circRNA表達(dá)譜用于胃癌診斷的Meta分析

徐世友 陳彥彬 袁鵬飛 雷亮亮 劉德純

[摘要] 目的 采用Meta分析評(píng)價(jià)環(huán)形RNA（circRNA）表達(dá)譜在胃癌診斷中的價(jià)值。 方法 在萬(wàn)方、中國(guó)知網(wǎng)、PubMed、EMBASE等數(shù)據(jù)檢索circRNA用于胃癌診斷的中英文文獻(xiàn)，檢索時(shí)限為建庫(kù)至2018年11月30日。采用診斷性試驗(yàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)量表2（QUADAS-2）評(píng)價(jià)文獻(xiàn)質(zhì)量，采用Stata 12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)合并，并行敏感性分析、Meta回歸分析探討異質(zhì)性來(lái)源，通過(guò)Deek′s漏斗圖檢測(cè)circRNA表達(dá)譜用于胃癌診斷的發(fā)表偏倚。 結(jié)果 共納入符合條件的診斷性文獻(xiàn)12篇。circRNA表達(dá)譜診斷胃癌匯總的曲線下面積（AUC）為0.80，對(duì)應(yīng)敏感度、特異度、診斷比值比（DOR）及其95%CI分別為0.69（95%CI：0.66～0.71，P = 0.000）、0.73（95%CI：0.70～0.75，P = 0.000）和7.42（95%CI：6.01～9.16，P = 0.294）。亞組分析顯示，circRNA表達(dá)譜分析在血漿來(lái)源中的AUC（0.84）值高于組織（0.78），但Z檢驗(yàn)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.236）。 結(jié)論 circRNA表達(dá)譜在胃癌中具有較高的診斷價(jià)值，有望成為胃癌的輔助診斷指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 環(huán)形RNA;胃癌;診斷;Meta分析

[中圖分類號(hào)] R735.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）09（b）-0104-05

Application of circRNA expression profile for the diagnosis of gastric cancer：a Meta-analysis

XU Shiyou? ?CHEN Yanbin? ?YUAN Pengfei? ?LEI Liangliang? ?LIU Dechun▲

Department of Gastrointestinal Surgery， and College of Clinical Medical College He′nan University of Science and Technology? the First Affiliated Hospital of He′nan University of Science and Technology， He′nan Province， Luoyang? ?471003， China

[Abstract] Objective To explore the value of circRNA expression profile in the diagnosis of gastric cancer by meta-analysis. Methods Chinese and English literatures on circRNA used for gastric cancer diagnosis were searched from Datebase of Wanfang， CNKI， PubMed and EMBASE from the time of building database to November 30， 2018. The quality of the literature was evaluated by quality assessment of diagnostic accuracy studies-2 （QUADAS-2）; the overall data was combined using Stata 12.0; sensitivity analysis and meta-regression analysis were conducted to explore the sources of heterogeneity; circRNA expression profile used for the diagnosis of gastric cancer was detected by Deek′s funnel plot. Results A total of 12 eligible articles were enrolled. The total area under the curve （AUC） for diagnosis of gastric cancer by circRNA expression profile was 0.80. Corresponding sensitivity， specificity， diagnostic odds ratio （DOR） and 95%CI were 0.69 （95%CI： 0.66-0.71， P = 0.000）， 0.73 （95%CI： 0.70-0.75， P = 0.000） and 7.42 （95%CI： 6.01-9.16， P = 0.294）， respectively. Subgroup analysis showed that the AUC value of circRNA expression profile in plasma （0.84） was higher than that in tissue （0.78）， but there was no statistical difference in Z-test （P = 0.236）. Conclusion CircRNA expression profile has relatively high diagnostic value in gastric cancer and it is expected to become an auxiliary diagnostic indicator for gastric cancer.

