化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HIV抗體在血液篩查中的應(yīng)用評(píng)價(jià)

趙菲，王新明

(1.南陽(yáng)市中心血站，河南 南陽(yáng) 473000；2.鄭州安圖生物工程股份有限公司，河南 鄭州 450016)

艾滋病是一種公認(rèn)的比較嚴(yán)重的疾病，20多年來(lái)，該病已經(jīng)波及到全球200多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，其傳播途徑主要包括性接觸、輸血、不潔注射等[1-3]。目前，世界各國(guó)均把HIV納入血液篩查標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用于篩查的方法主要有HIV抗體檢測(cè)、HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)、HIV核酸檢測(cè)等[1-4]。傳統(tǒng)的HIV抗體篩查主要采用酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)試劑盒，近幾年來(lái)，化學(xué)發(fā)光法(CLIA)作為一項(xiàng)嶄新的技術(shù)，因其靈敏度高、特異性好、操作全自動(dòng)以及重復(fù)性好等優(yōu)勢(shì)而被廣泛應(yīng)用。本文研究了化學(xué)發(fā)光法(CLIA)測(cè)HIV抗體在血液篩查中的應(yīng)用情況。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 南陽(yáng)市中心血站無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本12558例，其中男性7582例，女性4976例，7mL分離膠促凝管1管血液標(biāo)本，標(biāo)本保存于4℃冰箱，4h內(nèi)分離血清，于48～72h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.2 試劑與儀器 ChiTaS BSS 1200全自動(dòng)血液核酸檢測(cè)儀(上海浩源公司)，STAR150全自動(dòng)加樣儀(北京澳斯邦公司)，F(xiàn)AME24／30全自動(dòng)酶免后處理系統(tǒng)(北京澳斯邦公司)，核酸檢測(cè)試劑盒(上海浩源公司)，HIV抗原／抗體ELISA檢測(cè)試劑盒 (法國(guó)伯樂(lè)，廈門(mén)新創(chuàng))，HIV抗體檢測(cè)試劑盒(磁微粒化學(xué)發(fā)光法)(鄭州安圖)，AutoLumoA2000全自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀(鄭州安圖)。所有試劑均在有效期內(nèi)使用，所有儀器設(shè)備均在校準(zhǔn)周期內(nèi)，操作均嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)及儀器設(shè)備操作規(guī)程執(zhí)行，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)要求計(jì)算S／CO，S／CO≥1為陽(yáng)性或有反應(yīng)性，S／CO＜1為陰性或無(wú)反應(yīng)性。

1.3 檢測(cè)方法 每份樣本分別用采用ELISA兩個(gè)廠(chǎng)家試劑，分別為ELISA1和ELISA2，CLIA一個(gè)廠(chǎng)家試劑進(jìn)行HIV抗體的檢測(cè)，對(duì)于初測(cè)有反應(yīng)性的樣本進(jìn)行雙孔復(fù)試。雙孔復(fù)試后均為無(wú)反應(yīng)性，則判為陰性；雙孔復(fù)試有一孔有反應(yīng)性，則判為陽(yáng)性；抗體檢測(cè)三個(gè)廠(chǎng)家均為陽(yáng)性的樣本不再進(jìn)行核酸檢測(cè)，初篩單一廠(chǎng)家有反應(yīng)性及初篩均為陰性的樣本，用核酸檢測(cè)試劑盒進(jìn)行核酸檢測(cè)。一種試劑陽(yáng)性或幾種試劑聯(lián)合陽(yáng)性均送當(dāng)?shù)丶部刂行拇_證實(shí)驗(yàn)室WB法確證。

1.4 結(jié)果判斷 抗體檢測(cè)有反應(yīng)性的樣本進(jìn)行雙孔復(fù)測(cè)，雙孔復(fù)試后均為無(wú)反應(yīng)性，則判為陰性。雙孔復(fù)試有一孔有反應(yīng)性，則判為陽(yáng)性。

