高蛋白、高脂肪類人參食品中人參皂苷的檢測方法研究

郭暢冰，徐芳菲，李 蕾，楊懷雷，謝麗娟，王國明，曹志強*

（吉林人參研究院·吉林通化·134001）

人參（Panax ginsengC.A.Mey）為五加科人參屬多年生草本植物，素有“百草之王”的美譽，在我國最早的本草學著作《神農本草經》中記載，人參具有大補元氣，復脈固脫，補脾益肺，生津養血，安神益智之功效[1]。一直以來人參均作為中國傳統名貴中藥材廣泛用于藥物、藥膳及食物滋補，在中國已被廣泛應用了幾千年[2]。隨著人們生活水平和健康意識的提高，近年來以人參為主要原料，開發的人參保健食品和食品日益增加，在2012年國家衛生部批準人參進入新資源食品后，人參的產業鏈迅速增長，各類人參食品應運而生[3～4]。因為衛生部規定了人參進入食品的用量為每日不超過干參3g，如何精準確定人參的添加量是多少，便成為質量檢驗單位的最新課題。由于人參食品中油脂、蛋白含量大，傳統檢測方法很難在去除干擾的前提下準確檢出人參食品中的人參皂苷成分，如果不能準確檢測其含量，可能消費者會因為食用過量而損害身體健康。因此，急需尋求一種簡便快捷、操作性強的人參食品中人參皂苷含量的檢測方法。本文采用乙醇提取-大孔樹脂法與傳統藥典法提取方法進行對比、分析，探究可行性高、方便簡單的檢測方法，并對本方法的藥材轉移率及加樣回收率進行研究[5]。

1 儀器與材料

1.1 實驗材料

人參粉、人參蛋糕（吉林人參研究院自制）。

1.2 實驗試劑

對照品人參皂苷Rg1、Re、Rb1均購于吉林大學天然藥物化學實驗室，純度均≥98%。正丁醇、硫酸、三氯甲烷、乙醇、氫氧化鈉、甲醇、乙腈，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純試劑，大孔樹脂：D101大孔吸附樹脂，山東魯抗立科藥業有限公司。

1.3 實驗儀器

高效液相色譜儀（Thermo UltiMate 3000，美國）；十萬分之一電子天平（BT125D，賽多利斯科學儀器有限公司）；超聲波清洗儀（KQ-500DE，昆山市超聲儀器有限公司）；超純水機（ELGA（DI）；威立雅水處理技術（UK））；數顯式恒溫水浴鍋（HH-6，金壇市江南儀器廠）。

2 實驗方法

2.1 供試品溶液的制備

表1 供試品溶液的制備

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、及人參皂苷Rb1對照品，加甲醇制成1ml各含0.2mg的混合液，搖勻，即得。

2.3 人參皂苷Rg1+Re、Rb1含量的測定

2.3.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，水為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長203nm。理論塔板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于5000。具體參數見表2。

表2 色譜條件

2.3.2 測定

分別精密吸取各供試品溶液10μL，注入高效液相色譜中，按2.4.1色譜條件進行測定，計算。

3 結果與分析

3.1 人參食品中人參皂苷含量的測定結果

精密稱取供試品，每種方法平行稱取三份試樣，按照“2.1”項下制備，進行分析，不同前處理發方法檢測的人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量，結果見表3，圖譜見圖 1、圖 2、圖 3。

表3 對比兩種前處理方法檢測不同皂苷含量

通過表中數據所示，方法2（乙醇提取-大孔樹脂法）中人參皂苷各指標的含量明顯高于方法1（藥典法）。

圖1 人參皂苷Rg1、Re、Rb1混合標準品HPLC色譜圖

圖2 方法1供試品溶液HPLC色譜圖

圖3 方法2供試品溶液HPLC色譜圖

3.2 藥材轉移率

取人參藥材600mg，平行稱取三份試樣，按照“2.1”項下方法2制備，進行分析，結果見表4、表5。

表4 人參藥材中人參皂苷的含量

表5 人參蛋糕的藥材轉移率

通過表中數據所示，三次平行實驗的藥材轉移率＞85%，提示該方法（方法2：乙醇提取-大孔樹脂法）提取率高，方法科學合理。

3.3 精密度實驗

取同一供試品溶液，按照“2.1”項下方法2連續測定5次，結果見表6。

表6 精密度實驗 （n=5）

3.4 穩定性實驗

取同一供試品溶液，按照“2.1”項下方法2在0、3、6、20、24h測定，結果見表 7。

表7 穩定性實驗 （n=5）

3.5 重現性實驗

取同一批號樣品，平行5份，按照“2.1”項下方法2獨立進行測定，結果見表8。

表8 重現性實驗（n=5）

3.6 回收率實驗

采用加樣回收率法，分別稱取樣品6份 （含量為Rg1+Re=0.352mg/g， 其 中 Rg1 為 0.085mg/g，Re 為0.275mg/g，Rb1 為 0.302 mg/g)，每份約 7.5g，分別在樣品中加入對照品溶液1ml（對照品溶液：精密稱取人參皂苷Rg16.52mg、人參皂苷Re20.25mg、人參皂苷Rb122.09mg，加甲醇定容于10ml量瓶中，搖勻），按2.1中方法2進行處理，以甲醇定容于5ml量瓶中，搖勻，精密吸取10μl注入液相色譜儀中，測定，結果見表9。

表9 各成分的回收率實驗

4 結論

高蛋白、高脂肪類人參食品中糖類、脂肪類含量較高，傳統藥典方法檢測人參皂苷含量偏低，本實驗采用乙醇提取和D101大孔樹脂吸附法相結合提取高蛋白、高脂肪類人參食品中人參皂苷。通過與傳統藥典方法對比，根據測得的Rg1+Re、Rb1皂苷含量可知，本方法明顯優于藥典方法，提取的皂苷含量約是藥典法的3倍且重復性好。從提取皂苷含量來看，本方法提取率高，且操作簡便。而且本方法的藥材轉移率及加樣回收率均可達85%以上。由此可見本方法可作為高蛋白、高脂肪類人參食品中人參皂苷的檢測方法，對人參食品中人參添加量的控制具有重要意義。