復方中草藥對Bal/bc小鼠生長性能以及免疫功能的影響

馬維超，鄧昱晨，鄧偉，張倩，2，穆祥*

（1.北京農學院動物科學技術學院獸醫學（中醫藥）北京市重點實驗室，北京102206；2.中國農業大學動物醫學院，北京100193）

我國是養殖業大國，隨著人們對肉蛋奶需求量的日益增大，畜禽養殖量也是逐年增加。雖然我國一直非常注重食品、藥品安全的問題，但是仍然存在許多不足。當前抗生素、化藥的耐藥性日益嚴重，超級菌株不斷出現，已經威脅到人畜的生命安全；并且抗生素、化藥的濫用，在動物性食品中嚴重殘留，威脅到人類的食品安全；此外，這些藥物通過糞尿在土壤中嚴重殘留，威脅到人類的環境安全[1]。我國中獸藥資源豐富，歷史悠久，有著獨特的優勢。提倡綠色養殖，在合理使用抗生素的基礎上，使用復方中藥來解決當下問題是一個行之有效的解決辦法。

花椒是我國傳統的“八大調味品”之一，栽培歷史悠久，資源豐富。在中藥中花椒籽稱椒目，在我國產量豐富，是花椒果皮生產中的主要副產物，其理論產量是花椒果皮的120%，但是長期以來未被充分利用[2]。花椒籽中含有豐富的蛋白成分具有抗菌，抗氧化，降血壓等功能亟待開發以充分利用[3]。花椒籽味苦、辛，性寒，有小毒，主入脾、膀胱二經，具有利水、平喘之功效，主治水腫脹滿、痰飲喘逆之癥，兼有治療盜汗、腎虛、耳鳴等功效[4]。本試驗中以花椒籽為主藥來探究在綠色養殖大背景下對動物生產有無積極意義。

1 材料和方法

1.1 試驗動物選擇與分組

試驗選用10-12g雄性Bal/bc小鼠60只，隨機分成4組，試驗周期為15天。Ⅰ組為空白對照組，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分別為低、中、高劑量組。

1.2 試驗材料

復方中草藥以健脾益氣、醒脾開胃、消食導滯為主要組方原則配制。復方中草藥主要包括：花椒籽、炒白術、生甘草等，均購自北京同仁堂；基礎日糧使用大小鼠維持飼料購自北京科澳協力飼料有限公司，給藥組飼料在此基礎上添加中藥復方，添加量不超過1%。

1.3 飼養管理

各組自由采食和飲水，嚴格按照常規飼養條件進行試驗。試驗期間詳細記錄各組的采食量及各組小鼠的健康狀況。

1.4 測定指標和方法

1.4.1 生長性能

分別在第1天和第15天稱量體重和采食量，計算各組平均日增重、平均日采食量和料肉比。

1.4.2 生長因子以及血清生化指標的測定

試驗結束后，對每個試驗組小鼠眼球采血，室溫靜置1h后3000r/min離心10min收集血清。每組隨機抽取5只小鼠檢測血清總蛋白（TP）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、白蛋白（ALB）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）含量。其余小鼠使用酶聯生物生長激素釋放肽、生長激素抑制激素、胰島素樣因子Ⅰ試劑盒檢測其血清中對應因子的含量。

1.4.3 免疫器官指數測定及CCK-8法檢測脾淋巴細胞增殖功能

小鼠采血后進行解剖，無菌取脾臟和胸腺并稱重，計算免疫器官指數。每組隨機取5只研磨脾臟，制成脾細胞懸液。裂解紅細胞并用無菌的PBS溶液洗滌，細胞計數，確保活細胞數在95%以上。最后用含10%血清的1640細胞培養液將小鼠淋巴細胞濃度調整為5x106細胞/ml。將96孔細胞培養板的每個孔中加入100uL細胞懸液。2h后每孔加入10ul5mg/ml的ConA，24h后每孔加10ulCCK-8(日本同仁），37度孵育2h后，450nm測定OD值。

1.5 統計分析

試驗結果用SPSS19.0統計學軟件處理，結果采用平均值±標準差表示，以P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結果

2.1 復方中草藥對小鼠生長性能的影響

試驗期間對小鼠體重、采食量進行記錄，分析結果如圖1所示。中劑量組平均日增重極顯著高于對照組（P＜0.01），高劑量組顯著高于對照組（P＜0.05）；中劑量組料肉比極顯著低于對照組（P＜0.01）。可見，中、高劑量組均表現出促進小鼠增長的趨勢。

圖1 復方中草藥對小鼠生長性能的影響

2.2 復方中草藥對小鼠生長相關激素釋放量的影響

由圖2可知，中劑量組生長激素釋放肽的釋放量顯著高于對照組（P＜0.05），生長激素釋放抑制激素和胰島素樣因子Ⅰ的釋放量與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

