SATB2在卵巢黏液性腫瘤中的表達及意義

楊明月 馬紅艷 李秀清 孫杰 劉曉云

[摘要] 目的 檢測富AT序列結合蛋白2（SATB2）在原發性卵巢黏液性腫瘤和轉移性結直腸黏液腺癌中的表達情況，分析SATB2表達對臨床病理診斷工作的意義。 方法 選取2010年1月～2017年6月河北省滄州市人民醫院收治的47例原發性卵巢黏液性腫瘤患者和48例轉移性結直腸黏液腺癌患者的腫瘤組織及腹水樣本的石蠟標本，免疫組織化學法檢測石蠟標本中SATB2、細胞角蛋白7（CK7）、細胞角蛋白20（CK20）、尾型同源框轉錄因子2（CDX2）的蛋白表達水平。對比分析SATB2、CK7、CK20、CDX2在腫瘤組織及腹水樣本中的表達情況，同時，分析SATB2聯合CK7、CK20、CDX2在判定腫瘤來源方面的敏感性、特異性。 結果 SATB2的表達與患者年齡、腫瘤直徑無關（P > 0.05），而與組織分化程度、病理分型、累及卵巢范圍與臨床分期有關（P < 0.05）。SATB2、CK7、CK20、CDX2的表達與卵巢黏液性腫瘤來源有關（P < 0.05）。SATB2聯合CK7在判定原發性卵巢黏液性腫瘤及轉移性結直腸黏液腺癌來源的敏感性、特異性方面明顯高于CK20、CDX2。 結論 SATB2在鑒別腫瘤來源方面有特異性，對臨床病理診斷工作有應用價值。

[關鍵詞] 富AT序列結合蛋白2;卵巢黏液性腫瘤;臨床病理診斷;腫瘤標志物

[中圖分類號] R737.31? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）07（b）-0129-04

Expression and significance of SATB2 in ovarian mucinous tumors

YANG Mingyue? ?MA Hongyan? ?LI Xiuqing? ?SUN Jie? ?LIU Xiaoyun

Department of Pathology， Cangzhou People′s Hospital， Hebei Province， Cangzhou? ?061000， China

[Abstract] Objective To determine the expression of special AT-rich sequence binding protein 2 （SATB2） in primary ovarian mucinous carcinoma and metastatic ovarian mucinous adenocarcinoma from colon and rectum， and analyze its significance for clinicopathological diagnosis. Methods Forty-seven cases of patients with primary ovarian mucinous tumors and 48 cases of patients with metastatic ovarian mucinous adenocarcinoma from colon and rectum treated in Cangzhou People′s Hospital of Hebei Province from January 2010 to June 2017 was selected. The expression of SATB2， cytokeratin 7 （CK7）， cytokeratin 20 （CK20）， caudal-regulated homeobox transcription factor 2 （CDX2） in paraffin specimens of both tumor tissues and ascites was determined by the immunohistochemical method. The expression of SATB2， CK7， CK20 and CDX2 in tumor tissues and ascites was analyzed and compared. The sensitivity and specificity of SATB2 combined with CK7， CK20 and CDX2 for the diagnosis of the origin of ovarian mucinous tumors was analyzed. Results The expression of SATB2 was not related to patient′s age and tumor diameter （P > 0.05）， but related to the degree of tissue differentiation， pathological classification， ovarian involvement and clinical stage （P < 0.05）. The expression of SATB2， CK7， CK20 and CDX2 was related to the origin of ovarian mucinous tumors （P < 0.05）. The sensitivity and specificity of SATB2 combined with CK7 in determining the origin of primary ovarian mucinous tumors and metastatic colorectal mucinous adenocarcinoma were significantly higher than CK20 and CDX2. Conclusion SATB2 is specific in distinguishing tumor origin， it is valuable for clinical pathological diagnosis.

[Key words] Special AT-rich sequence binding protein 2; Ovarian mucinous tumor; Clinicopathological diagnosis; Tumor marker

