ELISA檢測梅毒抗體假陽性率與年齡相關性探究

尹亞牛

摘要：目的 分析應用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測梅毒抗體假陽性與年齡的關系;方法 選取≥60歲的425例接受梅毒抗體檢測患者作為實驗組，選取<60歲的1935例接受梅毒抗體檢測患者作為對照組，先用酶聯免疫吸附試驗初檢，針對結果為陽性的患者采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）確診，比較兩組患者的假陽性率;結果 ≥60歲患者假陽性率83.33%高于<60歲患者假陽性率10.26%，且P<0.05;結論 酶聯免疫吸附試驗檢測梅毒抗體假陽性率與年齡因素密切相關，大于60歲患者中假陽性率高達80%左右，應謹慎對待。

關鍵詞：梅毒抗體;酶聯免疫吸附試驗;假陽性

【中圖分類號】R183??? 【文獻標識碼】A??? 【文章編號】2107-2306（2019）03-062-02

梅毒作為臨床上比較常見的一類傳染性疾病，其傳播途徑主要為性傳播和母嬰垂直傳播，主要是感染蒼白密螺旋體導致。近年來，我國梅毒的發病率呈現出不斷上升的趨勢，在全球發病人數位居第五位。病毒會引起人體多種器官功能形態發生改變，具有較高的致殘率和致死率，因此針對梅毒早檢測、早治療顯得至關重要[1]。當前臨床上檢測梅毒的方法較多，其中以酶聯免疫吸附試驗（ELISA）最為常見，但是隨著酶聯免疫吸附試驗廣泛應用，發現其檢測結果存在假陽性的情況，本文就酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測梅毒抗體假陽性率與年齡相關性進行分析，詳細情況見下：

1.資料與方法

1.1一般資料

本研究一般資料選自2018年1月～2018年10月我院接受梅毒抗體檢測的2360例患者。其中男性患者共1246例，女性患者為1114例，患者最小年齡為6歲，最大年齡為98歲，中位年齡為（55.36±12.14）歲。將其中≥60歲的425例患者作為實驗組，將<60歲的1935例患者作為對照組。排除伴有惡性腫瘤和多臟器功能衰竭患者。

1.2方法

1.2.1所需儀器和試劑。本次檢測所需儀器為北京普朗洗板機及普朗全自動酶標儀，TP-ELISA的試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供，TPPA試劑盒選用日本富士瑞必歐珠式會社產品。

1.2.2檢測方法。所有接受檢測的對象均在清晨空腹的狀態下，抽取其靜脈血3ml，然后將其置于離心機上以4000r/min離心處理15min后，常規分離血清待檢，整個檢測過程全部由我院檢驗科的專業人員嚴格按照標準操作規程規范開展。所有待測血清均先采用TP-ELISA進行檢測，針對檢測結果為陽性的標本再采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）予以確診。

1.3觀察指標

統計兩組對象的假陽性率。其中真陽性的判定標準為：TP-ELISA和TPPA結果均為陽性即為真陽性，假陽性的判定標準：TP-ELISA結果呈陽性，TPPA的結果呈陰性，并且2周內復查結果未改變便提示為假陽性[2]。

1.4統計學方法

數據統計分析用SPSS21.0數據統計軟件，計數資料用（%）表示，用卡方檢驗，結果以P<0.05表示差異明顯。

2.結果

實驗組425例患者經TP-ELISA檢測，結果呈陽性12例，經TPPA檢測，結果為陽性共2例，假陽性有10例，假陽性率為83.33%，對照組1935例患者經TP-ELISA檢測，結果呈陽性76例，經TPPA檢測，結果為陽性共68例，假陽性為8例，假陽性率為10.26%，由此可見實驗組患者的假陽性率明顯高于對照組（P<0.05）。

3.討論

梅毒主要指的是因為感染梅毒螺旋體而引起的一類慢性全身性傳播疾病，該病具有較強的傳染性，發病機制復雜，病程較長。梅毒傳播的主要途徑為性接觸，除此之外，母嬰垂直傳播、吸毒、注射藥品等也會傳播。當前臨床上診斷梅毒的方法較多，大多數診斷在實驗室檢查結果的基礎上，而梅毒抗體酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）和梅毒螺旋體顆粒凝集試驗則是實驗室血清檢測梅毒螺旋體的常見方法。TP-ELISA在臨床上的使用比較常見，但是這類檢測方法容易受到各種因素的影響，以至于檢測值處于臨界區域中，無法得到準確的診斷結果，從而影響了梅毒的治療[3]。

