半乳糖凝集素-9與IgA腎病相關性研究

蘇波峰 李鐸 尤小寒

IgA腎病（IgAN）是我國慢性腎小球腎炎最常見的病理類型，發(fā)病機制與CD4+T細胞功能紊亂有關［1-2］。半乳糖凝集素-9（Galectin-9）與其受體結合后可通過誘導CD4+T細胞亞群凋亡，發(fā)揮免疫負調(diào)控作用，與某些自身免疫性疾病和腎臟病的發(fā)生發(fā)展有關。作者通過檢測IgA腎病血清Galectin-9的水平，并與24h尿蛋白定量、腎功能（eGFR）等臨床指標進行相關性分析，以期闡明Galectin-9與IgA腎病的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年7月至2018年12月本院就診并經(jīng)腎活檢確診為IgA腎病患者58例為觀察組（A組），男26例，女32例；平均年齡（35.1±10.3）歲。納入標準：（1）年齡18～60歲；（2）未經(jīng)激素及免疫抑制劑治療。排除標準：（1）過敏性紫癜、肝硬化等引起的繼發(fā)性IgA腎病患者；（2）患有其他自身免疫性疾病、過敏性鼻炎、過敏性皮炎、哮喘、感染（細菌、真菌、病毒）、惡性腫瘤、糖尿病等可導致Galectin-9水平變化的患者；（3）患有嚴重系統(tǒng)性疾病如肝硬化、心力衰竭等患者。依據(jù)24h尿蛋白定量水平分為3個亞組：A1組（18例）≤1.0g，1.0g＜A2組（22例）≤2.0g，A3組（18例）＞2.0g。同期選取30例體檢健康者為對照組（B組），男14例，女16例；平均年齡（33.5±12.1）歲。兩組均簽署受試知情同意書。

1.2 方法 （1）樣本收集及常規(guī)檢查：抽取兩組人員外周血5ml，靜置30min后室溫離心分離血清，-20℃低溫保存，用于血清Galectin-9檢測。同時檢測患者血肌酐（按Cockcroft-Gault公式計算eGFR評估腎功能）、血尿酸、空腹血糖、甘油三酯、總膽固醇、C反應蛋白等指標。A組患者留取24h尿標本測定24h尿蛋白定量，并測定血IgA水平。IgA腎病患者絕大部分都有血尿，但尿檢紅細胞結果容易受飲水、留置時間等多種因素的影響，波動較大，故未納入本次研究范疇。（2）Galectin-9檢測：取上述分離的血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定，其測定原理及操作步驟按所購試劑盒相關說明書進行。Galectin-9 ELISA試劑盒購自武漢USCN公司。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件。計量資料以（s）表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。兩變量間的關系采用Pearson相關分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床資料及實驗室檢查指標比較 見表1。

表1 兩組臨床資料及實驗室檢查指標比較（s）

表1 兩組臨床資料及實驗室檢查指標比較（s）

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2.2 IgA腎病組患者不同程度蛋白尿外周血Galectin-9水平比較 見表2。

表2 IgA腎病不同蛋白尿水平亞組間實驗室檢查指標比較（s）

表2 IgA腎病不同蛋白尿水平亞組間實驗室檢查指標比較（s）

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2.3 IgA腎病組血清Galectin-9水平和臨床指標的相關性分析 Pearson相關分析顯示，A組患者血清Galectin-9水平和性別、年齡、血尿酸、血白蛋白、空腹血糖、甘油三酯、總膽固醇、C反應蛋白、血IgA水平等無相關，與24h尿蛋白量呈正相關（r=0.709，P＜0.01），和 eGFR 呈負相關（r=-0.711，P＜0.01），見圖1。

