應用ReCell技術移植治療穩定期白癜風的臨床療效觀察

羅 衛，陳 杰，徐 勁，蔡瑞康

白癜風是一種皮膚獲得性色素脫失性疾病，其基本病理變化為皮損部位的黑素細胞數目的減少或消失，自體黑素細胞移植是一種有效的治療方法。ReCell技術是一項源自澳洲的表皮細胞移植技術，其原理是通過酶解和物理等作用，將小面積的皮片直接處理成表皮細胞混懸液，從而開展各項用途的細胞移植療法。本研究應用ReCell技術將發皰壁制成表皮細胞混懸液，將含有黑素細胞的表皮細胞混懸液直接種植于白斑皮損創面，觀察和研究移植治療后取得的臨床效果。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇2015-07至2017-07我中心白癜風專科門診確診的白癜風患者21例，均為穩定期白癜風患者；其中男12例，女9例；年齡15～35歲，平均22.30歲；病程1～18年，平均6.58年；共選擇自體表皮移植皮損33塊，其中面部6塊，頸部2塊，上胸8塊，背部3塊，腹部3塊，上肢5塊，下肢6塊；白斑皮損最大面積38.67 cm2，最小為5.47 cm2。患者均簽署知情同意書，本研究經醫院倫理委員會討論通過。

1.2 方法

1.2.1 選取供皮 按照供皮區與移植區1∶2原則，供皮區選擇皮膚色素正常的非暴露部位(腹部、大腿內側)，75%乙醇消毒后，使用加溫負壓表皮細胞分離機(工作負壓-50 kPa，溫度45 ℃，吸盤孔徑1 cm)，于供皮區采用負壓和加溫雙重機制吸皰30～50 min，使表皮分離產生水皰，沿水皰邊緣將表皮剪下備用。

1.2.2 含黑素細胞的表皮細胞混懸液的制備 將取下的皰壁置入ReCell試劑盒中的溫控容器內，在37 ℃恒溫下酶解15～20 min，將皰壁放入緩沖液中和，應用手術刀片在皰壁的表皮側刮取細胞，形成混懸液，將獲得的混懸液緩慢注入過濾器純化，獲得所需的表皮細胞混懸液,主要含角質形成細胞和黑素細胞。

1.2.3 黑素細胞的鑒定 用倒置顯微鏡觀察培養細胞形態。多巴胺染色，將細胞接種于明膠處理的載玻片上，培養至70%融合，將細胞用冷甲醇固定，在0.1%左旋多巴磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中， 37 ℃溫育，觀察細胞顯色程度。

1.2.4 移植治療 白斑區采用1%利多卡因局部麻醉，用皮膚磨削機打磨白斑區表皮至出現針尖樣出血點，將制備好的表皮細胞混懸液分別噴灑接受種植皮損創面，油紗覆蓋于種植皮損創面，平紗輕加壓包扎，7 d后除去包扎紗布。

1.3 觀察指標 觀察皮損移植后復色情況，根據中國中西醫結合學會皮膚性病專業委員會色素病學組制定的《白癜風臨床分型及療效標準》(2003年修訂稿)[4]。皮損處復色率分為5級：0級為無色素再生或范圍擴大，1級為色素恢復1%～25%，2級為色素恢復26%～50%，3級為色素恢復51%～75%，4級為色素恢復76%～100%。

