市售不同產地丁公藤藥材的品質評價

羅裕 李國豪

[摘要]目的 評價市售不同產地6批丁公藤藥材的品質。方法 按照2015年版《中國藥典》四部通則測定市售不同產地6批丁公藤藥材的水分（≤12.0%）、總灰分（≤10.0%）、二氧化硫（≤150 mg）及浸出物（≥3.0%）含量。以東莨菪內酯作為評價指標，采用高效液相色譜法進行含量測定，色譜柱為UItimate XB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-水-冰醋酸（32∶68∶0.16），檢測波長為298 nm。結果 市售不同產地6批丁公藤的藥材水分含量范圍為9.3%～12.3%;總灰分含量范圍為7.5%～10.1%;二氧化硫含量為65～83 mg/kg;醇溶性浸出物含量范圍為4.6%～7.2%;東莨菪內酯含量范圍為0.063%～0.092%，各項測定結果均符合2015年版《中國藥典》的規定。結論 對不同產地的丁公藤藥材進行品質評價，可為建立更完善的丁公藤品質評價體系提供依據。

[關鍵詞]丁公藤;東莨菪內酯;高效液相色譜法;品質評價

[中圖分類號] R284.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）8（b）-0012-04

[Abstract] Objective To evaluate the quality of 6 batches of Erycibe Obtusifolia from different producing areas. Methods The contents of water （≤12.0%）， total ash （≤10.0%）， sulfur dioxide （≤150 mg） and extracts （≥3.0%） were determined according to the four general rules of the Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. The content of scopoletin as the evaluation index was determined by high performance liquid chromatography with UItimate XB-C18 column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） as the chromatographic column， the mobile phase was methanol-water-glacial acetic acid （32∶68∶0.16）， the detection wavelength was 298 nm. Results The water content of six batches of Erycibe Obtusifolia from different producing areas ranged from 9.3% to 12.3%， the total ash content ranged from 7.5% to 10.1%， the sulfur dioxide content ranged from 65-83 mg/kg， the alcohol-soluble extract content ranged from 4.6% to 7.2%， and the scopoletin content ranged from 0.063% to 0.092%， the results of each determination were in accordance with the provisions of the Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. Conclusion To evaluate the quality of Erycibe Obtusifolia from different producing areas can provide a basis for establishing a more perfect quality evaluation system of Erycibe Obtusifolia.

[Key words] Erycibe Obtusifolia; Scopololamine; High performance liquid chromatography; Quality evaluation

丁公藤為旋花科植物丁公藤（Erycibe Obtusifolia Benth）或光葉丁公藤（Erycibe Schmidtii Craib）的藤莖[1]。別名包公藤、麻辣子、丹月藤、南藤等，始載于《本草拾遺》，生于林中，攀援于樹上。分布廣東、廣西、云南、海南、浙江、江蘇等地。本品性溫，味辛，有毒。歸心、肝二經。化學研究表明，丁公藤含有包公藤甲素（Baogongteng A）、包公藤乙素、東莨菪素、6-甲氧基-7-羥基香豆素等成份[2]。具有解毒發汗、消腫止痛等功效，治療風濕痹痛、半身不遂、跌打腫痛等病癥[3-4]。丁公藤是兩廣（廣東、廣西）等地區用于治療風濕病的常用藥，也是風濕藥酒的主要原料之一。目前，市面上已有丁公藤藥酒、丁公藤滴丸、復方丁公藤膠囊等多種中成藥。據吳立宏等[5-6]對丁公藤基源的研究發現，市面上的丁公藤有較多混淆品，如青江藤、紅葉藤、風藤、羊角藤、小花青藤等。調查發現，市售丁公藤藥材存在蟲蛀等質量不穩定的問題，這些因素將會影響丁公藤的臨床療效和用藥安全。為此，本研究參照2015年版《中華人民共和國藥典》[5]（以下簡稱“《中國藥典》”）項下的規定，分別對來自不同產地6批丁公藤藥材中的水分、總灰分、二氧化硫、浸出物及東莨菪內酯的含量進行測定，旨在為建立丁公藤藥材的質量控制和品質評價提供依據。

