抗核抗體聯合腫瘤標志物在肺癌早期診斷中的應用價值

麥濤，劉琳，王加強，譚泰昌，蘇楊

(1.四川省醫學科學院·四川省人民醫院檢驗科，四川 成都 610072；2.西藏自治區人民政府駐成都辦事處醫院檢驗科，四川 成都 610041)

原發性肺癌(肺癌)早期表現隱匿且多樣化，易被忽略[1]。因此，早期發現和鑒別診斷對臨床有效治療和良好預后非常重要。目前，肺癌診斷依賴組織學和影像學(如低劑量螺旋CT、多排CT)，但其假陽性率較高，常需隨訪[2]。此外，多次輻射暴露及侵入性操作，也使患者的心理負擔及經濟負擔增加[3]。神經元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)、鱗狀上皮細胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCC)、細胞角蛋白片斷21-1(cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1)等對肺癌的診斷、療效觀察及預后判斷具有一定臨床價值，而單個指標因敏感性及特異性不高，對各種組織類型肺癌的早期診斷應用價值不大。為提高腫瘤標志物在肺癌診斷方面的敏感性，聯合檢測成為一種趨勢[4]，其可提高診斷的敏感性，但也因特異性較低，往往易導致誤診。尋找特異性及敏感性高的新腫瘤標志物或腫瘤標志物的新組合來提高診斷的質量已成為新的研究熱點。研究[5]證實，自身抗體可由體內腫瘤細胞誘導產生，且可以作為特異性腫瘤標志物，為腫瘤診斷提供重要信息。本研究擬通過自身抗體聯合腫瘤標志物檢測及其對肺癌診斷性能指標的比較，探討其在肺癌早期診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

43例肺癌患者(肺癌組)和50例肺部良性疾病患者(肺部良性疾病組)分別來自2017年1月至6月四川省醫學科學院住院者和就診者。肺癌組中，男性29例，女性14例，年齡36～80歲，男性平均年齡(63±14.5)歲，女性平均年齡(50±9.5)歲；肺部良性疾病組中，男性31例，女性19例，年齡22～73歲，平均(48.5±12.5)歲。另選50例健康體檢者作為對照組，其中男性25例，女性25例，年齡28～65歲，平均(44.5±10.5)歲。所有病例均經臨床、病理及影像等資料確診。排除標準：所有參與實驗者均未患自身免疫性疾病。

1.2 方法

入選研究對象取空腹靜脈血4 mL，收集血清，保存待檢。NSE、SCC、CYFRA21-1為化學發光磁珠法，按照試劑生產商推薦操作說明上機檢測；抗核抗體(ANA)為間接熒光法，根據試劑生產商提供的操作說明，以1∶10；1∶32，1∶100，1∶320，1∶1 000，1∶3 200滴度系列稀釋，以明確最終滴度。3項標記物陽性界定值為 NSE>15.2 ng/mL、 SCC>1.5 ng/mL、CYFRA21-1>3.3 ng/mL。ANA以熒光顯微鏡20倍放大，能清晰觀察到Hep2細胞結構時的滴度為陽性。聯合應用Ⅰ：NSE+SCC+CYFRA21-1中一個指標陽性即判為陽性；聯合應用Ⅱ：ANA+(NSE+SCC+CYFRA21-1)中ANA陽性同時NSE+SCC+CYFRA21-1三者中有一個陽性，則判為陽性。

NSE、SCC、CYFRA21-1三項腫瘤標志物檢測試劑購自安圖生物有限公司，使用儀器為安圖生物有限公司產AUTO LUMO A2000全自動化學發光測定儀。抗核抗體檢測試劑購自歐蒙醫學診斷(中國)有限公司，觀察所用熒光顯微鏡為EUPOSTARⅢ PLUS熒光顯微鏡。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 各組血清ANA、NSE、SCC、CYFRA21-1檢測水平比較

對ANA結果采用Log10X方式(X為檢測樣本ANA滴度)轉換，就這四項指標在三組實驗對象中的分布進行采用單因素方差檢驗進行統計分析。肺癌組患者血清 ANA、NSE、SCC、CYFRA21-1水平均高于良性疾病組和對照組，差異比較有統計學意義(P<0.05) 。而良性疾病組與對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 肺癌組和其他受試組血清中ANA及腫瘤標志物檢測水平比較

*P<0.05，與良性疾病組和對照組相比；#P>0.05，與對照組相比。

2.2 抗核抗體與腫瘤標志物不同組合檢測對肺癌診斷的性能評價

以43例肺癌患者作為實驗組，以50例健康體檢者和50例肺部良性疾病者為對照組，計算各個指標及其組合應用的各項診斷性能評價指標，分析腫瘤標志物單項以及兩種聯合應用檢測對肺癌患者的檢出效能。結果表明，腫瘤指標聯合應用Ⅰ或Ⅱ明顯優于單個腫瘤指標的檢測性能。聯合應用Ⅱ與Ⅰ相比，敏感性差異無統計學意義(P>0.05)，而特異性差異有統計學意義(P<0.05)。見表2-表4。

