抑制素α、A103、鈣網膜蛋白聯合檢測在腎上腺皮質腺瘤與腎上腺良性嗜鉻細胞瘤鑒別診斷中的應用價值

霍亞杰，康志強，何麗，羅方，許玲玉,毛雨

(鄭州大學附屬鄭州中心醫院內分泌科，河南 鄭州 450000)

腎上腺腫瘤為臨床常見腫瘤類型，根據其組織起源可分為腎上腺髓質腫瘤與腎上腺皮質腫瘤[1-3]。 腎上腺皮質腺瘤(Adrenal cortical adenoma，ACA)是一種腎上腺皮質良性上皮性腫瘤，按照有無分泌功能可分為功能性與非功能性腫瘤，具有較高發病率，病變特點為瘤細胞細胞質內脂質較為豐富，形成索狀、巢狀并伴有竇隙樣結構及豐富血管[4-6]。腎上腺良性嗜鉻細胞瘤 (Adrenal benign phaeochromocytoma，ABP)為臨床常見腎上腺髓質良性腫瘤，瘤組織形態類似ACA，尤其是瘤細胞脂質變性時，細胞外觀呈透明狀，與ACA相似，二者鑒別診斷難度較大[7-9]。現階段臨床鑒別ACA、ABP仍以組織化學技術為主，但傳統組化方法銀染、嗜鉻反應缺乏特異性，多已棄用。隨著免疫組化技術的廣泛應用，用于腎上腺腫瘤的免疫標記種類較多，臨床上通常聯合采用多種免疫標記診斷鑒別ACA、ABP[10-12]。本研究通過測定腎上腺髓質、皮質腫瘤組織中抑制素α(Inhibin α)、抗黑色素抗原單克隆抗體(A103)、鈣網膜蛋白(Calretinin)表達情況，旨在探究其在ACA、ABP鑒別診斷中的應用價值。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2010年4月-2017年8月我院病理科62例手術存檔腎上腺標本，其中ACA標本28例，男10例，女18例；年齡12～70歲，平均48.62±9.12 歲；腫瘤最大直徑 1～10 cm，平均 3.89±0.56cm；其中8例伴Cushing綜合征，17例伴Conn綜合征；3例無功能者；ABP標本28例，男12例，女 16例；年齡 12～71 歲，平均 48.96±9.47 歲；腫瘤最大直徑 8～13 cm，平均 10.69±2.30cm；正常腎上腺標本6例，男2例，女4例；年齡15～68歲，平均48.96±9.47歲。本研究經我院倫理協會審核同意。

1.2 免疫組化法 62例手術存檔腎上腺標本均通過中性福爾馬林固定 (體積分數為10%)，石蠟包埋，連續切成3 μm厚薄片，采用MaxVision兩步法進行免疫組化操作，操作步驟均按照說明書進行；陽性對照選擇已知陽性切片，選擇PBS代替一抗作陰性對照，研究標本、對照切片均于同一條件下染色。 結果判定：Inhibin α、A103、Calretinin 均表達于細胞質。綜合判斷染色強度及高倍鏡下陽性細胞百分率。(1)染色陽性為細胞質呈現為淺黃色至棕褐色，按染色強度評分：0分：無染色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。(2)高倍鏡下隨機選取5個視野陽性細胞數之平均數即為該例標本陽性細胞數結果，根據陽性細胞百分比評分：0分：≤5%；1分：5%＜陽性細胞百分比≤25%；2分：25%＜陽性細胞百分比≤50%；3分：50%＜陽性細胞百分比≤75%；4分：＞75%。根據染色強度與陽性細胞百分率評分之和判定陽性，陰性(-)：0分；弱陽性(+)：2～3 分；陽性(++)：4～5 分；強陽性(+++)：6～7 分，其中弱陽性、陽性及強陽性均按照陽性計數。

