注射用伏立康唑細菌內毒素檢查方法及意義

鄭州大學附屬兒童醫院 河南省兒童醫院 鄭州兒童醫院（450000）謝博

1 材料和方法

1.1 材料 恒溫水浴鍋為DZKW-S-8型、德國IKA的MS3型旋渦混合器、TAL-40D型試管恒溫儀、Eppendorf移液器、Thermo Fisher Scientific公司的OMH180SS型高溫烘箱等。實驗使用的所有玻璃器皿在250℃下烘烤2小時以除去外源細菌內毒素。

TAL：TALⅠ是廈門迅試劑實驗廠有限公司的產品，批號：1505804，靈敏度為0.25EU/mL；TALⅡ是湛江安得生物有限公司的產品，批號：1607062，靈敏度為0.25EU/mL。

內毒素工作標準品（CSE）買自北京世紀奧科生物技術有限公司，規格：每支80EU，批號：150601-201478。

BET水購自上海恒遠生物科技有限公司，規格：10mL每支，產品編號：160006。

注射用VRC：來自四川美大康華康藥業，批號為：16061319、15121119，規格：每瓶0.1g。

1.2 方法 根據臨床使用情況對細菌內毒素的限值進行測定，使用劑量：本產品靜脈滴注速度最快不得＞3mg/（千克/時），將其稀釋后需要進行1～2小時的滴注，極限值為1.67EU/mg。嚴格限制在計算值的1/3～1/2之間，以確保安全使用藥物，并結合現行標準和相關要求，暫且認為VRC的細菌內毒素應不得高于0.75EU/mg。

本研究根據2015版中華人民共和國藥典中的藥劑敏感度審查規則對TAL進行試劑敏感性審查。

筆者通過預干擾實驗發現選用0.25EU/mL的TAL時，將注射用VRC稀釋到0.67mg/mL時不存在BET干擾。因此，我們將樣品稀釋到測試溶液A的0.67mg/mL，并采用該稀釋液和BET水分別將標準品稀釋，濃度為含內毒素2、1、0.5、0.25λ的溶液B、C。BET可直接作為陰性對照D。準備工作完成后進行干擾試驗檢查，溶液B各個濃度設置4個平行管，溶液A、C、D的各個濃度設置2個平行管。

供試品BET：根據建議的BET標準檢查所有樣品。溶液A：將樣品稀釋至0.67mg/mL，并選擇λ=0.5EU/mLTAL進行BET。陽性對照B：將內毒素工作標準稀釋成2λ，陽性對照C和陰性對照D均由BET水建立，依法進行限度測試。

2 結果

2.1 通過實驗發現TAL的λ都在0.5～2λ之間，說明TAL符合規定，因此筆者認為0.25EU/mL即為該批次TAL的靈敏度。見附表1。

2.2 A和D所有平行試管均為陰性，溶液C的測試結果滿足試劑敏感性復查試驗的要求，因此實驗是有效的。溶液B的結果也符合試劑敏感性審查測試的要求，表明注射劑用VRC稀釋到0.67mg/mL選用0.25EU/mL的TAL進行BET無干擾。見附表2。

2.3 根據干擾結果確定制定含有內毒素的VRC細菌的BET檢測標準應小于0.75EU/mg。

3 討論

相關研究證明注射用VRC對于念珠菌血癥以及足放線菌引起的嚴重感染等非嗜中性粒細胞減少等疾病具有良好的效果[1]，因此其安全性受到很多學者的關注。

附表1 靈敏度復核結果

附表2 干擾確認試驗結果

本研究選擇使用兩種不同制造商生產的TAL試劑，對兩種不同批次的VRC注射樣品進行細菌內毒素檢測并進行研究。通過實驗我們發現TAL的λ都在0.5～2λ之間，說明這兩家TAL試劑制造商所生產的TAL均符合規定，因此筆者認為0.25EU/mL即為該批次TAL的靈敏度。又進一步通過干擾確認實驗，證實樣品稀釋到0.67mg/mL時選用0.25EU/mL的TAL進行BET不存在干擾。因此根據干擾確認的結果，筆者建議將細菌內毒素測試統一應用于注射用VRC標準，并且限值嚴格為0.75EU/mg。擬定細菌內毒素檢查方法為取本品依法進行檢查，且VRC的細菌內毒素含量不得超過0.75EU/mg。而且采用細菌內毒素法檢查注射用伏立康唑的安全性在合理用藥方面有著及其重要的作用[2]。