圖2 復方中草藥對小鼠生長相關激素釋放量的影響

表1 復方中草藥對小鼠生化指標的影響

2.3 復方中草藥對小鼠血清生化指標的影響

由表1可知，低劑量組血清中尿酸和甘油三酯的含量顯著低于對照組（P＜0.05），其他指標與對照組相比均無顯著差異（P＞0.05）。

2.4 復方中草藥對小鼠胸腺指數和脾臟指數的影響

由圖3可知，不同劑量組胸腺指數、脾臟指數與對照組相比均無顯著差異（P＞0.05）。

圖3 復方中草藥對小鼠免疫器官指數的影響

2.5 復方中草藥對小鼠脾淋巴細胞增殖功能的影響

由圖4可知，各試驗組小鼠脾淋巴細胞在ConA刺激后均表現出不同程度的增殖。在作用24h后，低劑量組淋巴細胞增殖率顯著高于對照組（P＜0.05），中劑量組顯著高于對照組（P＜0.05）；在作用48h后，中劑量組淋巴細胞增殖率顯著高于對照組（P＜0.05），其他組與對照組相比均無顯著差異（P＞0.05)。

圖4 復方中草藥對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響

3 討論

中草藥為天然物質，主要由動植物藥和礦物藥組成，其中以植物藥為主；我國是中草藥的發源地，目前擁有約12000種藥用植物，是藥源最豐富的國家之一[5]。花椒籽作為眾多中藥中的一種，目前來說研究較少，開發潛力巨大。在姜太玲[6]的研究中對花椒籽中活性蛋白進行研究，研究表明花椒籽中活性蛋白具有很好的熱、酸堿、金屬離子和有機溶劑穩定性，而表面活性劑能使抗菌蛋白的抑菌活性顯著增強。本試驗中復方中草藥中還包括炒白術和生甘草等，中醫認為麩炒白術可用于脾胃不和、運化失常、食少脹滿倦怠乏力、表虛自汗[7]。在李瀅[8]的研究中印證了炒白術“減酮減燥，增酯增效”炮制理論的合理性與科學性。王志芳[9]認為生甘草外赤而內黃，離包坤土，得土中陰氣最強，其味甘而性涼，長于清熱解毒，緩急止痛。但其實更重要的是取其“緩和”之性，緩和清熱方或溫熱方中藥力迅猛之弊，而令其藥力徐徐圖之，祛邪務盡而不傷正，或給予正氣恢復余地。其實也就是用了甘草的調和藥性的作用。

生長激素釋放肽(Ghrelin)是一種主要由胃的內分泌細胞(X/A樣細胞)分泌的腦腸肽[10]，可以刺激生長激素分泌、調節胃腸道動力、調控胃酸分泌、參與能量代謝、免疫、記憶、睡眠等較為廣泛的生物學效應；生長激素釋放肽與消化系統疾病之間的關聯的研究越來越深入[11]。動物的生長是由許多生長因子調控的，其中生長激素/胰島素樣生長因子-I是調節機體生長的重要調節因子之一。動物生長性能一般通過其經濟價值來體現，即平均日增重和料肉比。在本試驗中，中劑量組即含有20g/kg復方中草藥鼠糧組可以極顯著提高Bal/bc小鼠的平均日增重（P＜0.01），且料肉比極顯著低于對照組（P＜0.01），說明中劑量組小鼠飼料轉化率顯著升高，可能與飼料中添加的中藥有關。高劑量組平均日增重顯著高于對照組（P＜0.05），但料肉比與對照組相比無顯著差異（P＞0.05）。通過檢測血清中三種生長因子的含量可以了解到中劑量組生長激素釋放肽的釋放量顯著高于對照組（P＜0.05），生長激素釋放抑制激素和胰島素樣因子Ⅰ的釋放量與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。血液生化指標是機體生理代謝狀況的直觀反映，可以通過檢測血液生化指標了解機體新陳代謝機能及營養物質代謝狀況[13]。結果中低劑量組血清中尿酸和甘油三酯的含量顯著低于對照組（P＜0.05），而其他組與對照組相比均無顯著差異，說明中、高劑量組小鼠代謝良好機能正常，但低劑量組還需進一步探討。

脾臟指數和胸腺指數是兩個衡量機體免疫功能的指標，一般認為，兩個指數值升高與機體免疫功能提高成正相關。本試驗中發現中草藥復方對小鼠免疫功能有一定提高，但也沒有產生不利影響。脾淋巴細胞增殖是反映機體細胞免疫與體液免疫最直接的指標，通過促進淋巴細胞增殖，達到增強機體免疫力的目的。龐敏[14]等研究中術芩總多糖能促進免疫抑制小鼠體外淋巴細胞增殖，增強免疫功能。本試驗中各試驗組小鼠脾淋巴細胞在ConA刺激后均表現出不同程度的增殖。在作用24h后，低劑量組淋巴細胞增殖率顯著高于對照組（P＜0.05），中劑量組顯著高于對照組（P＜0.05）；在作用48h后，中劑量組淋巴細胞增殖率顯著高于對照組（P＜0.05），說明中劑量組可以提高小鼠的免疫功能。

綜上所述，在鼠糧中添加20g/kg復方中草藥可以顯著提高Bal/bc小鼠的生長性能，并且可以一定程度上提高其免疫功能。