朱日亨滴丸中廣棗鞣花酸含量測定

格格日勒,那生桑

(1.阿拉善盟蒙醫醫院 藥品質量檢查室,內蒙古 阿拉善盟750300；2.內蒙古醫科大學 蒙醫藥研究院,內蒙古 呼和浩特010010)

朱日亨滴丸是在著名蒙醫專家蘇榮扎布教授治療心臟病的蒙藥驗方——朱日亨水丸的基礎上進行劑型改良而研制的新制劑,由廣棗、紅花、梔子等10味中藥組成,具有清心熱、化瘀血、補心之功效,可用于治療心熱、心赫依、心刺痛、心慌氣短等病證,對冠心病有良好的療效。

相關研究表明[1-4],朱日亨滴丸的君藥廣棗具有抵抗心律失常和心跳減慢、保護心肌缺血、影響血液動力學、抗氧化、提高免疫力、保護神經細胞和抗白血病等作用,其主要活性成分為黃酮類和酚酸類成分。本研究選擇其酚酸類成分鞣花酸作為檢測指標,并通過測定其含量來進行質量控制研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

超高效液相色譜儀WATERS HI3CHA；超聲波清洗器KQ-250DE；微量電子天平AB135-S；電子天平JA5003N。

1.2 試藥

鞣花酸對照品(批號201310),山東省分析檢測中心提供；朱日亨滴丸,由內蒙古醫科大學提供；乙腈為色譜純；水為超純水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠,本實驗研究采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150mm.5μm)；流動相：乙腈－0.1%磷酸水溶液(15∶85)；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：254nm；進樣量：5μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取鞣花酸對照品1 mg,精密稱定,置25 mL的容量瓶中,加甲醇配制成1 mL含0.04 mg鞣花酸的溶液,搖勻,作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品細粉0.5 g,精密稱定,加甲醇10 mL,超聲處理40 min,取出,冷卻,用甲醇定容至10 mL量瓶中,濾過,取續濾液,作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 取處方藥(缺廣棗)按相同工藝制備成陰性對照品,按供試品溶液的制備法制備,作為陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗 按“2.1”項下色譜條件,精密吸取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照品溶液各5μL,分別進樣。鞣花酸的出峰時間約為18.0min,鞣花酸與樣品中其他組分色譜峰可達基線分離,且與相鄰色譜峰分離度7.18,檢測峰理論塔板數10 507,拖尾因子均在0.95～1.05,陰性對照樣品無干擾。見圖1。

圖1 專屬性色譜

2.3.2 線性關系考察 精密稱取鞣花酸對照品,加甲醇制成每1 mL含0.005 mg鞣花酸的對照品溶液,精密吸取1、2、4、6、8、10μL,按“2.1”項下色譜條件,分別進樣。以鞣花酸進樣量(μg)為橫坐標,鞣花酸峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,得鞣花酸的回歸方程為：Y＝5 009 988.493 2X－1 345.202 7(r＝0.999 7)。鞣花酸在0.005～0.05μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系,見表1和圖2。

表1 線性關系考察結果

圖2 鞣花酸標準曲線

2.3.3 精密度試驗 按“2.1”項下色譜條件,精密吸取供試品溶液5μL,連續進樣6次,測定峰面積,結果鞣花酸峰面積的RSD為0.8%,表明儀器的精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液適量,室溫下放置,于0、2、6、8、12、24h分別進樣5μL,按“2.1”項下色譜條件測定,考察其穩定性。鞣花酸峰面積RSD為0.6%,結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.3.5 重復性試驗 取同一批樣品,共6份,精密稱定,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,分別進樣5μL,按“2.1”項下色譜條件進行測定,考察其重復性。鞣花酸峰面積RSD為1.7%,結果表明,上述方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取0.25g已知含量的樣品共六份,分別精密加入0.142 5 mg鞣花酸對照品,按“2.2.2”項下方法制備,分別進樣5μL,按“2.1”項下色譜條件進行測定,計算回收率,結果鞣花酸平均回收率為101.36%。結果見表2。

表2 加樣回收率試驗結果

2.4 樣品含量測定

取3批不同批次的朱日亨滴丸,按“2.2.2”項下方法制備,分別進樣5μL,按“2.1”項下色譜條件進行測定,計算鞣花酸的含量,結果見表3。

表3 含量測定結果

3 討論

本方中其他組分對鞣花酸的測定無干擾,且據報道,鞣花酸具有抗氧化、凝血、降血壓、鎮靜、抗缺氧缺血所致心腦疾病、抗癌等藥理作用[5-9],較符合此成方制劑中廣棗的功效。因此本實驗以鞣花酸為檢測指標,采用HPLC法測定朱日亨滴丸中廣棗的含量,結果表明,本研究所用方法簡便、靈敏、準確、重復性好,為建立朱日亨滴丸的質量標準及合理開發利用提供了實驗依據。