[Key words] Circular RNA; Gastric cancer; Diagnosis; Meta-analysis

國(guó)內(nèi)2015年流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，胃癌的發(fā)病率在所有腫瘤中位居第二位，其死亡率在男性、女性中分別居第三和第二位[1]。目前，胃癌的臨床診斷仍依賴于內(nèi)鏡下活檢和病理組織學(xué)檢查[2]。然而病理組織活檢創(chuàng)傷性大，不易被患者接受，另外因取材部位局限極易造成漏診。胃癌診斷常用的血清標(biāo)志物包括癌胚抗原（CEA）、糖類抗原（CA19-9與CA72-4）等，診斷的準(zhǔn)確性不高[3]。環(huán)形RNA（circular RNA，circRNA）是一類由特殊剪接機(jī)制形成的、具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)、大量存在于真核轉(zhuǎn)錄組中的非編碼RNA[4-5]。研究表明，胃癌中存在多種circRNA分子的表達(dá)異常，提示此類circRNA分子異常表達(dá)譜在胃癌的診斷中具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值[6-17]。本研究擬通過(guò)系統(tǒng)性的Meta分析，評(píng)價(jià)已報(bào)道的circRNA分子在胃癌診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 檢索策略

系統(tǒng)性檢索PubMed、EMBASE、知網(wǎng)（CNKI）、西文生物醫(yī)學(xué)期刊文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方和維普等在線數(shù)據(jù)平臺(tái)，收集關(guān)于circRNA用于胃癌診斷的相關(guān)文獻(xiàn)，時(shí)間為建庫(kù)至2018年11月30日。使用的檢索詞包括circular RNA、circRNA、環(huán)行RNA、環(huán)狀RNA、胃癌、gastric carcinoma、gastric cancer、gastric naplasm、stomach cancer、診斷、diagnosis等。檢索時(shí)自由詞與主題組合檢索。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①內(nèi)容關(guān)于circRNA在胃癌中的診斷;②病例數(shù)明確，可用于構(gòu)建2×2四格表。排除標(biāo)準(zhǔn)：①用于分析的關(guān)鍵數(shù)據(jù)不足;②樣本例數(shù)<20例;③非診斷性研究、基礎(chǔ)性研究、綜述等。

1.3 資料提取

資料提取內(nèi)容包括標(biāo)題、第一作者、發(fā)表年限、研究人群、病例數(shù)、circRNA分子名稱、金標(biāo)準(zhǔn)、檢測(cè)方法、內(nèi)參基因、Cut-off值、敏感度、特異度等。存在差異或分歧時(shí)經(jīng)組內(nèi)討論解決。

1.4 研究質(zhì)量評(píng)價(jià)

依據(jù)“診斷性試驗(yàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)量表2（QUADAS-2）”工具評(píng)價(jià)問(wèn)詢質(zhì)量[18]。QUADAS-2分別從“病例選擇、待評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)、金標(biāo)準(zhǔn)、病例流程和進(jìn)展情況、偏倚風(fēng)險(xiǎn)（病例選擇、待評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)、金標(biāo)準(zhǔn)、病例流程和進(jìn)展情況）和適用性（病例選擇、待評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)、金標(biāo)準(zhǔn)）”等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，每項(xiàng)可評(píng)價(jià)為“是（得1分）”“否或不清楚（得0分）”，研究總得分≥4分時(shí)認(rèn)為質(zhì)量較高[19]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用MetaDiSc 1.4對(duì)診斷性指標(biāo)敏感度、特異度、陽(yáng)性似然比（PLR）、陰性似然比（NLR）、診斷的比值比（DOR）、AUC及95%可信區(qū)間（CI）進(jìn)行合并。利用Spearman相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)評(píng)估研究間是否存在閾值效應(yīng);通過(guò)Cochran′-Q檢驗(yàn)、I2檢驗(yàn)評(píng)估非閾值效應(yīng)來(lái)源異質(zhì)性，P < 0.01或I2 > 50%時(shí)認(rèn)為存在顯著異質(zhì)性。進(jìn)行亞組分析、敏感性分析和Meta回歸分析探討異質(zhì)性來(lái)源。利用Z檢驗(yàn)對(duì)亞組分析組間的AUC進(jìn)行差異比較。通過(guò)Deek′s漏斗圖評(píng)估發(fā)表偏倚，P < 0.1時(shí)提示存在發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)納入過(guò)程