1.5 數(shù)據(jù)分析 統(tǒng)計(jì)化學(xué)發(fā)光與酶聯(lián)免疫檢測(cè)HIV抗體的符合率。

2 結(jié)果

2.1 12558例獻(xiàn)血樣本ELISA、CLIA、核酸及WB確認(rèn)結(jié)果 12558例獻(xiàn)血樣本，有1例樣本經(jīng)確證為真陽(yáng)性，有16例樣本CLIA與ELISA檢測(cè)結(jié)果不一致，NAT結(jié)果均為陰性，WB結(jié)果有3例為不確定，13例為陰性。其中有2例樣本ELISA1單獨(dú)有反應(yīng)性，NAT及WB結(jié)果均為陰性；有2例樣本ELISA2和CLIA均有反應(yīng)性，NAT均為陰性，WB結(jié)果1例為陰性，1例為不確定；有3例樣本ELISA2單獨(dú)有反應(yīng)性，NAT及WB結(jié)果均為陰性；有9例樣本CLIA單獨(dú)有反應(yīng)性，NAT均為陰性WB結(jié)果2例為不確定，7例為陰性，見(jiàn)表1。

2.2 CLIA試劑與ELISA試劑檢測(cè)結(jié)果比較 CLIA試劑與ELISA試劑檢測(cè)整體符合率較高，12558例獻(xiàn)血樣本檢測(cè)結(jié)果一致性較高。見(jiàn)表2、表3。

表1 不一致樣本結(jié)果匯總

2.3 18份CLIA初測(cè)陽(yáng)性樣本復(fù)檢結(jié)果 本次檢測(cè)，CLIA共有18例樣本初測(cè)為陽(yáng)性，除1例為真陽(yáng)性之外，剩余17例樣本，有3例樣本雙孔復(fù)測(cè)后為陰性，有3例樣本雙孔復(fù)測(cè)后仍為陽(yáng)性，但是樣本重新離心再?gòu)?fù)測(cè)為陰性，有11例樣本雙孔復(fù)測(cè)及重新離心后復(fù)測(cè)均為陽(yáng)性。見(jiàn)表4。

2.4 結(jié)果分析 12558例獻(xiàn)血樣本，有1例樣本經(jīng)確證為真陽(yáng)性，陽(yáng)性樣本偏少，可能與統(tǒng)計(jì)樣本總量有限有關(guān)，陽(yáng)性符合率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，本次評(píng)估主要以特異性評(píng)估為主。

表2 CLIA試劑與ELISA1試劑符合率統(tǒng)計(jì)

表3 CLIA試劑與ELISA2試劑符合率統(tǒng)計(jì)

3 討論

0.0079%(1／12558)，低于2009年中國(guó)疾控中心公布的 0.057%(0.042%～0.071%)的感染率[5]，這可能是因?yàn)楂I(xiàn)血者多以健康人群為主，獻(xiàn)血前經(jīng)過(guò)征詢(xún)，將有危險(xiǎn)性行為的人員已經(jīng)排除，且獻(xiàn)血人群中學(xué)生、軍人、公務(wù)員占比例較大文化程度較高，對(duì)HIV的防范意識(shí)較強(qiáng)，感染率要低于普通人群[6]。檢測(cè)出的1例HIV真陽(yáng)性，屬于進(jìn)城務(wù)工人員，教育程度為高中學(xué)歷，提示我們需要加強(qiáng)獻(xiàn)血前的保密征詢(xún)工作，講清不符合獻(xiàn)血條件參加獻(xiàn)血的利弊，取得獻(xiàn)血者的充分信任，將有危險(xiǎn)性行為的獻(xiàn)血者拒之門(mén)外，同時(shí)呼吁社會(huì)進(jìn)一步做好外來(lái)務(wù)工人員等流動(dòng)人口的艾滋病防治宣傳工作。假陽(yáng)性樣本分布與獻(xiàn)血者年齡、性別及職業(yè)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)規(guī)律。