圖1 IgA腎病組患者血清Galectin-9與24h尿蛋白、eGFR相關性

3 討論

慢性腎小球腎炎是終末期腎臟病（ESRD）的主要病因，IgA腎病是最常見的病理類型，約有15%～20%及30%～40%的IgA腎病患者分別在明確診斷10年及20年內(nèi)進展至ESRD［3］。目前認為，IgA腎病在某種程度上是一種自身免疫性疾病。IgA腎病患者體內(nèi)IgA1糖基化異常導致其被正常抗體識別并結合，形成免疫復合物沉積于腎小球系膜區(qū)，激活補體，引起炎癥因子及血管緊張素Ⅱ等釋放，最終導致系膜細胞增生和足細胞損傷。IgA腎病患者產(chǎn)生的多聚IgA1是由多克隆活B細胞生成，而B細胞分泌多聚IgA1則受到CD4+T細胞的調(diào)控。越來越多的研究表明，IgA腎病的發(fā)生發(fā)展與CD4+T細胞功能紊亂有關。CD4+T細胞亞群Th1/Th2失衡對于IgAN發(fā)生發(fā)展的作用已得到證實［4］。IgA腎病患者外周血中Th1/Th2比例失衡［5］，導致IL-2，IL-6，TNF-α，INF-γ等［6］大量炎癥細胞因子分泌。促炎因子產(chǎn)生增多參與IgA腎病的進展，與臨床病理及臨床表現(xiàn)密切相關［7］，最終導致腎臟纖維化［8］。

半乳糖凝集素-9（Galectin-9）是T淋巴細胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（Tim-3）的配體。Tim-3主要分布于CD4+T細胞亞群Th1細胞表面，Galectin-9與Tim-3結合后可誘導Th1細胞細胞凋亡，調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡，從而在體液免疫和細胞免疫各個階段中發(fā)揮負調(diào)控功能。近年來Galectin-9/Tim-3與自身免疫性疾病的關系逐漸成為研究熱點。研究表明，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者外周血Galectin-9和其受體Tim-3表達均升高，且升高水平與疾病活動度SLEDAI評分呈正相關［9］，Galectin-9/Tim-3可能通過促進相關淋巴細胞亞群細胞凋亡發(fā)揮免疫負調(diào)控和抗炎作用［10-11］。類風濕性關節(jié)炎患者外周血和外周關節(jié)液Galectin-9/Tim-3通路水平也明顯升高，與疾病活動度呈負相關，其表達增加有助于控制疾病活動［12］。

Galectin-9/Tim-3與腎臟疾病的研究也逐漸增多。日本學者發(fā)現(xiàn)2型糖尿病伴慢性腎臟病（CKD）的患者血清Galectin-9水平明顯升高，與其腎小球濾過率（GFR）呈負相關［13］。Guo等證實狼瘡性腎炎患者腎臟組織中Tim-3陽性率顯著高于對照組，且Tim-3表達強度與疾病病理分級及活動度顯著相關［14］。而在自身免疫性疾病抗GBM腎小球腎炎的小鼠模型中［15］，注射Galectin-9激活Galectin-9/Tim-3通路可以減輕抗GBM腎炎小鼠腎臟新月體形成，阻止腎功能進一步惡化，其腎保護作用是通過調(diào)整免疫失衡，抑制Th1和Th17介導的免疫反應和促進Th2細胞功能實現(xiàn)的。

本資料結果表明，Galectin-9水平隨著蛋白尿的增多而增高，與24h尿蛋白定量呈正相關，與腎功能（e-GFR）呈負相關，即Galectin-9水平隨著疾病嚴重程度增加而增高，提示Galectin-9有可能參與IgA腎病的發(fā)生發(fā)展過程。鑒于Galectin-9/Tim-3的免疫負調(diào)控作用，本資料中觀察組血清Galectin-9水平的升高可能是機體對IgA腎病狀態(tài)下免疫性炎癥的代償性反應，機體通過升高Galectin-9，增強與Tim-3的結合，促進相關細胞凋亡，調(diào)節(jié)CD4+T細胞亞群失衡，從而發(fā)揮體液和細胞免疫的負調(diào)控作用，減輕腎損害。已有實驗證實Galectin-9可以改善抗GBM腎小球腎炎小鼠模型的腎損傷害［15］，因此下一步實驗可將Galectin-9應用于IgA腎病動物模型以觀察其對IgA腎病的影響，并對具體機制進行研究。