通過(guò)檢索數(shù)據(jù)庫(kù)共搜到147篇的中英文文獻(xiàn)，剔除重復(fù)文獻(xiàn)35篇。評(píng)估文題和摘要后，排除98篇文獻(xiàn)。剩余14篇文獻(xiàn)全文評(píng)估后進(jìn)一步排除2篇文獻(xiàn)。最終12篇文獻(xiàn)納入統(tǒng)計(jì)分析[6-17]。文獻(xiàn)篩選流程見(jiàn)圖1。

2.2 資料特點(diǎn)

納入12篇文獻(xiàn)共含1086例胃癌患者和1058例非癌對(duì)照。所有胃癌患者確診的金標(biāo)準(zhǔn)為組織病理學(xué)檢查。組織和血漿樣本均為術(shù)前獲得。circRNA表達(dá)譜共含有12種分子，且在胃癌患者中均為表達(dá)下調(diào)。circRNA檢測(cè)均基于qRT-PCR，相對(duì)定量以GAPDH為內(nèi)參照基因。納入研究的資料特點(diǎn)見(jiàn)表1。

2.3 文獻(xiàn)質(zhì)量

QUADAS-2評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，兩項(xiàng)研究Li等[8]和Huang等[9]累計(jì)得分為3分，其他研究累計(jì)得分均≥4分，說(shuō)明納入文獻(xiàn)的整體質(zhì)量較高。見(jiàn)圖2和表1。

2.4 Meta分析

圖3結(jié)果顯示，circRNA表達(dá)譜診斷胃癌的合并敏感度為0.69（95%CI：0.66～0.71，P = 0.000），特異度為0.73（95%CI：0.70～0.75，P = 0.000），PLR為2.77（95%CI：2.15～3.57，P = 0.000），NLR為0.40（95%CI：0.33～0.49，P = 0.000），AUC為0.80（圖3A），相應(yīng)的DOR為7.42（95%CI：6.01～9.16，P = 0.294）（圖3B）。Spearman相關(guān)系數(shù)顯示合并效應(yīng)P = 0.002，提示存在閾值效應(yīng);Cochran′-Q、I2檢驗(yàn)對(duì)應(yīng)P = 0.294，I2 = 14.6%（圖3B），提示研究間不存在非閾值效應(yīng)引起的異質(zhì)性，故進(jìn)一步行亞組分析。亞組分析顯示，血漿來(lái)源的circRNA表達(dá)譜分析對(duì)胃癌的AUC=0.84（207例，圖4A），數(shù)值高于組織來(lái)源AUC=0.78（1071例;圖4B），但Z檢驗(yàn)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.236）。本研究進(jìn)一步剔除2項(xiàng)QUADAS-2評(píng)分<4分的研究[8-9]，結(jié)果顯示，合并的敏感度、特異度、PLR、NLR、DOR和AUC分別為0.67（95%CI：0.64～0.70，P = 0.000）、0.75（95%CI：0.72～0.77，P = 0.000）、2.97（95%CI：2.17～4.08，P = 0.000）、0.42（95%CI：0.35～0.52，P = 0.000）、7.53（95%CI：5.88～9.65，P = 0.117）和0.81。

