不同年生野山參中總皂苷和總多糖的含量測定

楊懷雷，徐芳菲，李 蕾，韓士冬，曹志強*

（吉林人參研究院·吉林通化·134001）

人參為五加科 (Araliaceae)植物人參Panax ginsengC.A.Mey的干燥根。以生態不同區分為野山參、移山參和園參[1]。在山野天然生長者被稱為野山參。野山參主要生長在我國長白山以及大興安嶺、小興安嶺區域，屬于人參的一種。所謂野山參，其實際上也指自然生長在深山中的人參，是不摻雜任何人為干預與技術管理的。野山參在生長過程中會受到自然環境的影響，從而形成相應的根莖、主根等特殊形態[2]。近年來，對于野山參的研究主要集中在培育、鑒別、指紋圖譜等方面[3～6]，其總皂苷和總多糖方面的研究報道較少。本文提取了野山參中的總皂苷和總多糖，并采用紫外分光光度法對兩者的含量進行測定，為野山參的基礎成分研究提供了參考依據，為野山參的質量控制奠定了基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

紫外可見分光光度計（SP-1920），上海光譜儀器有限公司；電熱恒溫水浴鍋（HH-6），金壇市白塔金昌實驗儀器廠；電子天平（SQP），賽多利斯科學儀器有限公司；超聲波清洗器（KQ500-DE），昆山市超聲儀器有限公司；智能高速冷凍離心機（3H16RI），湖南赫西儀器裝備有限公司。

1.2 材料

野山參(1～18年生)；人參皂苷Re標準品(中國食品藥品檢定研究院，批號110754-201827)；葡萄糖(中國計量科學研究院，批號17001)；無水乙醇、甲醇、濃硫酸、苯酚(北京化工廠，分析純)；香草醛(天津市光復科技發展有限公司，分析純)。

2 方法

2.1 對照品溶液的制備

2.1.1 人參皂苷Re對照品

精密稱取人參皂苷Re對照品10.80mg，置10mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.080mg/mL的人參皂苷Re對照品溶液。

2.1.2 葡萄糖對照品

精密稱取葡萄糖對照品25.13mg，置25mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，然后精密移取1mL置10mL量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.10052mg/mL的葡萄糖對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 總皂苷供試品

取不同年生野山參于烘箱中65℃烘干，粉碎，過80目篩。準確稱取野山參粉末（1～18年）0.5g，加10mL（20倍量）75%乙醇加熱回流2h，重復提取3次，合并濾液，蒸干。殘渣加甲醇溶解并轉移至10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，超聲處理30min使其充分溶解，搖勻，即為總皂苷供試品溶液。

2.2.2 總多糖供試品

準確稱取野山參粉末1.0g，加入50mL蒸餾水，浸泡過夜；次日加熱回流提取3次，第1次2h，第2、3次均1h，合并濾液，水浴鍋蒸至粘稠掛壁。加入20mL 95%乙醇，靜置過夜；次日轉移至離心管中，10000r/min離心 30min，棄去上清液，干燥（70～80℃），得粗多糖。將粗多糖轉移至100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得。測定前用蒸餾水稀釋3倍，即為人參多糖供試品溶液。

2.3 溶液的配制

2.3.1 8%香草醛乙醇試液：取香草醛0.8g，加無水乙醇使溶解成10ml，即得。

2.3.2 72%硫酸溶液：取硫酸72mL，緩緩注入適量水中，冷卻至室溫，加水稀釋至100mL，搖勻，即得。

2.3.3 5%苯酚溶液：取苯酚1g，加入蒸餾水20mL，搖勻，即得。

2.4 標準曲線的繪制

2.4.1 人參皂苷Re標準曲線

精密吸取人參皂苷Re對照品溶液20、30、40、50、60、70、80、90μL， 置磨口帶塞試管中， 水浴蒸干甲醇后，加入8%香草醛乙醇試液0.5mL，72%硫酸溶液5mL，充分振搖混勻后置60℃恒溫水浴上加熱10min，立即用冰水浴冷卻10min，搖勻。以試劑做空白，按照分光光度法于544nm波長處分別測定吸光度。以吸光度A為縱坐標，質量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，做回歸方程。