1儀器與試藥

1.1儀器及試劑

LC-20AT/JY-001高效液相色譜儀[島津企業管理（中國）有限公司];DHG-9240A/JY-017電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）;KQ5200VD型/JY-007數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;FA2004/JY-003電子天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）;AUW120D/YJ-004島津分析天平[島津企業管理（中國）有限公司];FW315/JY-022中草藥粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）;SX-8-10/JY-018箱式電阻爐（北京市永光明醫療儀器有限公司）;東莨菪內酯對照品（中國食品藥品檢定研究院，純度>99%，批號：110768-200504），甲醇（上海星可高醇溶劑有限公司）為色譜純，磷酸（美國賽默飛科技有限公司）為色譜純;水為超純水，其他試劑均為分析純。

1.2試藥

于2018年5月從廣東、廣西、云南、海南、浙江、江蘇等地購回丁公藤藥材，共6批，經廣東省新興中藥學校彭瑞松副主任中藥師鑒定為旋花科植物丁公藤或光葉丁公藤的藤莖[1]。

2方法與結果

2.1不同產地丁公藤藥材含水量測定結果

參照2015年版《中國藥典》四部通則0832項下的烘干法[7]，對6批丁公藤藥材進行水分測定，每批測定5次，藥材含水量范圍是9.3%～12.3%（表1），計算得6批丁公藤藥材的平均含水量為11.12%。

2.2不同產地丁公藤藥材總灰分測定結果

參照2015年版《中國藥典》四部通則2302項下的灰分測定法，對6批丁公藤藥材進行總灰分測定，每批測定5次，總灰分含量范圍是7.5%～10.1%（表2），計算得平均含量是8.82%。

2.3不同產地丁公藤藥材醇溶性浸出物測定結果

參照2015年版《中國藥典》四部通則2201項下的熱浸法，用70%乙醇作為溶劑，對6批丁公藤藥材進行浸出物含量測定，每批測定5次，醇溶性浸出物含量范圍是4.6%～7.2%（表3），計算得平均含量是5.96%。

2.4不同產地丁公藤藥材二氧化硫測定結果

參照2015年版《中國藥典》四部通則2331項下的酸堿滴定法，對6批丁公藤藥材進行二氧化硫的檢測，二氧化硫含量范圍為65～83 mg/kg（表4），平均含量是74.2 mg/kg。

2.5含量測定

2.5.1色譜條件

UItimate XB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水-冰醋酸（32∶68∶0.16）為流動相;流速為1.0 ml/min;柱溫為25℃;檢測波長為298 nm，進樣量10 μl。理論塔板數按東莨菪內酯計算應不低于2000。

2.5.2溶液的制備

2.5.2.1供試品溶液的制備? 精密稱取廣東產丁公藤藥材粉末（過四號篩）1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，稱定重量，加熱回流6 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25 ml，置燒瓶中，濃縮至約1 ml，加入10 ml、3 mol/L的鹽酸溶液中，水浴中加熱水解2 h，立即冷卻，移入分液漏斗中，用10 ml水分次洗滌容器，并入分液漏斗中，加氯化鈉2 g，用三氯甲烷強力振搖提取5次，每次取15 ml，合并三氯甲烷液，加無水硫酸鈉2 g，攪拌，濾過，用少量三氯甲烷洗滌容器，濾過，濾液合并，于70℃以下濃縮至近干，立即加甲醇使其溶解，轉移至10 ml容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。色譜見圖1A。

2.5.2.2對照品溶液的制備? 精密稱取東莨菪內酯對照品0.00810 g，置于20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為母液，精密量取母液1 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇制成每1 ml含40 μg的溶液，即得。色譜見圖1B。

A.丁公藤供試品溶液;B.東莨菪內酯對照品溶液

2.5.3線性關系考察

取“2.5.2.2”項下的對照品溶液母液，精密量取母液0.1、0.5、1、2、3 ml分別置與10 ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。按“2.5.1”項下色譜條件分別進樣10 μl測定，以峰面積（Y）為縱坐標，以東莨菪內酯濃度（X）為橫坐標，進行線性回歸，Y=17 048X+655.11，r=1，表明東莨菪內酯進樣量在0.0405～1.2150 μg范圍內線性關系良好。

2.5.4精密度試驗

取“2.5.2.2”項下對照品溶液母液1 ml，加入10 ml容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，按“2.5.1”項下的色譜條件測定，重復進樣6次，測得東莨菪內酯峰面積的RSD為0.23%（n=6）結果表明，測定方法的精密度良好。