卵巢黏液性腫瘤是婦科常見的腫瘤，傳統認為發病高峰年齡為60周歲以上，但近年來發病年齡呈現年輕化趨勢[1]。卵巢黏液性腫瘤包括卵巢黏液性腺瘤、卵巢交界性黏液性腫瘤和卵巢黏液性腺癌，其中黏液性腺瘤與交界性黏液性腫瘤為良性或低度潛在惡性，黏液性腺癌為惡性腫瘤[2]。卵巢黏液性腫瘤來源眾多，可由卵巢原發，亦可由其他部位轉移而來，轉移性的卵巢黏液性腫瘤多為惡性腫瘤、晚期腫瘤，預后較差[3]，因此合理制訂臨床診療方案必須明確診斷卵巢黏液性腫瘤的來源。在諸多輔助診斷手段之中，免疫組化法由于其較高的敏感性和特異性，已成為目前臨床病理診斷不可或缺的技術手段之一[4]。本研究選取近期的研究熱點之一，富AT序列結合蛋白2（special AT-rich sequence binding protein 2，SATB2）作為主要研究對象，采用免疫組化法檢測腫瘤組織與腹水中SATB2、細胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）、細胞角蛋白20（cytokeratin 20，CK20）、尾型同源框轉錄因子2（caudal-regulated homeobox transcription factor 2，CDX2），以探究患者腹水中SATB2的表達在卵巢黏液性腫瘤臨床病理診斷方面的作用與臨床應用潛力。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取河北省滄州市人民醫院（以下簡稱“我院”）病理科存檔蠟塊95例。標本取自2010年1月～2017年6月我院收治的卵巢黏液性腫瘤患者，均經病理科確診為卵巢黏液性腫瘤。患者年齡31～74歲，平均（57.31±11.09）歲;其中腫瘤最大直徑<10 cm者26例，≥10 cm者69例;原發性卵巢黏液性腫瘤47例（雙側黏液性腺瘤10例，交界性黏液性腫瘤22例，黏液性腺癌15例），轉移性結直腸黏液腺癌48例（均為黏液性腺癌）;累及單側卵巢者24例，累及雙側者71例;臨床分期Ⅰ～Ⅱ期者33例，Ⅲ～Ⅳ期者62例。納入標準：①腫瘤組織、腹水樣本的石蠟標本保存完整、充分;②臨床病歷資料完整。排除標準：①合并慢性盆腔炎、子宮內膜異位癥等其他影響生物學標志物的疾病;②腫瘤組織中混合有畸胎瘤;③合并其他影響免疫組化結果的疾病;④術前經放、化療等其他抗腫瘤手段治療。本研究經我院醫學倫理委員會批準，患者及家屬知情同意。原發性卵巢黏液性腫瘤和轉移性結直腸黏液腺癌患者一般情況比較差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。見表1。

1.2 方法

1.2.1 SP免疫組織化學法? 將石蠟標本常規脫蠟、水化。PBS沖洗。加入枸櫞酸鹽緩沖溶液，高溫高壓20 min修復抗原。PBS沖洗。室溫孵育10 min，滴加一抗，4℃冷藏過夜孵育。取出放置至室溫，PBS沖洗，滴加生物素二抗，室溫孵育20 min。PBS沖洗，DAB染色，蘇木精復染，反藍。常規制片、封片。本研究一抗分別為兔SATB2多克隆抗體、鼠抗人CK7多克隆抗體、兔抗人CK20多克隆抗體、兔抗人CDX2單克隆抗體，均購自上海煊翎生物科技有限公司。

1.2.2 結果判定? 本研究由經驗豐富的病理科醫師以雙盲法在鏡下進行觀察判定，以PBS代替一抗作為陰性對照。SATB2蛋白染色定位于細胞核，CK7蛋白、CK20蛋白定位于細胞質，CDX2蛋白陽性則可見細胞質/核均染色，出現棕黃色至褐色顆粒視為陽性。隨機取400倍光學顯微鏡下5個視野，每個視野至少含有50個細胞，計算所有觀察細胞中陽性染色細胞所占百分比，結果取所有百分比的算術平均數。當陽性細胞率≥5%時，視為陽性（+）表達，<5%時，視為陰性（-）表達。敏感性=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%;特異性=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%。

1.3 統計學方法

采用軟件SPSS 22.0進行統計學處理，計數資料比較采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SATB2在卵巢黏液性腫瘤患者腹水、腫瘤組織中的表達

免疫組織化學染色結果顯示，來源于同一患者的卵巢黏液性腫瘤組織、腹水樣本中SATB2的表達結果判定相同。見圖1（封四）。SATB2的表達與患者年齡、腫瘤直徑無關（P > 0.05），而與組織分化程度、病理分型、累及卵巢范圍與臨床分期有關（P < 0.05）。見表2。

2.2 卵巢黏液性腫瘤組織及腹水樣本中SATB2、CK7、CK20、CDX2的表達

免疫組織化學染色結果顯示，來源于同一患者的卵巢黏液性腫瘤組織、腹水樣本中CK7、CK20、CDX2的表達結果判定相同。見圖2（封四）。SATB2、CK7、CK20、CDX2的表達與卵巢黏液性腫瘤來源有關（P < 0.05）。見表3。

