不同廠家注射用甲磺酸帕珠沙星中甘露醇的含量測定*

晏菊姣，汪鑫，陳蓉，王珺

(武漢藥品醫療器械檢驗所，武漢 430075)

甲磺酸帕珠沙星是日本研究開發的第3代喹諾酮類廣譜抗菌藥，對厭氧菌有較強的抗菌活性[1]。我國目前有甲磺酸帕珠沙星大容量注射液，小容量注射液及凍干粉針三個注射劑型。甘露醇通常可作凍干粉針劑載體，使用較多。《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則0102僅對注射劑中常用抗氧劑與抑菌劑規定一般濃度范圍[2]，對其他添加的輔料僅僅描述為“適量”，注射用輔料的用量不規范影響藥物的療效和安全性。在甲磺酸帕珠沙星系列制劑國家評價性抽驗中，筆者收集7家藥品生產企業23批次注射用甲磺酸帕珠沙星樣品，其中6家生產企業都使用甘露醇，僅1家未使用。從生產企業提供的處方來看，使用量差別比較大。輔料甘露醇的用量不一，可影響產品穩定性和使用時滲透壓不一致，易出現不良反應[3-5]。同時甘露醇具有一定的藥理活性，使用得當可增加制劑的穩定性并降低毒副作用[3]；使用不當則會增加藥物不良反應的發生率。注射劑中應盡量少加添加劑，或用量盡量少達到最好的效果來減少風險。因此，有必要對輔料的含量進行控制[6]，更不能違法添加。筆者采用高效液相色譜-蒸發光散射檢測(HPLC-ELSD)法測定注射用甲磺酸帕珠沙星中甘露醇含量，并進行方法學考察，為該品種的輔料用量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1儀器 WATERS高效液相色譜儀(帶四元泵)；ALLTECH2000蒸發光散射檢測器；自動進樣器；XS105電子天平(梅特勒-托利多儀器公司，感量：0.01 mg)。

1.2試藥 甘露醇對照品(中國食品藥品檢定研究院，含量測定用，批號：100533-201103，含量：98.5%)；乙腈為HPLC級，實驗用水為超純水。注射用甲磺酸帕珠沙星(生產企業7家，23批)。

2 方法與結果

2.1色譜條件 采用依利特NH2色譜柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動相：乙腈-水(90：10)，流速：1 mL·min-1，柱溫：30 ℃。蒸發光散射檢測器，漂移管溫度：90 ℃；空氣流速：2.0 L·min-1。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 取甘露醇對照品40 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2供試品溶液的制備 取供試品適量，加水制成相當于每毫升含甘露醇0.4 mg的溶液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備 按注射用甲磺酸帕珠沙星處方制備不含甘露醇的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.3專屬性實驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性樣品溶液，按“2.1”項色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖。見圖1。結果供試品溶液與對照品溶液色譜呈現保留時間相同的色譜峰，陰性樣品溶液無干擾。在此實驗條件下甘露醇與其他組分分離良好。理論板數按甘露醇峰計算應不低于3000。

1.甘露醇

2.4線性關系實驗 分別精密吸取對照品溶液2,4,5,10,15,20 μL(含甘露醇0.792，1.580，1.979，3.928，5.937，7.916 μg)，按“2.1”項下色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積常用對數(Y)對進樣質量(μg)常用對數(X)進行線性回歸，得回歸方程為：Y=1.581X+5.774，r=0.999 5，線性范圍為0.792～7.916 μg。表明在此范圍內甘露醇進樣質量對數與峰面積對數呈良好的線性關系。

2.5精密度實驗 取“2.2.1”項對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次，峰面積RSD為0.42%。結果表明儀器精密度良好。

2.6穩定性實驗 按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液1份，分別于0，2，8，12，24 h進樣，進樣量為10 μL，結果峰面積的RSD為0.98%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.7重復性實驗 取某企業樣品(批號：130203)，按“2.2.2”項下方法制備，取含量測定濃度的80%、100%、120%溶液各3份，注入液相色譜儀進行測定，計算9份樣品中甘露醇的含量，結果平均值為14.7 mg·g-1，含量的RSD=1.26%(n=9)，結果表明方法的重復性良好。

2.8準確度實驗 精密稱取已測定甘露醇含量的樣品(批號：130203，含量14.7 mg·g-1)適量，精密加入甘露醇，按“2.2.2”項下方法分別配制含量測定濃度80%、100%、120%的溶液各3份，注入液相色譜儀進行測定，計算9份樣品的回收率，分別為：100.77%，103.01%，104.68%，100.33%，97.83%，100.82%，98.72%，102.04%，102.88%；平均回收率為101.2%，RSD=2.1%。

2.9樣品測定結果 取7個廠家生產的注射用甲磺酸帕珠沙星23批次，依法測定，結果其中G生產企業6個批次均未檢出甘露醇，其他企業測定結果見表1。

3 討論

3.1方法的必要性 藥用輔料是制劑一個重要組成成分，直接進入到人體，輔料質量的好壞、量的多少與人的生命健康息息相關。凍干粉針由于輔料和工藝的原因,吸濕性一般均較強[7]，易影響藥物質量，同時鑒于甘露醇自身的生理活性問題(作降壓劑、利尿劑、脫水劑，對人體腸道的清理和輕微的脫水作用)[8]，為保證安全用藥，有必要考察輔料的投料情況。

3.2方法實用性 企業在研發過程中可通過此測定方法篩選樣品工藝，確定甘露醇的用量，保證藥品質量。從收集到樣品來看，各企業的甘露醇用量為0～345.16 mg·g-1，差異很大，甘露醇雖然利于復溶，但其本身的質量和加入量會影響制劑的質量，包括細菌內毒素[9]、不溶性微粒、溶液的澄清度和顏色、水分等。某企業甘露醇加入與主藥比達到1：1，凍干過程中甘露醇量大，空隙致密，水分不易逸出，這也是該企業產品水分較其他企業偏高的原因之一。輔料量影響藥物制劑的穩定性，并增加安全風險，因此各企業的甘露醇處方量值得商榷。

表1 不同生產企業注射用甲磺酸帕珠沙星中甘露醇含量

生產企業和監管部門通過此測定方法對生產過程中添加的輔料進行監控，以利于企業嚴格按規范進行生產，保證藥品的安全性。從檢驗結果來看，各企業甘露醇為標示量73.3%～108.2%，投料基本符合處方，但部分企業批次間波動較大，不利于產品質量控制。

3.3測定方法的選擇 甘露醇自身沒有紫外吸收。其屬于六元醇極性化合物，在常規的C18柱上幾乎無保留。文獻有采用高效液相色譜法(氨基柱[10]或強陽離子交換柱[11-12])-RID及HPLC-ELSD[13]，但強陽離子交換柱較昂貴，蒸發光散射器適用范圍廣，比RID受外界因素干擾較少[10-13]。考慮到測定對象是注射劑中輔料，主藥含量較大，為避免主藥和其他輔料的干擾，選擇使用氨基柱和ELSD。適當增強乙腈的比例，檢測器的基線噪聲降低、分離度變高。該實驗中乙腈-水(90：10)時分離度較好。結果表明本研究中方法專屬性強，精密度、穩定性較好，準確度較高，能客觀反映甘露醇的含量，可作為注射用甲磺酸帕珠沙星中輔料甘露醇的含量檢測方法。