氣相色譜-質譜法測定食品中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的含量

簡德威 熊含鴻 鄭悅珊 洪澤淳 陳科

摘 要：本文的目的是建立準確、高效的氣相色譜-質譜法測定食品中3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩含量的檢測方法。樣品經正庚烷超聲萃取定容后，采用電子轟擊電離源（EI）、選擇離子監控（SIM）模式進行測定，外標法定量；對前處理中的萃取溶劑、萃取方法、萃取時間進行研究，并對檢測方法進行方法學驗證。根據不同空白基質的加標回收試驗的結果顯示，本方法前處理最優條件為使用正庚烷超聲萃取15min。3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩在0.1～2.0mg/L濃度范圍內線性良好，相關系數R2=0.997；在不同基質及不同加標濃度下，回收率為82.4%～100.8%，相對標準偏差為1.74%～3.90%。3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩在不同基質中的檢出限均可達到0.05mg/kg，定量限達到0.15mg/kg。故得出結論，本研究通過對前處理條件的研究和檢測方法的方法學驗證，建立了一種氣相色譜-質譜法測定食品中3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩含量的檢測方法，該方法定性效果好、定量準確，且前處理操作簡便、技術難度較低。

關鍵詞：3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩 氣相色譜-質譜法 食品 超聲萃取

1 引言

3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩（3-acetyl-2，5-dimethylthiophene，ADP）是一種可以作為咸味香精的食品添加劑，其于2002年開始被用作食品用香料，常用于肉類食品加工中以賦予食品烤堅果味[1]。2013年，歐洲食品安全管理局（EFSA）對ADP進行安全評估，發現該物質在體內和體外實驗均表現出基因毒性，會破壞DNA及細胞中的遺傳物質，可能損害人體健康，作為食品用香料使用存在安全隱患[2]，長期使用該物質存在食品安全問題和隱患，易導致食品安全事件（事故）發生。因此，EFSA將ADP從許可香料中剔除，并嚴禁ADP作為食用香料投放市場或用于食品[3，4]。同年6月14日，歐盟委員會也通過法規Regulation（EC）No 545/2013，禁止將ADP作為食品用香料使用。目前，我國仍允許ADP作為食品用合成香料使用，并收錄于國家標準GB 2760-2014[5]中。但是，中國香精香料化妝品工業協會于2013年8月14日發布自律文件（香化協字[2013]62號），要求香料生產企業不得生產用作食品用香料的3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩，食用香精中不得使用該物質[6]。

目前，國內對3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩的檢測沒有相應的國家標準。查找相關文獻可發現，對ADP的檢測方法有液相色譜法[7]、氣相色譜-質譜法[8，9]及氣相色譜三重四級桿質譜法[10]等。液相色譜法的優點是分離效率高、檢測靈敏度高、應用范圍廣，缺點是定性效果差，容易受到雜質、基質等因素的干擾；氣相色譜-質譜法的優點是前處理簡單、操作方便、定性效果較好，但在復雜的基質樣品中，背景響應較高，致使檢測靈敏度降低；氣相色譜三重四級桿質譜法的優點是定性更準確、抗干擾能力強、樣品基質背景的響應較低、靈敏度也高于單級質譜，更適用于復雜基質中微量、痕量物質的檢測[11-13]，但氣相色譜三重四級桿質譜法操作較復雜，儀器較昂貴，技術難度較高。

考慮到食品基質復雜和檢測技術的難度，采用氣相色譜-質譜法測定3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩可以一定程度地避免受到雜質和基質的干擾，且定性效果好、定量準確、操作簡便、技術難度較低，因此本研究選擇氣相色譜-質譜法作為檢測方法。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

2.1.1 儀器設備

GCMS-QP2010Ultra氣相色譜-質譜聯用儀[配電子轟擊（EI）電離源]，日本島津公司；AB204-S電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；Multifuge X3R離心機，美國賽默飛世爾公司；KQ-500DE超聲清洗器，中國科橋公司；Vortex Genius 3渦旋混合器，德國IKA公司。

2.1.2 材料與試劑

正庚烷（色譜純），康科德科技有限公司；正己烷（色譜純），康科德科技有限公司；乙醇（色譜純），康科德科技有限公司；0.45μm有機濾膜，美國PALL公司；3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩標準品（純度99%），上海Aladdin公司。

2.2 實驗方法

2.2.1 標準溶液配制

2.2.1.1 3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩標準儲備溶液的配制

準確稱取3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩標準品20mg（精確至0.0001g），用正庚烷溶解并定容至10mL，此溶液濃度為2mg/mL。

2.2.1.2 3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩標準中間溶液的配制

將3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩標準儲備溶液（2.2.1.1）用正庚烷稀釋成濃度為20mg/L的標準工作溶液。

2.2.1.3 3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩標準系列工作液的配制

用正庚烷將標準中間溶液（2.2.1.2）稀釋成最終濃度為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/L的標準系列工作溶液。

2.2.2 前處理方法

稱取1.0g均勻樣品（精確至0.0001g）置于50mL離心管中，加入5mL正庚烷，超聲提取15min，5000r/min離心5min。然后將提取液轉至10mL容量瓶，殘渣用3mL正庚烷重復提取一次，合并所有提取液至10mL容量瓶，用正庚烷定容至10mL，過0.45μm有機濾膜，供氣相色譜-質譜聯用儀分析。

2.3 儀器條件

2.3.1 色譜條件

CP-wax：50m×0.25mm（內徑）×0.25μm（膜厚）極性毛細管色譜柱；載氣：He，純度99.999%，流速1.5mL/min；進樣口溫度：220℃；進樣方式：不分流進樣；進樣量：1μL；升溫程序：初始溫度50℃保持1min，以20℃/min升溫至200℃保持3 min，再以10℃/min升溫至220℃保持5min。

液體基質低加標（0.3mg/kg）6次重復測定的回收率在86.2%～94.8%之間，RSD為3.46%；中加標（0.6mg/kg）6次重復測定的回收率在86.7%～91.2%之間，RSD為1.74%；高加標（1.0mg/kg）6次重復測定的回收率在92.1%～101.3%之間，RSD為3.23%。

通過不同基質的不同濃度加標回收率及RSD可以看出，本方法滿足GB/T 27404-2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》的要求[14]。

4 結論

本研究建立了一種氣相色譜-質譜法測定食品中3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩含量的檢測方法。通過對萃取溶劑、萃取方法、萃取時間的研究，確定了較優且操作簡便的前處理條件，并對檢測方法的線性、檢出限、定量限、準確性、重復性進行方法學驗證，確保本方法的結果準確可靠。本研究建立的氣相色譜-質譜法測定食品中3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩含量的檢測方法，定性效果好、定量準確，且前處理操作簡便，技術難度較低，是對目前相對較少的3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩的檢測方法的補充，為建立3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩檢測的國家標準或方法提供參考依據，同時對執法部門進行食品加工和銷售過程中違規、違法添加化學原料行為的監管提供技術支持，避免食品安全事件發生，從而保障食品行業健康發展和人民舌尖上的安全。

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基金項目：廣東省藥品監督管理局2019年科技創新項目（2019YDZ36）。