表2抗核抗體與腫瘤標志物聯合應用對肺癌診斷的評價性能指標

檢測指標敏感性(%)特異性(%)陽性預測值(%)陰性預測值(%)約頓指數ANA70.6784.2167.3987.630.55NSE66.6771.0560.4285.260.38SCC40.0086.8456.6676.990.27CYFRA21-166.0075.1125.8383.330.41聯合應用Ⅰ81.2073.0056.4590.120.54聯合應用Ⅱ78.3381.2164.1590.000.59

表3 兩種腫瘤標志物組合陽性檢出結果比較(n=43)

聯合應用Ⅰ及Ⅱ兩者比較，χ2=2.25，P>0.05。

表4 兩種腫瘤標志物組合陰性檢出結果比較(n=100)

聯合應用Ⅰ及Ⅱ兩者比較，χ2=6.13，P<0.05

3 討論

CYFRA21-1、SCC、NSE等腫瘤標志物在肺癌早期敏感性較低，特異性較差，因此對肺癌的早期診斷價值有限[6]。綜合考慮檢測成本、患者負擔等因素。目前臨床上采取SCC+NSE+CYFRA21-1三聯檢測，使其診斷效率得到較大提高[7]。本研究結果也證實，三種標志物在肺癌患者、肺部良性病患者及健康人群中的分布均具有統計差異(P<0.05)，可以用于肺癌的早期診斷。但方法學性能分析表明，其敏感性較好，特異性較差。這將導致肺癌早期篩查時會存在較高的假陽性率，給患者帶來精神和經濟方面的負擔。因此，在肺癌早期發現和診斷方面，其臨床應用價值是有限的。

在腫瘤發生發展的過程中，免疫系統發揮著重要作用。實體腫瘤自身免疫的研究[8]表明，腫瘤的發生過程中，腫瘤細胞凋亡或壞死過程所釋放的異常蛋白即腫瘤相關抗原可誘導機體產生特異性的免疫反應。因此，在腫瘤患者血清中不但可檢測到多種腫瘤標記性抗原和小分子，還可檢測到其相關自身抗體。而且這些自身抗體在患者尚未出現臨床癥狀、影像檢查未能發現時就已存在，這既表明體液免疫對識別腫瘤抗原起著作用，同時也提示其可以作為一個特異性腫瘤標志物，為腫瘤診斷提供重要信息。研究[9]顯示，雖然腫瘤早期只有低濃度的腫瘤抗原被釋放入血，但仍將刺激機體產生高滴度的相應抗體，即腫瘤相關自身抗體(tumor-associated autoantibodies，TAAs)。另有研究[10]表明，TAAs 具有早期即可檢測出、較高特異性與敏感性、樣本穩定、檢測方法簡單等特征，因而被認為有望成為新一代血清腫瘤標志物，用于監測腫瘤發生發展、監測治療反應。ANA現已定義為針對細胞中所有成分包括細胞核、細胞漿、細胞骨架等自身蛋白的抗體，目前主要用于協助自身免疫性疾病如系統性紅斑狼瘡、非風濕關節炎等的診斷、療效監測和預后判斷。但是ANA(IIF)檢測技術是通過與玻片上固定的腫瘤細胞即Hep2細胞反應最終得到的抗體滴度結果，因此，也可用于檢測腫瘤患者血清TAAs[11]。本研究結果表明，在肺癌患者中存在較高的ANA陽性率。這提示自身抗體在肺癌病程進展中可能存在重要作用，具體機制需進一步研究。對聯合應用Ⅱ對肺癌的早期診斷性能的分析結果表明，其敏感性、特異性均較高，假陽性較少，更適合用于肺癌的早期診斷。

有學者利用篩選出來的肺癌特異性自身抗體來進行早期診斷，取得較好的效果。對其方法學性能分析結果顯示，靈敏度為57.89～62%，特異度為82.13～89.80%，AUCROC為0.69～0.769。其敏感性相對高于各自身抗體單項檢測[12]。但總體而言，其仍存在敏感性不高的問題，這可能與所選用的肺癌自身抗體僅占整個肺癌腫瘤自身抗體一部分有關。且這種肺癌自身抗體組合聯用，檢測費用價格昂貴，給病人帶來較大經濟負擔，也限制了其在臨床上的廣泛應用。而本研究所分析的ANA與腫瘤標志物的聯合應用，價格相對較低，更有利于臨床應用。

綜上所述， ANA 聯合NSE、SCC、CYFRA21-1腫瘤標志物檢測可以顯著提高檢測的敏感性，同時減少假陽性，對臨床應用具有重要參考意義。