高效液相色譜法測定芝麻丸中芝麻素的含量

曹亞蘭，羅艷萍，羅錦杰，鄭麗美

（廣東一方制藥有限公司，廣東佛山 528244）

0 引言

芝麻丸為廣東一方制藥有限公司研發的產品，主要原料為黑芝麻，含有優質的蛋白質、豐富的礦物質，以及不飽和脂肪酸、維E和珍貴的芝麻素及黑色素，可延緩衰老、滋補肝腎、潤養脾肺[1]。芝麻素是其主要活性成分之一，具有抗氧化、降低膽固醇、保護肝臟等生理活性功能[2-3]。試驗采用高效液相色譜法（HPLC）測定芝麻丸中芝麻素的含量，為芝麻丸的品質控制提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

芝麻丸（批號：S20180903，S20180918，S20181021，S20181115，S20181201，S20181225，S20190110）廣東一方制藥有限公司提供；芝麻素對照品（批號：0836-200002），中國食品藥品檢定研究院提供。

1.2 儀器與設備

Aglient 1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫公司產品；AB265-S/10型電子天平，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司產品；KQ-500DE型超聲波清洗器，昆明市超聲儀器有限公司產品；JYL-C022E型九陽料理機，九陽股份有限公司產品；TDL-4000C型臺式離心機，上海安亭科學儀器廠產品。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5μm），流動相為80%甲醇，檢測波長290 nm，對照品溶液進樣量20μL，供試品溶液進樣量10μL，流速0.8 mL/min，柱溫25℃。

1.3.2 芝麻素對照品儲備液

精密稱取4.0 mg芝麻素對照品，置于200 mL量瓶中，用適量80%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得20μg/mL的對照品儲備液。

1.3.3 供試品溶液

精密稱取粉碎后的芝麻丸約2 g，置于九陽料理機中，加入體積分數80%的甲醇溶液40 mL，均漿30 s，置于具塞離心管中，超聲處理30 min，置于離心機中以轉速4 000 r/min離心5 min，重復提取2次，合并上清液于100 mL量瓶中，用體積分數80%甲醇溶液定容至刻度，混勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0.45μm濾膜）濾過，取續濾液，即得。

2 結果與分析

2.1 專屬性考查

取芝麻素對照品儲備液與供試品溶液，按上述色譜條件分別注入高效液相色譜儀測定。

芝麻素含量測定HPLC色譜圖見圖1。

圖1 芝麻素含量測定HPLC色譜圖

供試品溶液中其他未知成分與芝麻素分離完全，對測定無干擾，芝麻素的保留時間為6.7 min。

2.2 線性關系考查

精密移取芝麻素對照品儲備液適量，分別配制質量濃度為1，2，4，10，20μg/mL系列芝麻素對照品溶液，分別進樣20μL，按上述色譜條件進行測定，記錄峰面積。以芝麻素峰面積積分值（mV×S）為縱坐標（Y）、芝麻素對照品溶液進樣量（μg）為橫坐標（X），進行線性回歸，得回歸方程為Y=1 453.7X+2.268 9（R2=0.999 9），結果表明芝麻素在0.02～0.40μg的范圍內呈良好線性關系。

2.3 精密度試驗

取芝麻素對照品溶液（10μg/mL），按上述色譜條件重復測定6次，每次進樣量為20μL，芝麻素峰面積的RSD為0.16%，表明儀器精密度較好。

2.4 穩定性試驗

按1.3.3的方法制備芝麻丸供試品溶液（批號：S20180903），按照上述色譜條件分別于0，1，2，4，6，8，12 h進行測定，每次進樣量為10μL，測得芝麻素峰面積RSD為0.39%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.5 重復性試驗

按1.3.3方法制備6份芝麻丸供試品溶液（批號：S20180903），按照上述色譜條件測定芝麻素的含量。芝麻丸供試品中芝麻素含量測定結果的RSD為2.06%，表明該方法重復性較好。

2.6 加樣回收率試驗

取已知含量的同一批芝麻丸供試品（批號：S20180903，含量為0.62 mg/g）適量，粉碎，取約1.0 g，精密稱定，共9份，分別精密加入適量的芝麻素對照品，按1.3.3方法，制備低、中、高3個質量濃度水平的供試品溶液，在上述色譜條件下測定，計算回收率。

芝麻素的加樣回收率試驗結果見表1。

表1 芝麻素的加樣回收率試驗結果（9份樣品）

由表1可知，芝麻素平均回收率為99.14%～100.02%，RSD為0.40%～1.45%。表明所制作的芝麻丸中芝麻素含量測定方法準確、可靠。

2.7 樣品測定

按照1.3.3方法制備7批芝麻丸供試品溶液，按上述1.3.1色譜條件測定，計算芝麻丸中芝麻素含量。

樣品測定結果見表2。

表2 樣品測定結果（n=3）

3 結論

考查了超聲處理和加熱回流不同提取方式對芝麻丸中芝麻素提取的影響[4]，結果表明，2種提取方法對芝麻素的提取均較完全，測定結果可靠，沒有顯著性差異，最終采用超聲處理30 min的提取方式。該方法操作簡便、靈敏度高、結果準確，穩定性好，可為芝麻丸的質量控制與評價提供科學依據。