慢性乙型肝炎化學發光HBsAg定量與HBV-DNA相關性研究

李寧俠 王海東 李潔

在世界范圍內都有乙型病毒性肝炎流行，且在各型肝炎中其危害最重，世界范圍內約有3.5億HBV感染者，其中15%～25%患者隨病情發展最終將死于相關的肝損傷、肝硬化和肝細胞癌[1]，對人類健康構成極大威脅。醫學檢驗已經開展了很多相關檢查，理解不同方法學優缺點和相互揚長補短組合，對于慢性乙型肝炎診治有重要意義。本研究對126例慢性乙型肝炎患者兩對半模式、HBsAg定量與HBV-DNA進行回顧統計分析，以期為臨床和檢驗工作者提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料隨機選取2016年6月～2017年1月在我院PCR儀檢測HBV-DNA的患者，結合病史，嚴格按照2015年中華醫學會發布的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準[2]，并排除其他疾病。篩選126例為研究對象，其中男64例，女62例，年齡19～83歲，平均48歲。在本研究HBV-DNA載量分組中，HBV-DNA水平＜1.0E+3IU/ml為低值；HBVDNA水平＜1.0E+7IU/ml且≥1.0E+3IU/ml為中值；HBV-DNA水平≥1.0E+7IU/ml為高值。

1.2 檢測方法使用乙肝五項酶免試劑盒，檢測乙肝兩對半模式；使用乙型肝炎病毒表面抗原測定試劑盒（化學發光微粒子免疫檢測法），檢測HBsAg含量，試劑有效線性范圍0.05～250IU/ml；使用乙肝病毒核酸定量試劑盒在實時熒光定量PCR儀檢測HBV-DNA水平，最低檢測下限1.0E+2IU/ml。

1.3 統計學方法采用SPSS 19.0統計學軟件，計量資料統計描述及交叉表，完成指標分布及多指標率的統計，使用非參數相關系數統計相變量之間相關性。

2 結果

2.1 126例慢性乙肝HBsAg定量分布HBsAg定量最小值0.05IU/ml有5例（4.0%），HBsAg定量0.05～250.00IU/ml有38例（約30.0%），最大值≥250.00 IU/ml有83例，說明標本未稀釋，約66.0%患者的實測值未完全測定出來，只是給出半定量結果。

2.2 126例慢性乙肝HBV-DNA水平分布在126例慢性乙肝患者中，有56例（44.4%）患者HBVDNA病毒載量低或處于低復制，有17例（13.5%）患者HBV-DNA病毒載量高或處于高復制，還有53例（42.1%）患者HBV-DNA病毒載量和復制水平處于中等水平，總體在慢性乙肝患者中，有乙肝病毒HBV-DNA復制的患者占比高達55.6%。

2.3 HBsAg定量與HBV-DNA的相關性HBsAg定量與HBV-DNA之間相關系數-0.063，P值0.486（P＞0.05），說明HBsAg定量與HBV-DNA之間無相關性。

2.4 兩對半模式與HBV-DNA的關系在不同兩對半模式中，HBV-DNA復制水平見表1，兩對半模式與它的乙肝病毒HBV-DNA有一定關系，在1.3.5乙肝模式中，HBV-DNA復制率可以達到71.4%，在1.4.5模式和1.5模式中分別為51.1%和50.0%。

表1 126例不同模式慢性乙型肝炎HBV-DNA復制率

3 討論

乙型肝炎病毒感染的一般病史分為4個階段：免疫耐受期和清除期、低復制期及再活躍期[3]。實驗室通常使用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的方法檢測乙型肝炎病毒，且相當長的時期，將乙肝表面抗原（HBsAg）檢測作為初診或大規模流行病學篩查的首選方法；HBV-DNA水平檢測，常用于判斷傳染性的強弱及抗病毒治療效果，此指標在臨床得到廣泛應用，近年來，隨著HBsAg定量檢測技術發展，該方法臨床應用價值日益受到關注。本研究隨機選取某一時間段，收集在實時熒光定量儀上檢測過HBVDNA的標本為原始樣本，同時結合病史，按照慢性乙型肝炎診斷標準，篩選126例為研究對象，是逆著以往乙肝診斷程序，常規實驗室乙肝診斷順序是先篩查乙肝表面抗原或者兩對半及肝功能，依據以上初檢項目，然后選做HBV-DNA檢測，因此本次研究采用化學發光HBsAg定量與酶聯免疫吸附試驗（ELISA）兩對半模式檢測的方法之間優劣沒有可比性，有研究在低濃度HBsAg檢測方法中，化學發光微粒子免疫分析法（CMIA）靈敏度優于電化學發光免疫分析法（ECLIA）、國產發光方法及ELISA法，對低濃度HBsAg的檢出靈敏度、特異性，ECLIA法與CMIA法一致性較好[4]。本研究中，HBsAg定量與HBV-DNA之間無相關性，在其他研究中顯示患者血清中HBV-DNA水平與HBsAg及HBeAg滴度呈正相關，而且在高濃度HBV-DNA水平中，兩者的一致性更好[5]。本次研究中使用萬泰Caris-200化學發光儀，有效線性范圍0.05～250IU/ml，126例中，≥250 IU/ml樣本有83例，占比66.0%超線性范圍，沒有測出指標真值，即使與另一個定量指標統計相關系數-0.063，所顯示“無相關性”是沒有意義。經研究者文獻匯總分析，一致認為血清HBsAg水平受諸多因素影響，比如HBV變異株、初次感染時間、年齡、性別、人種、檢測方法、治療策略等，但還認為血清HBsAg定量水平在慢性HBV感染病程中和抗病毒治療過程中均有一定的動態變化。血清HBsAg的動態變化為臨床醫師判斷是否選擇抗病毒治療提供了一定的依據，其具體的變化規律不明確，與HBV-DNA等指標的相關性尚存在爭議[6]。在乙肝兩對半中，抗原持續存在或消失是由HBV疾病譜和自然史決定的，而抗體是否出現是由人體免疫應答狀態決定，兩者相對獨立。慢性乙型肝炎HBV-DNA病毒量與它的兩對半模式有一定關系，在1.3.5兩對半模式中，HBV-DNA復制率可以達到71.4%，與536例血清HBeAg陽性的乙型肝炎患者中HBV-DNA陽性檢出率為72.9%的研究結果一致[7]；在1.4.5模式和1.5模式中HBV-DNA復制率分別為51.1%和50.0%，三種兩對半模式HBVDNA復制率均高于50.0%，在HBeAg陰性CHB患者，血清HBV-DNA及HBsAg和HBV cccDNA的相關性研究中，血清HBV-DNA是反映肝纖維化及肝細胞炎癥的指標，預示著HBeAg陰性的CHB患者轉變為再活動期[8]。

本研究顯示，在HBsAg定量指標方法選擇方面，盡可能選擇線性范圍寬的方法和試劑，否則HBsAg定量結果只能用于乙型肝炎感染患者的篩查，不能在抗病毒及遠期療效判斷方面發揮作用，所以，HBsAg定量檢測線性范圍過小，不能完全說明HBsAg定量與HBV-DNA之間無相關性，慢性乙型肝炎患者，無論是哪種兩對半模式，血清中經常監測HBV-DNA復制水平是必需的。