穩定性。不同時間取出的樣品液經過適當的稀釋處理，HPLC進行檢測。試驗結果表明續斷提取液在60℃、70℃、80℃條件下8h內均穩定，可在80℃條件下進行濃縮，見表7。

表7 八味茵術顆粒提取液在不同溫度、不同時間下成分的含量（μg·mL-1）

2.4 干燥工藝研究

取八味茵術顆粒大提提取液（30公斤藥材提取）并適當濃縮，選擇真空干燥、噴霧干燥法，進行比較，以提取液干燥前后在指標性成分的含量、所得到的干粉性狀和干粉得率為指標，篩選合適的干燥方法。從干燥過程和干粉的形狀角度，兩種干燥方法都可以，干燥過程相對容易，兩種干燥方法所得到的藥粉不黏壁，流動性也好，吸濕性相對強，真空干燥、噴霧干燥的浸膏粉收率分別為85.01%、88.15%。但是從指標性成分6,7-二甲氧基香豆素和白術內酯Ⅲ含量的角度，真空干燥（4.61、34.74μg/g）稍優于噴霧干燥（3.68、29.14μg/g）。故綜合考慮表明真空干燥的方法比較適合于八味茵術顆粒提取液。

2.5 制粒工藝研究

2.5.1 處方的選擇 選擇八味茵術顆粒真空干燥浸膏粉作為原料藥，通過加入不同輔料和調整輔料的用量，以顆粒成型情況和制粒過程順利與否為指標，篩選出最優處方。

處方為：99.0%八味茵術顆粒減壓干燥粉，1.0%硬脂酸鎂。以上處方出片光潔，顆粒色澤均一，硬度適中，不粘輪，成品率高，可選擇此處方為制粒處方。

將所得到的顆粒和輔料硬脂酸鎂取相同的質量，用甲醇：水（1∶1）溶解成相同的濃度，HPLC測定，液相條件參照2.1項下。結果證明制粒的過程對于含量基本沒有影響，制粒的過程和加入的輔料對于指標性成分含量也沒有影響。HPLC色譜圖見圖1、2。

圖1 制粒后與硬脂酸鎂比較的HPLC色譜圖a.白術內酯Ⅲ

圖2 制粒后與硬脂酸鎂比較的HPLC色譜圖b.6,7-二甲氧基香豆素

2.5.2 工藝的考察 對處方進行工藝篩選，以顆粒質量、顆粒得率為考察指標，對壓輪壓力（MPa）、壓輪轉速（r/min）、送料速度（r/min）三個因素進行單因素水平考察，每個因素進行三個不同水平的考察，最終確定處方的最優工藝條件。

2.5.2.1 壓輪壓力的考察 固定壓輪轉速和送料速度，以顆粒質量、成品率為考察指標，當壓輪轉速為5r/min，送料速度為15r/min時，分別對比壓輪壓力為15MPa、20MPa、25MPa時對制粒工藝的影響。試驗結果表明當壓輪壓力為20MPa時，出片連續；顆粒硬度適中、無色差，細粉少，成型性好；得率為82%。

2.5.2.1 壓輪轉速的考察 固定送料速度，以顆粒質量、成品率為考察指標，選擇壓輪壓力為20MPa，當送料速度為15r/min時，分別對比壓輪轉速為4.0r/min、4.8r/min、5.5r/min時對制粒工藝的影響。試驗結果表明當壓輪轉速為4.8r/min時，出片連續；顆粒硬度適中、無色差，成品得率較高，細粉少，得率為80%。

2.5.2.3 送料速度的考察 以顆粒質量、成品率為考察指標，選擇20MPa的壓輪壓力和4.8r/min的壓輪轉速，分別對比送料速度為10r/min、12r/min、15r/min時對制粒工藝的影響。試驗結果表明當送料速度為15r/min時，出片連續；顆粒硬度適中、無色差，成品得率較高，細粉少，得率為83%。

根據單因素考察結果選擇干法制粒機技術參數為壓輪壓力20MPa、壓輪轉速4.8r/min、送料速度為15r/min。綜合處方及工藝的考察，確定了八味茵術顆粒的干法制粒處方和條件：干燥浸膏粉99.0%；硬脂酸鎂1.0%；壓輪壓力20MPa、壓輪轉速4.8r/min、送料速度為15r/min。

3.討論

八味茵術顆粒為一中藥復方制劑，具有健脾利濕之功效，中藥復方成分復雜，干擾因素多，不能單純以單一指標性成分來確定提取的效率，方中白術、茵陳為君藥，白術有明確的健脾益氣、調節胃腸運動的功能的特點[5-9]，最近還有研究表明白術的主要活性成分白術內酯I、II、Ⅲ體內外有抗輪狀病毒（RV）的作用[10]。茵陳利濕退黃，同樣具有多種的藥理作用[11-13]，這兩味也是方中用藥劑量比較大的藥味，故選用6,7-二甲氧基香豆素、白術內酯Ⅲ為指標性成分，結合干膏得率綜合考察，經過驗證試驗表明優化的提取工藝可行性和穩定性都較好。

制粒方法選用干法制粒，以干浸膏為原料，處方為99.0%減壓干燥粉，1.0%硬脂酸鎂。干法制粒所得到的成品顆粒硬度適中、無色差，細粉少，成型性好。處方中選擇了潤滑劑硬脂酸鎂，硬脂酸鎂的加入可以增加浸膏粉的流動性和潤滑性，對比加入硬脂酸鎂和不加入硬脂酸鎂進行干法制粒，無論從顆粒的硬度、色澤、可壓性以及最后剩余細粉這些方面，加入硬脂酸鎂都比不加入效果好。另外在制粒方法方面，對比了干法制粒和濕法制粒，濕法制粒采用傳統擠出制粒，3倍的糊精作為稀釋劑，顆粒硬度適中、無色差、成型性良好，但與干法制粒相比，載藥量少，病人服用量增加，吸濕性也比干法制粒的強，從工業化中式放大以及可行性的角度，干法制粒更加符合現代化工業生產自動化的要求，且質量可控性強，故最后選用干法制粒來制備八味茵術顆粒。所得到顆粒劑外觀好，細粉少，為其后期的相關制劑研究以及體內動物實驗的研究奠定了基礎。