2.4.2 葡萄糖標準曲線

精密吸取葡萄糖對照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL，置10mL試管中，加入5%苯酚溶液1.0mL，迅速加入濃硫酸7.0mL，混勻，室溫放置5min，沸水加熱30min，冷卻至室溫，以蒸餾水為空白對照，于492nm波長處測定吸光度。以吸光度A為縱坐標，質量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，做回歸方程。

2.5 含量測定

2.5.1 總皂苷含量測定

精密吸取供試品溶液20μL，置具塞刻度試管中，蒸干甲醇后，加入8%香草醛乙醇試液0.5mL，72%硫酸溶液5mL，充分振搖混勻后置60℃恒溫水浴上將熱10min，立即用冰水浴冷卻10min，搖勻。以試劑做空白，按照分光光度法于544nm波長處分別測定吸光度，由標準曲線計算出待測樣品中總皂苷的質量m。野山參中總皂苷含量(%)(m為總皂苷的質量，V1為供試品溶液取樣體積，V2為供試品溶液定容體積，M為樣品質量)。

2.5.2 總多糖含量測定

精密量取供試品溶液0.1mL，置10mL具塞試管中，加入5%苯酚溶液1.0mL，迅速加入濃硫酸7.0mL，混勻，室溫放置5min，沸水加熱30min，冷卻至室溫，以蒸餾水為空白對照，于波長492nm處測定吸光度，由標準曲線計算出待測樣品中總多糖的質量m。野山參中總多糖含量(%)(m為總多糖的質量，V1為供試品溶液取樣體積，V2為供試品溶液定容體積，M為樣品質量，f為稀釋倍數)。

3 結果

3.1 標準曲線的繪制

按照“2.4”項下的方法分別對人參皂苷Re和葡萄糖標準曲線進行繪制，得出回歸方程。人參皂苷Re的回歸方程為y=0.0062x-0.0269，R2=0.9995，表明總皂苷質量在21.60-97.20μg范圍內，線性關系良好，標準曲線見圖1。葡萄糖的回歸方程為y=0.0062x-0.0099，R2=0.9918，表明在總多糖質量在10.052～80.416μg范圍內，線性關系良好，標準曲線見圖2.

圖1 人參皂苷Re標準曲線

圖2 葡萄糖標準曲線

3.2 含量測定

3.2.1 總皂苷含量測定

不同年生野山參中人參總皂苷含量測定結果為3.24%～6.37%，結果見表1。

表1 不同年生野山參中人參總皂苷含量測定結果

3.2.2 總多糖含量測定

不同年生野山參中總多糖含量測定結果為17.50%～22.92%，結果見表2。

表2 不同年生野山參中總多糖含量測定結果

4 討論

本文對不同年生野山參中的人參總皂苷和總多糖含量進行測定，發現野山參中二者含量均較高，但不同年限野山參中二者的含量無顯著規律。由于野山參為自然生長在深山中的人參，并未經過任何人工干預，不同年限的野山參的樣品采集很難集中在某一固定區域，導致不同年限野山參生長環境也不盡相同，可能對二者的含量有一定影響，同時還應增加野山參樣品量，避免檢測數據存在個體差異，確保測定結果的準確、穩定、可靠。此外，本次測定未進行多區域平行樣本的采集及測定，不同地域、不同環境生長的野山參質量、品質以及內在成分的含量也會略有不同，可能會有未知因素對實驗結果產生影響，在進行下一步的實驗研究時，應進行多個地域野山參平行樣本的采集及測定，使測定結果具代表性。

本文對于野山參中人參總皂苷及總多糖的測定僅僅是初步探索，還需進一步的研究和完善。在樣品采集時應盡可能均勻，盡可能在同一區域進行不同年生樣品的采樣。實驗還需進行多地域平行樣本的采集，對野山參的質量和品質進行綜合評價。本文未對18年以上的野山參進行測定，應覆蓋更廣的野山參生長年限，探索不同年限野山參中二者含量的內在規律。本文僅對野山參中的人參總皂苷進行測定，未對人參單體皂苷成分進行研究，可對不同年限野山參中單體皂苷含量進行測定，以進一步完善和豐富野山參的有效成分基礎研究工作，為野山參的藥理研究、質量評價和質量控制提供參考依據。