表4 化學(xué)發(fā)光復(fù)檢樣本結(jié)果

本次統(tǒng)計(jì)CLIA與ELISA檢測(cè)整體符合率較高，有3例CLIA檢測(cè)為陽(yáng)性ELISA檢測(cè)為陰性的樣本，經(jīng)確證為“不確定”。雖然“不確定”結(jié)果不能作為HIV感染的依據(jù)，但也有研究表示抗體初篩為陽(yáng)性且免疫印跡檢測(cè)為“不確定”，如果核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性，基本可以排除HIV感染，但是從輸血安全方面考慮，免疫印跡檢測(cè)為“不確定”的樣本，還是存在一定的殘余風(fēng)險(xiǎn)。按照相關(guān)要求，當(dāng)HIV確認(rèn)結(jié)果出現(xiàn)“不確定”時(shí)，要求每三個(gè)月對(duì)其進(jìn)行追蹤隨訪(fǎng)，連續(xù)隨訪(fǎng)兩次，結(jié)果仍“不確定”或陰性，可按陰性報(bào)告[7-8]。因此，從這個(gè)方面來(lái)講，CLIA試劑在靈敏度上，比ELISA試劑具有一定的優(yōu)勢(shì)，這一點(diǎn)與段美婷[8]等人的研究結(jié)果較為一致。

12558例樣本中，CLIA檢測(cè)有3例樣本，初檢復(fù)檢均為假陽(yáng)性，但是重新離心復(fù)檢后則為陰性。有研究報(bào)道，同樣的樣本按照不同的離心條件處理，檢測(cè)結(jié)果會(huì)表現(xiàn)出顯著差異[9]。如果樣本處理過(guò)程中樣本未完全凝固就離心或者離心速度、時(shí)間不符合要求，會(huì)出現(xiàn)纖維蛋白絮狀物停留在血清中或膠體層中，引起溶血。血清中纖維蛋白含量過(guò)高，會(huì)與固相載體發(fā)生非特異性反應(yīng)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性，溶血標(biāo)本中紅細(xì)胞因破損釋放出的游離血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶的作用，與辣根過(guò)氧化物酶作用相似，其非特異吸附在抗原包被的固相載體上，催化底物使發(fā)光值增高也會(huì)引起假陽(yáng)性結(jié)果；本次評(píng)估CLIA與ELISA均有假陽(yáng)性樣本出現(xiàn)，除了上述提到的樣本處理過(guò)程可能導(dǎo)致的假陽(yáng)性外，以下幾個(gè)方面也會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性：①體系中存在其他抗體的干擾(如類(lèi)風(fēng)濕系列：ASO、RF、ANA等)，導(dǎo)致抗－HIV假陽(yáng)性[10]；②目前市面上的試劑包被抗原多為重組抗原，不同廠(chǎng)家包被抗原選取的片段不一致，也是造成不同廠(chǎng)家檢測(cè)結(jié)果不一致的主要原因之一[11]。

基于以上原因，作為血液篩查工作者，本著檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的原則，我們需要建立標(biāo)準(zhǔn)的操作規(guī)程，規(guī)范樣本前處理過(guò)程，并在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)，對(duì)初測(cè)有反應(yīng)性的樣本應(yīng)重新離心后再進(jìn)行復(fù)試；同時(shí)建議試劑廠(chǎng)家在確保試劑靈敏度和特異性的前提下，采取有效措施提高檢測(cè)試劑的抗干擾能力，盡可能減少假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果而導(dǎo)致的血液報(bào)廢。

本文通過(guò)對(duì)12558例樣本進(jìn)行HIV檢測(cè)，評(píng)估化學(xué)發(fā)光試劑在血液篩查中的應(yīng)用情況，結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光試劑表現(xiàn)出較好的靈敏度和特異性[12－16]，可以在血液篩查中加以推廣，并且化學(xué)發(fā)光試劑配套的全自動(dòng)儀器具有自動(dòng)化程度高，出結(jié)果快，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)[17－18]，可以在一定程度上解放勞動(dòng)力，提高工作效率，同時(shí)減少人為操作失誤導(dǎo)致的異常檢測(cè)結(jié)果。