1.4 隨訪周期 白癜風靶皮損移植后1、3、6個月進行連續性隨訪觀察，按照觀察指標進行移植治療前后的對比分析。

2 結 果

2.1 黑素細胞觀察結果 倒置顯微鏡下典型的黑素細胞形態，主要呈紡錘狀兩極型細胞(圖1A)，多巴胺染色顯示細胞質呈棕色或黑灰色(圖1B) 。

2.2 移植效果 移植部位7～10 d皮膚創面愈合。術后1個月移植部位變紅，有輕微色素沉著。移植區邊緣與正常皮膚交界處有淺白色分界線。移植后3～5個月色素明顯加深，與周圍正常皮膚相比較深或稍淺，邊界消失。6個月色素恢復穩定，且顏色與鄰近正常皮膚接近(圖2)，未見瘢痕和其他不良反應。白癜風皮損移植后1、3、6個月的復色情況統計見表1，移植后6個月的3、4級復色率達87.09%。從移植部位與效果看，下肢、軀干、面部著色均勻，效果較好。頸部、眼瞼、嘴唇等活動區域部分出現著色不勻，但均有色素島形成。處于暴露部位的移植區著色較快。

2.3 不良反應 隨訪期間， 2例在移植治療6個月后因出國等原因失訪。患者在治療與隨訪期間均未發生不良反應，也無皮膚感染、無瘢痕形成等。

圖2 白癜風移植前后對比

時間1個月3個月6個月移植皮損/塊3333314級9(27.27)14(42.42)15(51.61)3級9(27.27)11(33.33)10(35.48)2級6(18.18)4(12.12)2(3.23)1級4(12.12)2(6.06)2(3.23)0級5(15.15)2(6.06)2(6.45)

注：1-3個月隨訪21例，6個月隨訪19例

3 討 論

由于皮損部位黑素細胞數目的減少或消失，導致的皮膚獲得性色素脫失性疾病為白癜風，自體黑素細胞移植是一種有效的治療方法[1]。自體移植，包括自體表皮直接移植、自體表皮細胞混懸液和自體黑素細胞體外培養移植[2]。由于自體表皮直接移植受到皮膚來源的限制，導致移植的面積較小，并且移植后容易出現色素融合不均等現象，而自體黑素細胞體外培養移植由于黑素細胞培養液中含有一些潛在致癌因子，因此在臨床應用過程中存在安全性問題有待進一步研究和觀察。

ReCell技術是一項新的表皮細胞移植技術，其原理為通過酶解、物理等作用，將小面積的皮片處理形成表皮細胞混懸液，從而開展各項用途的細胞療法。這種原生態的自體表皮細胞混懸液早期被應用于燒傷創面的治療，可以促進創面的愈合，減少植皮的面積。由于應用ReCell技術制成的表皮細胞懸液中含有正常的黑素細胞成分，為白癜風移植治療提供黑素細胞來源，成為研究和探索移植治療白癜風的新方向，為白癜風的移植治療開辟了一種新的移植療法[3]。Wood等[4]發現：通過ReCell技術制成的含有黑素細胞的原生態的自體表皮細胞混懸液，主要含有表皮基底細胞、朗格罕斯細胞、黑色素細胞和成纖維細胞等，黑色素細胞移植存活后，逐步地發揮功能，達到白癜風復色的作用。同時，表皮基底細胞有促進愈合的作用。

由于細胞未經過傳代培養或在細胞懸液中添加任何生物添制劑，不會發生移植后潛在癌變和傳染病的可能[5, 6]，因此，應用ReCell技術移植治療白癜風具有安全性的特點[7]。在自體表皮細胞混懸液的過程中，本研究采用皮膚發皰的皰壁作為黑素細胞的來源，避免了手術切除取皮留下皮膚瘢痕的缺點；該治療方法由于采用的是細胞移植療法，移植后色素恢復均勻，較以往進行的負壓吸皰自體表皮移植相比較，擴大了移植面積，特別是避免了移植區的拼接樣外觀。另外，該項技術不需要專門的實驗室，可在臨床上直接操作，并且方法較為簡便[4]。

總之，應用ReCell技術將發皰壁制成表皮細胞混懸液，將含有黑素細胞的表皮細胞混懸液直接種植于白斑皮損創面，進行白癜風的移植治療具有安全性可靠、供皮區不留瘢痕、移植區復色效果好的特點，并且細胞懸液的制備相對簡單[8]。因此，應用ReCell技術移植治療穩定期白癜風值得在臨床上推廣應用。