SATB2聯合CK7在判定原發性卵巢黏液性腫瘤及轉移性結直腸黏液腺癌來源的敏感性、特異性方面，明顯高于CK20、CDX2。見表4。

3 討論

原發性卵巢黏液性腫瘤與卵巢轉移性腺癌組織形態學上十分相似，病理醫師甚至在組織學檢查后仍將轉移瘤誤診為卵巢原發性腫瘤，這為臨床的鑒別診斷帶來巨大困難[5-6]，已成為婦科病理診斷的難點之一。明確卵巢黏液性腫瘤的來源，對于臨床診療工作具有多方重要意義：原發性卵巢黏液性腫瘤患者，包括良性黏液性腺瘤、交界性黏液性腫瘤與局限于卵巢的早期黏液性腺癌，經手術治療后預后良好，不需要輔以放、化療等其他抗腫瘤手段治療，術后5年總生存率達90%以上[7-9];與此相反，卵巢轉移性腺癌患者預后較差，往往需要聯合其他抗腫瘤手段[10]，因而目前對于原發性卵巢黏液性腫瘤與卵巢轉移性腺癌患者的治療方案并不相同。因此為促進臨床上合理制訂診療方案，以改善患者預后，提高患者生活質量，尋找操作簡便、特異性高的鑒別診斷手段是當務之急。

免疫組織化學法是一種利用特異性的抗原-抗體結合反應來定位和檢測樣本中特定物質的一種技術手段，近年來隨著技術的不斷發展，在臨床診斷中被越來越廣泛的應用。卵巢黏液性腫瘤的經典免疫組織化學法一般包括CK7、CK20和CDX2[11-12]。盡管這一聯合檢測方案迄今已得到許多研究[13-14]的支持，但其敏感性與特異性仍未達到理想狀態，尤其在鑒別診斷卵巢轉移性結直腸腺癌時[15]。同時，腫瘤組織的獲取難度較大，費用較高，易給患者造成較大的痛苦，不利于臨床推廣。

SATB2是一種核基質結合蛋白，作為轉錄調控因子，其對基因轉錄的調控可能通過改變染色質構象而實現[16]。近年來的研究顯示，SATB2的異常表達可能與腫瘤的發生與發展密切相關。SATB2在口腔鱗癌中高表達[17];而在非小細胞肺癌中則低表達[18]。Seong等[19]發現，SATB2在骨肉瘤中起促進癌細胞侵襲與轉移的作用。更為重要的是，SATB2在下消化道的表達呈現高豐度[20]，因此推測SATB2可以作為結直腸原發灶的免疫標志物。

本研究結果顯示，SATB2的表達情況與卵巢黏液性腫瘤的組織分化程度、病理分型、累及卵巢范圍與臨床分期有關，且在原發性卵巢黏液性腫瘤與卵巢轉移性結直腸腺癌中的表達差異顯著，因此SATB2可能參與了卵巢黏液性腫瘤的發生與惡性發展過程。而SATB2在黏液性癌腫瘤組織與腹水中陽性表達率顯著高于其余類型，因此可以推測SATB2在卵巢黏液性腫瘤中的作用與Seong等[19]發現的骨肉瘤類似，即促進腫瘤的惡性進展過程。

通過與經典免疫指標對比，本研究發現將SATB2加入免疫組織化學法檢測的對象中，能夠顯著提高鑒別卵巢黏液性腫瘤來源的敏感性與特異性。SATB2表達陽性，提示腫瘤很可能為結直腸來源，若與其他指標結合檢測，則能將敏感性與特異性進一步提升，與Dragomir等[21]和何興狀等[22]的臨床前瞻性研究結果相同。因而增加SATB2作為檢測卵巢黏液性腫瘤來源的免疫指標很有價值。同時，本研究結果中原發性卵巢黏液性腫瘤中僅有1例呈SATB2蛋白表達陽性，回顧該患者影像學資料發現，該患者腫瘤組織中清晰可見成熟畸胎瘤成分，因此可以推測，當不見成熟畸胎瘤成分時，SATB2蛋白表達陽性的腫瘤不可能來源于卵巢。

更為重要的是，通過對比來源于同一患者的腫瘤組織與腹水的檢測結果，本研究發現，腫瘤組織與腹水的免疫組織化學顯色類似，結果判定相同，因此可以用腹水的免疫組織化學檢測結果替代腫瘤組織的檢測結果。相較于腫瘤組織，腹水獲取方便，能夠有效避免不必要的二次手術，是更易施行的檢測手段。

綜上所述，本研究發現，SATB2可能參與了卵巢黏液性腫瘤的發生與發展，且在腹水與腫瘤組織中的免疫組化結果判定相同。將檢測患者腹水中SATB2的表達情況加入經典免疫組化檢測方案，有助于提高卵巢黏液性腫瘤來源鑒別診斷的敏感性與特異性，因此聯合檢測SATB2有臨床應用價值。

[參考文獻]

[1]? Siegel RL，Miller KD，Jemal A. Cancer Statistics，2017 [J]. CA Cancer J Clin，2017，67（1）：7-30.