2 結果

2.1 不同腎上腺組織中 Inhibin α、A103、Calretinin表達情況 ACA組織中 Inhibin α、A103、 Calretinin陽性表達率均較ABP高(P＜0.05)；腎上腺組織中 Inhibin α、A103、Calretinin 陽性表達與 ACA 患者臨床特征無關(P＞0.05)。見表1、表2。

表1 不同腎上腺組織中Inhibin α、A103、Calretinin表達情況

續表1

表2 Inhibin α、A103、Calretinin表達情況與ACA患者臨床特征關系

2.2 Inhibin α、A103、Calretinin 單一及聯合診斷價值 Inhibin α、A103、Calretinin 聯合鑒別診斷 ACA、ABP敏感性 96.43%、準確度 92.86%均較A103、Calretinin 單獨鑒別診斷高，P＜0.05。 見表 3。

3 討論

Inhibin α 系轉化生長因子 β(TGF-β)超家族成員，是一種二聚體蛋白質激素，由α、β兩個亞單位組成，其中Inhibin α僅一種分子結構，位于人體染色體2q33，相對分子量18000，多由睪丸Sertoli細胞、卵巢粒層細胞合成，對垂體促性腺激素合成、分泌具有明顯抑制作用，以往多用于鑒別診斷卵巢顆粒細胞瘤和癌[13-15]。近年來，隨著臨床研究的不斷深入，發現Inhibin α可表達于正常腎上腺皮質、皮質腫瘤及皮質結狀增生中，且腎上腺皮質中可檢測出該激素mRNA。本研究中，Inhibin α在正常腎上腺皮質中陽性表達率高達100%，且正常腎上腺皮質中Inhibin α表達多以束狀帶內側、網狀帶為主，而束狀帶外側及球狀帶基本不表達。ACA組織中Inhibin α陽性率85.71%，多表現為中等強度，而在ABP組織中陽性率僅3.57%，與孔璐璐等學者[16]研究結果基本一致。A103為抗黑色素原單克隆抗體，多用于伴有黑色素細胞分化的腫瘤與惡性黑色素瘤診斷中，同時還可用于產生類固醇激素腫瘤及具有血管周上皮樣細胞分化腫瘤的鑒別診斷。早在1998年，國外學者Busam K J等[17]即報道了A103在類固醇細胞及腎上腺皮質腫瘤中的免疫反應，同時還表示，其在腎上腺皮質腫瘤中陽性表達率較高，而在ABP及其他上皮性腫瘤中均為陰性，提示A103可用于診斷腎上腺皮質腫瘤。隨著臨床上對A103研究的不斷深入，孔璐璐等學者表明ACA組織中A103陽性表達率僅58.3%，僅可作為ACA輔助診斷指標。本研究中，ACA組織中A103陽性表達率雖為50.00%，但A103在ABP組織中均無表達，可見A103在ACA、ABP鑒別診斷中仍具有較高價值。此外，A103陽性表達與ACA患者臨床特征并無相關性。Calretinin系激動蛋白C超家族，是一種具有EF手型結構的細胞內鈣結合蛋白，通常用于標記卵巢性索間質、間皮、神經的腫瘤，隨著臨床研究的不斷深入，國外學者指出，Calretinin在腎上腺皮質腫瘤細胞中同樣處于高陽性表達狀態[18]。本研究中ACA組織中陽性表達率為71.43%，且多為陽性，而ABP組織中僅3例為陽性表達，且均為弱陽性。因此，Calretinin可用于鑒別診斷ACA、ABP。同時本研究表明，Calretinin陽性表達與患者臨床病理特征無關。 Inhibin α、A103、Calretinin 聯合鑒別診斷ACA、ABP敏感性96.43%、準確度92.86%均較A103、Calretinin單獨鑒別診斷高，提示聯合采用Inhibin α、A103、Calretinin 鑒別診斷 ACA、ABP，可進一步提高診斷敏感性及準確度。

表3 Inhibin α、A103、Calretinin單一及聯合診斷價值

綜上所述，Inhibin α、A103、Calretinin 聯合應用于ACA、ABP鑒別診斷中，診斷敏感性及準確度較高，值得臨床推廣應用。