甘露聚糖結合凝集素基因多態性及血漿蛋白水平與兒童巨細胞病毒感染的相關性分析

林莉

人巨細胞病毒（HCMV）屬于皰疹病毒家族，正常人感染HCMV后通常無明顯癥狀，但是如果胎兒或嬰幼兒等免疫功能低下人群感染HCMV會增加先天性畸形、黃疸、肝炎、肺炎、腦炎和紫癜的發生風險，嚴重影響兒童的正常生長發育。本研究選取我院收治的100例巨細胞病毒感染急性期患兒作為研究對象，探討MBL基因多態性及血漿蛋白水平與兒童HCMV感染的相關性，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料本研究選取我院呼吸內科于2015年1月～2017年12月收治的100例巨細胞病毒感染患兒作為HCMV組，同時選取此期間內100例健康體檢的兒童作為對照組。HCMV感染組中，男61例，女 39例；年齡 1～24個月，平均（9.19±2.39）個月；其中肝功能異常82例、肺炎15例、癲癇2例、腸炎6例、血小板減少性紫癜3例、發熱和淋巴結腫大等15例、兩個或多個系統器官功能損害19例。對照組中，男59例，女41例；年齡1～24個月，平均（9.33±2.12）個月；兩組在性別、年齡方面具有可比性（P＞0.05）。HCMV感染組所有患兒均符合我國第二屆全國小兒巨細胞病毒感染學術會議上制定的《巨細胞病毒診斷方案（1998年）》[1]中關于HCMV感染的相關標準。排除標準：①先天性心臟病患兒；②X線胸片及CT顯示間質性肺炎患兒；③甲、丙、丁和戊型肝炎病毒抗體（HBsAg、HBeAg、抗-HBc）陽性者；④抗單純皰疹病毒IgM、風疹病毒IgM、弓形體IgM和EB病毒IgM抗體陽性者；⑤痰培養、痰呼吸道病毒免疫熒光法檢測、肺炎支原體和沙眼衣原體檢測和沙眼衣原體抗體檢測陽性者[2]。

1.2 方法

1.2.1 試劑 人血漿MBL蛋白試劑采用Hycult Biotech公司（荷蘭）生產的試劑盒；TaqDNA聚合酶采用TaKaRa生物工程有限公司生產的相關產品。

1.2.2 MBL基因型檢測 采集受檢者外周血1～2ml，采用苯酚-氯仿法[3]抽提基因組DNA，MBL基因型檢測采用ELISA法[4]，具體方法按照說明書要求進行。

1.3 評價標準治療后，對于臨床癥狀消失、血清抗HCMV-IgM轉陰患兒即可歸為恢復期組[5]。

1.4 統計學方法采用SPSS 16.0統計軟件對所得資料進行統計學分析，計量資料采用±s表示，單因素分析使用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MBL基因完整基因型頻率HCMV感染組的高水平表達基因型YA/YA頻率明顯低于對照組，而低水平基因型YA/XA，YA/YB，XA/XA頻率明顯高于對照組（P＜0.05）；HCMV感染組的野生完整基因型HYPA/HYPA頻率明顯低于對照組，且變異基因型中HYPA/LYPB的頻率明顯高于其他基因型（P＜0.05），見表1。

2.2 血漿MBL蛋白濃度HCMV感染組、恢復期組的血漿MBL蛋白濃度明顯低于對照組，其中恢復期組的血漿MBL蛋白濃度明顯低于HCMV感染組（P＜0.05），見表2。

表1 兩組MBL基因完整基因型頻率對比[n（%）]

表2 各組血漿 MBL 蛋白濃度對比（g/L，±s）

表2 各組血漿 MBL 蛋白濃度對比（g/L，±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與HCMV感染組比較，#P＜0.05

組別 最小值 最大值 平均值HCMV感染組（n=100）21 3372 778.52±34.33*恢復期組（n=52）24 2519 619.36±26.37*#對照組（n=100）4 6165 1039.38±39.97

3 討論

MBL是一種天然的免疫分子，是C型凝集素超家族的主要成員。MBL由3條多肽鏈組成，每條鏈中包括一個凝集素區，能夠對病原體上的甘露糖、N-乙酰葡萄糖、葡萄糖及巖藻糖等碳水化合物進行識別[6]；同時，MBL能夠與病毒中多種糖基相結合，進而達到中和病毒、阻斷病毒擴散的作用，是人體先天免疫的第一道防線。MBL主要通過C3b使病毒被吞噬細胞吞噬，并阻斷病毒與細胞受體結合，使之無法進入細胞，并在體內形成攻膜復合體溶解病毒，進而達到使病毒失活的目的。HCMV感染患兒MBL啟動子區和結構區變異，使血清MBL蛋白水平下降，無法有效抵抗病毒入侵，提高活動性感染的發生風險。

目前，國內外大量研究涉及到MBL基因變異、血漿MBL蛋白水平與感染性疾病之間的相關性探討，但是對于三者之間的聯系尚無一致結論。有研究只進行結構基因檢測，而忽略了單核苷酸多態性對MBL蛋白濃度的影響；還有的學者只進行MBL蛋白濃度檢測，忽略了MBL蛋白作為一種急性反應蛋白在疾病期升高的可能性，這些研究都沒有全面考慮MBL的特性，從而影響了研究結果的準確性[6，7]。

為了提高研究結果的準確性，本研究對MBL啟動子區和外顯子1區在內的6個常見核苷酸變異位點進行全面檢測，同時對HCMV感染組急性期和恢復期的MBL蛋白濃度進行檢測，結果顯示，HCMV感染組的高水平表達基因型YA/YA頻率明顯低于對照組，而低水平基因型YA/XA，YA/YB，XA/XA頻率明顯高于對照組；HCMV感染組的野生完整基因型HYPA/HYPA頻率明顯低于對照組，且變異基因型中HYPA/LYPB的頻率明顯高于其他基因型。此外，研究還發現HCMV感染組、恢復期組的血漿MBL蛋白濃度明顯低于對照組，其中恢復期組的血漿MBL蛋白濃度明顯低于HCMV感染組。

本研究中，研究對象均為年齡≤2歲的嬰幼兒，由于患兒的免疫系統發育尚不完善，尤其是HCMV感染組患兒的巨噬細胞吞噬和抗原呈遞功能的降低，免疫器官與免疫細胞存在不同程度的損傷，CD4+/CD8+T細胞比值下降或倒置，致使T細胞亞群比例失調，因此MBL在HCMV感染中的作用更為重要。但是，MBL與HCMV感染的關系有待于進一步研究，而且在研究樣本中未見C型和D型變異，只有B型變異，考慮與C型和D型變異在我國人群中較為罕見有關。

綜上所述，兒童HCMV感染的發生與MBL基因多態性所致血漿MBL蛋白水平偏低相關，推測MBL對HCMV感染具有一定的抑制作用。