2.5 敏感性分析和Meta回歸分析

敏感性分析結(jié)果顯示，納入12項(xiàng)研究數(shù)據(jù)均勻分布，說(shuō)明研究的同質(zhì)性較好。見(jiàn)圖5。Meta回歸分析采用的變量參照文獻(xiàn)[20]。結(jié)果顯示，截?cái)嘀翟O(shè)置（P = 0.026）可能是引起異質(zhì)性的重要因素，其他變量包括樣本類型（P = 0.771）、病例數(shù)（P = 0.860）、QUADAS評(píng)分（P = 0.670）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

2.6 發(fā)表偏倚

Deek′s定量漏斗圖得到檢驗(yàn)P = 0.433，提示研究間不存在發(fā)表偏倚。見(jiàn)圖5。

3 討論

circRNA源于外顯子轉(zhuǎn)錄本剪接的mRNA前體或內(nèi)含子[21]。circRNA分子呈封閉環(huán)狀結(jié)構(gòu)，不容易被RNA外切酶降解，在組織或體液中表達(dá)更穩(wěn)定，使得其作為惡性腫瘤的潛在標(biāo)志物具有明顯的優(yōu)勢(shì)。近年越來(lái)越多的研究報(bào)道，circRNA在胃癌的臨床診斷中具有潛在應(yīng)用價(jià)值[6-17]。

本研究共納入12項(xiàng)關(guān)于circRNA分子在胃癌診斷中的應(yīng)用研究，含括1086例胃癌患者和1058例非癌對(duì)照。Meta分析發(fā)現(xiàn)，circRNA表達(dá)譜在胃癌的診斷中具有較高的價(jià)值，AUC達(dá)0.80。DOR值可反映診斷結(jié)果與疾病之間的關(guān)聯(lián)程度[22]，其值越大說(shuō)明對(duì)疾病的診斷價(jià)值越高。本研究中DOR為2.77，進(jìn)一步說(shuō)明circRNA表達(dá)譜對(duì)胃癌具有較高的診斷價(jià)值。本研究進(jìn)一步分析了不同樣本類型（血漿和組織）在胃癌患者circRNA檢測(cè)中的差異，雖然合并的AUC在血漿中高于組織（0.84比0.78），但Z檢驗(yàn)比較二者AUC無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因納入關(guān)于血漿的研究?jī)H3篇文獻(xiàn)，樣本數(shù)量小，結(jié)論有待于后期進(jìn)一步證實(shí)。

異質(zhì)性的產(chǎn)生是所有Meta分析研究中不可避免的一個(gè)重要問(wèn)題[23]。本研究中，整體合并效應(yīng)存在閾值效應(yīng)引起的異質(zhì)性。因此，筆者進(jìn)一步對(duì)研究的異質(zhì)性來(lái)源進(jìn)行較深入的探究。首先，通過(guò)敏感性分析對(duì)納入的12項(xiàng)研究的同質(zhì)性進(jìn)行評(píng)估，發(fā)現(xiàn)研究間同質(zhì)性較好。進(jìn)一步回歸分析發(fā)現(xiàn)，不同的截?cái)嘀翟O(shè)置可能是引起研究間異質(zhì)性產(chǎn)生的重要因素。

circRNA表達(dá)譜在胃癌的診斷中具有較高的診斷價(jià)值。是否具有高敏感度和特異度的單個(gè)circRNA分子或circRNA組合用于胃癌診斷，以及circRNA的檢測(cè)基質(zhì)等問(wèn)題有待于進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? Chen W，Zheng R，Baade PD，et al. Cancer statistics in China，2015 [J]. CA Cancer J Clin，2016，66（2）：115-132.

[2]? 沙杰，李學(xué)良.早期胃癌內(nèi)鏡診斷進(jìn)展[J].國(guó)際消化病雜志，2011，31（4）：209-212.

[3]? 汝童，劉鐵夫.胃癌診斷的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2014， 20（24）：4475-4477.

[4]? Hsiao KY，Sun HS，Tsai SJ. Circular RNA - New member of noncoding RNA with novel functions [J]. Exp Biol Med （Maywood），2017，242（11）：1136-1141.