在本研究中，通過對比了≥60歲和<60歲以上的人群開展梅毒酶聯免疫吸附試驗監測和TPPA檢測，結果發現≥60歲患者的假陽性率為83.33%明顯高于<60歲患者假陽性率為10.26%，導致這一結果的主要原因可能為：一、絕大部分老年患者合并有其他慢性疾病（如：糖尿病、肝硬化、類風濕性關節炎、丙型肝炎、淋巴肉瘤等），這些疾病可能引起機體釋放誘導產生抗類脂抗體和抗梅毒螺旋體的交叉抗原，除此之外，患者因為生理狀況改變也可能引起梅毒酶聯免疫吸附試驗結果為假陽性;二、個別老年患者體內可能同時存在其他螺旋體，這些螺旋體會誘導產生抗屬、群或者特異抗原的交叉反應抗體;三、當前TP試驗所需的商品試劑盒，只有FTA-ABS配備了吸收劑，其他的TPPA和ELISA全部未配置吸收劑。導致需要檢測的血清全部沒有使用吸收劑來吸除同非梅毒螺旋體交叉反應的抗體。

導致梅毒抗體酶聯免疫吸附試驗檢測結果為假陰性的原因眾多，除了上述的年齡因素外，還有學者認為主要有以下幾個方面因素：（1）樣本因素。樣本因素主要體現在四個方面：①樣本處理不完全。待抽取檢驗者的血液后未等到完全凝固便將其放置在離心機上將血清分離，導致纖維蛋白沒有全部析出，容易在板孔上形成絮狀物或者纖維蛋白薄膜，引起洗板時不干凈，板孔內存在殘留酶，引起吸光度值偏高，導致檢測結果呈假陽性。②樣本溶血。當樣本溶血時會導致細胞內液各類活性酶和擁有酶樣活性的物質非特異性與底物接觸，溶血后反應孔非特異性地吸附血紅蛋白，若沒有將其清洗干凈，便會導致催化底物出現一定顯色，增加了本底吸光度值，引起假陽性。③樣本被污染。為了避免血清樣本被污染，要求在新鮮時便檢測，一旦血清樣本被污染，一些細菌中存在的內源性辣根過氧化物酶便會形成非特異性感染，引起結果出現假陽性。④樣本保存不當。針對在 5天內檢測的血清樣本需要將其保存在4℃的環境中，如果超過1周檢測的樣本則需要低溫冷凍保存。（2）操作因素。在洗滌過程中伴有溢出的情況，導致強陽性樣本的反應液對周邊的陰性孔造成污染而產生假陽性，當洗滌的次數少或者洗滌時間短，導致洗滌不夠充分，板孔內殘留酶試劑導致檢測結果呈假陽性，另外底物液反復使用長時間遭受強光照射或者被污染時也會導致檢測結果呈陽性[4]。

綜上所述，梅毒血清學檢查作為臨床中診斷梅毒的重要依據，但是并非唯一依據。在梅毒的診斷方面，除了要結合化驗結果，還需要結合患者的生活史和既往病史，再結合詳細的體格檢查，并在梅毒酶聯免疫吸附試驗過程中，控制好樣本的質量，以免樣本分離不當，引起樣本溶血或者被細菌污染等等。在實施梅毒酶聯免疫吸附試驗檢測過程中，必須嚴格按照相關操作規程執行，針對檢測結果為陽性，需要進行確認試驗來確診，從而降低假陽性率。

參考文獻

[1]孔韋東.酶聯免疫吸附試驗在梅毒螺旋體感染診斷中的檢驗價值分析[J].現代診斷與治療，2019，30（06）：921-923.

[2]周迪，馬永娟，王彬，許宏霞.酶聯免疫吸附方法檢測梅毒抗體假陽性結果分析[J].黑龍江醫學，2018，42（09）：900-901.

[3]吳爾鋒.酶聯免疫吸附試驗檢測梅毒抗體假陽性的原因分析[J].臨床檢驗雜志（電子版），2018，7（02）：242-244.

[4]韓曉峰，劉蔚，李素君，等.ELISA法篩查梅毒抗體假陽性結果分析及應對措施[J].吉林醫學，2013，34（08）：1491-1493.