[2]? Pascual A，Guerriero S，Rams N，et al. Clinical and ultrasound features of benign，borderline，and malignant invasive mucinous ovarian tumors [J]. Eur J Gynaecol Oncol，2017，38（3）：382-386.

[3]? Ziari K，Soleymani E，Alizadeh K. Survival analysis and prognosis for patients with serous and mucinous borderline ovarian tumors：14-year experience from a tertiary center in Iran [J]. Acta Med Iran，2015，53（4）：199-203.

[4]? Plaza JA，Mackinnon A，Carrillo L，et al. Role of immunohistochemistry in the diagnosis of sebaceous carcinoma：a clinicopathologic and immunohistochemical study [J]. Am J Dermatopathol 2015，37（11）：809-821.

[5]? 劉明娟，郭燕，張翎，等.卵巢癌的CT診斷與鑒別診斷[J].影像診斷與介入放射學，2007（2）：67-71.

[6]? 毛衛霞，王永宏.卵巢癌的CT MRI診斷價值比較[J].河北醫學，2017，23（11）：1795-1798.

[7]? Khunamornpong S，Settakorn J，Sukpan K，et al. Primary ovarian mucinous adenocarcinoma of intestinal type：a clinicopathologic study of 46 cases [J]. Int J Gynecol Pathol， 2014，33（2）：176-185.

[8]? Hu A，Li H，Zhang L，et al. Differentiating primary and extragenital metastatic mucinous ovarian tumours：an algorithm combining PAX8 with tumour size and laterality [J]. J Clin Pathol，2015，68（7）：522-528.

[9]? Rouzbahman M，Chetty R. Mucinous tumours of appendix and ovary：an overview and evaluation of current practice [J]. J Clin Pathol，2014，67（3）：193-197.

[10]? Melamed A，Manning-Geist B，Bregar AJ，et al. Associations between residual disease and survival in epithelial ovarian cancer by histologic type [J]. Gynecol Oncol，2017，147（2）：250-256.

[11]? McCluggage WG. Immunohistochemistry in the distinction between primary and metastatic ovarian mucinous neoplasms [J]. J Clin Pathol，2012，65（7）：596-600.

[12]? 苑中甫，史惠蓉，孫紅敏，等.原發卵巢癌及卵巢之轉移性結腸癌組織中CDX-2與CK7和CK20的表達及其臨床意義[J].中華病理學雜志，2007（8）：555-556.

[13]? Carleton C，Hoang L，Sah S，et al. A Detailed Immunohistochemical analysis of a large series of cervical and vaginal gastric-type adenocarcinomas [J]. Am J Surg Pathol，2016，40（5）：636-644.

[14]? Wang Y，Wang Y，Zheng W. Cytologic changes of ovarian epithelial cancer induced by neoadjuvant chemotherapy [J]. Int J Clin Exp Pathol，2013，6（10）：2121-2128.

[15]? Terzi H，Kale E，Kale A，et al. New method：are tumor markers in vaginal-washing fluid significant in the diagnosis of primary ovarian carcinoma？ [J]. Eur J Gynaecol Oncol，2015，36（5）：560-563.

[16]? Chen XX，Zhang J，Lv CX，et al. Construction and identification of cbfa1 and satb2 co-expression vector [J]. Shanghai Kou Qiang Yi Xue，2011，20（5）：474-478.

[17]? 陳虎，周培培，楊蓉，等. SATB2、NANOG和OCT4在口腔鱗癌中的表達及臨床意義[J].口腔醫學，2015，35（12）：1016-1019.

[18]? Tian W，Wang G，Liu Y，et al. The miR-599 promotes non-small cell lung cancer cell invasion via SATB2 [J]. Biochem Biophys Res Commun，2017，485（1）：35-40.

[19]? Seong BK，Lau J，Adderley T，et al. SATB2 enhances migration and invasion in osteosarcoma by regulating genes involved in cytoskeletal organization [J]. Oncogene，2015，34（27）：3582-3592.

[20]? Li Z，Yuan J，Wei L，et al. SATB2 is a sensitive marker for lower gastrointestinal well-differentiated neuroendocrine tumors [J]. Int J Clin Exp Pathol，2015，8（6）：7072-7082.

[21]? Dragomir A，de Wit M，Johansson C，et al. The role of SATB2 as a diagnostic marker for tumors of colorectal origin：results of a pathology-based clinical prospective study [J]. Am J Clin Pathol，2014，141（5）：630-638.

[22]? 何興狀，馬川，牟輝，等.SATB2基因表達對結直腸癌細胞增殖和轉移能力的影響[J].湖南師范大學學報：醫學版，2018，15（3）：24-28.