[5]? Wilusz JE，Sharp PA. A circuitous route to noncoding RNA [J]. Science，2013，340（6131）：440-441.

[6]? Lu R，Shao Y，Ye G，et al. Low expression of hsa_circ_ 0006633 in human gastric cancer and its clinical significances [J]. Tumour Biol，2017，39（6）：1010428317704175.

[7]? Li WH，Song YC，Zhang H，et al. Decreased Expression of Hsa_circ_00001649 in Gastric Cancer and Its Clinical Significance [J]. Dis Markers，2017，2017：4587698.

[8]? Li P，Chen S，Chen H，et al. Using circular RNA as a novel type of biomarker in the screening of gastric cancer [J]. Clin Chim Acta，2015，444：132-136.

[9]? Huang M，He YR，Liang LC，et al. Circular RNA hsa_circ_0000745 may serve as a diagnostic marker for gastric cancer [J]. World J Gastroenterol，2017，23（34）：6330-6338.

[10]? Sun H，Tang W，Rong D，et al. Hsa_circ_0000520，a potential new circular RNA biomarker，is involved in gastric carcinoma [J]. Cancer Biomark，2018，21（2）：299-306.

[11]? Chen S，Li T，Zhao Q，et al. Using circular RNA hsa_circ_0000190 as a new biomarker in the diagnosis of gastric cancer [J]. Clin Chim Acta，2017，466：167-171.

[12]? Xie Y，Shao Y，Sun W，et al. Downregulated expression of hsa_circ_0074362 in gastric cancer and its potential diagnostic values [J]. Biomark Med，2018，12（1）：11-20.

[13]? Shao Y，Chen L，Lu R，et al. Decreased expression of hsa_circ_0001895 in human gastric cancer and its clinical significances [J]. Tumour Biol，2017，39（4）：10104283 17699125.

[14]? Shao Y，Li J，Lu R，et al. Global circular RNA expression profile of human gastric cancer and its clinical significance [J]. Cancer Med，2017，6（6）：1173-1180.

[15]? Shao Y，Yang Y，Lu R，et al. Identifcation of tissue-specifc circRNA hsa_circ_0000705 as an indicator for human gastric cancer [J]. Int J Clin Exp Pathol，2017，10（3）：3151-3156.

[16]? Tian M，Chen R，Li T，et al. Reduced expression of circRNA hsa_circ_0003159 in gastric cancer and its clinical significance [J]. J Clin Lab Anal，2018，32（3）：1-4.

[17]? Zhao Q，Chen S，Li T，et al. Clinical values of circular RNA 0000181 in the screening of gastric cancer [J]. J Clin Lab Anal，2018，32（4）：e22333.

[18]? Whiting PF，Rutjes AW，Westwood ME，et al. QUADAS-2：a revised tool for the quality assessment of diagnostic accuracy studies [J]. Ann Intern Med，2011，155（8）：529-536.

[19]? Ebell MH，Culp MB，Radke TJ. A Systematic Review of Symptoms for the Diagnosis of Ovarian Cancer [J]. Am J Prev Med，2016，50（3）：384-394.

[20]? Cui Z，Chen Y，Xiao Z，et al. Long noncoding RNAs as auxiliary biomarkers for gastric cancer screening：A pooled analysis of individual studies [J]. Oncotarget，2016，7（18）：25791-25800.

[21]? Starke S，Jost I，Rossbach O，et al. Exon circularization requires canonical splice signals [J]. Cell Rep，2015，10（1）：103-111.

[22]? Glas AS，Lijmer JG，Prins MH，et al. The diagnostic odds ratio：a single indicator of test performance [J]. J Clin Epidemiol，2003，56（11）：1129-1135.

[23]? Higgins JP，Thompson SG. Quantifying heterogeneity in a meta-analysis [J]. Stat Med，2002，21（11）：1539-1558.

（收稿日期：2019-01-06? 本文編輯：張瑜杰）