2.5.5重復性實驗

精密稱取廣東產丁公藤藥材粉末6份，按“2.5.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項下的色譜條件測定東莨菪內酯含量，結果RSD為0.46%（n=6），表明重復性良好。

2.5.6穩定性實驗

取“2.5.2.1”項下供試品溶液，按“2.5.1”項下的色譜條件分別于0、1、6、12、24、48 h測定，測得東莨菪內酯的峰面積RSD為0.68%，表明供試品溶液48 h內穩定性良好。

2.5.7加樣回收率實驗

取廣東產丁公藤藥材粉末，分別稱取0.25、0.5、1.0 g，精密稱定，分別精密加入東莨菪內酯對照品約0.000 25、0.000 45、0.000 90 g，按“2.5.2.1”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算得平均回收率為100.00%，RSD=2.18%，結果見表5。

2.5.8不同產地丁公藤藥材東莨菪內酯含量測定結果

取6批不同產地丁公藤藥材粉末各約1 g，精密稱定，按“2.5.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項下的色譜條件測定，由結果可知，東莨菪內酯的含量：廣東>海南>廣西>云南>江蘇>浙江，其中廣東產丁公藤含量最高，浙江產丁公藤最低，結果見表6。

3討論

中藥品質評價的目的一方面是為了鑒別藥材的真偽優劣，為中醫臨床服務，確保臨床用藥安全;另一方面是實現藥材的優質優價，保證藥農藥商的利益。影響中藥材品質的因素有水分、灰分、浸出物、有效成分含量等。目前，對丁公藤藥村的評價包括以下幾方面：①品種鑒定方面，如張玉潔等[3]對丁公藤及其混淆品的鑒別;吳立宏等[5]對廣西產丁公藤原植物的調查及商品丁公藤主流品種的鑒定等。②化學成分研究方面，如周岳等[2]對光葉丁公藤的酚性成分進行的研究等。③含量測定方面，劉翠婷等[8-10]對丁公藤屬植物中東莨菪苷、綠原酸、東莨菪素、異綠原酸A、異綠原酸B和異綠原酸C的含量進行測定。④也有學者對丁公藤等5種中藥材規范化種植關鍵技術研究等[10]。相關報道提示，目前尚缺乏對丁公藤藥材進行較全面的品質評價的研究[10]。

開展丁公藤藥材的品質評價包括水分、灰分、浸出物、有效成分含量等方面，本研究結果提示，不同產地的丁公藤藥材水分范圍為9.3%～12.3%。一般根莖類中藥材含水量≤13%，超出水分范圍將會影響藥材的質量，可能會出現蟲害、霉變等變質現象。本研究結果符合2015版《中國藥典》的相關規定。測定中藥材總灰分可反映中藥材的純度，如總灰分超出《中國藥典》規定的最高限量，說明其含有其他無機物污染或摻雜，將會影響藥材的質量。6個產地的丁公藤藥材的總灰分范圍在7.5%～10.1%，說明其灰分測定結果符合要求。浸出物測定是反應藥材的內在質量，是確保其療效確切、質量可靠的有效手段，本次測定的不同產地的丁公藤藥材浸出物范圍在4.6%～7.2%，遠遠高于2015年版《中國藥典》的要求。采用二氧化硫熏硫藥材，利于藥材的儲存，但也會產生二氧化硫殘留，對人體產生危害，影響藥材質量。目前已經被國家藥監局明令禁止使用。經測定，丁公藤藥材的二氧化硫含量為65～83 mg/kg，屬于安全范圍。

參照2015版《中國藥典》丁公藤項下含量測定的要求，對云南、海南、廣東、廣西、浙江、江蘇等不同產地的丁公藤藥材中東莨菪內酯的含量進行測定[11-13]，含量范圍為0.063%～0.092%，造成不同產地丁公藤藥材中東莨菪內酯含量差異的主要原因可能在于藥材在生長過程中受產地氣候、環境、栽培方法等因素的影響[14-16]。

本研究中的丁公藤藥材中的東莨菪內酯含量均符合藥典要求。其中，廣東、廣西、云南、海南產地藥材東莨菪內酯含量較高，江蘇和浙江藥材含量較低。

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（收稿日期：2019-01-21? 本文編輯：孟慶卿）