子癇前期胎盤中促紅細胞生成素及其受體、微血管密度的表達研究

陳玉婷　陶春梅　初曉麗　劉艷麗

【摘要】 目的：探討子癇前期（PE）胎盤中促紅細胞生成素（EPO）及其受體（EPOR）的表達情況及其與微血管密度（MVD）的關系。方法：選取2017年8月-2018年5月在本院收治的50例PE孕婦為研究組，其中輕度（MP）30例、重度（SP）20例，并選取同期在本院住院分娩的50例正常足月妊娠孕婦為對照組。對比EPO、EPOR、MVD水平，觀察EPO、EPOR表達情況，并記錄三組新生兒出生體重。結果：研究組EPO和EPOR陽性表達評分、MVD均低于對照組（P<0.05）;研究組新生兒出生體重低于對照組（P<0.05），且SP組新生兒體重低于MP組（P<0.05）;EPO與EPOR在兩組胎盤中的表達情況較為一致，均在滋養層細胞中的染色最深，鏡下呈現黃色或棕黃色顆粒;毛細血管內皮細胞次之，而絨毛間質無明顯染色。結論：EPO和EPOR在PE胎盤微血管的形成中發揮一定作用，且與PE嚴重程度有關，MVD降低與PE的發生存在密切關系，臨床上需要重點關注重度PE患者，有利于改善患者預后。

【關鍵詞】 子癇; 促紅細胞生成素; 受體; 胎盤; 微血管密度

Study on the Expression of Erythropoietin，Erythropoietin Receptor and Microvessel Density in Patients with Preeclampsia/CHEN Yuting，TAO Chunmei，CHU Xiaoli，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（19）：-112

【Abstract】 Objective：To study the expression of erythropoietin（EPO），erythropoietin receptor（EPOR）and microvessel density（MVD）in patients with preeclampsia（PE）.Method：50 PE pregnant women admitted to our hospital from August 2017 to May 2018 were selected as study group，included 30 cases of mild（MP）and 20 cases of severe（SP），and 50 normal full-term pregnant women who delivered in our hospital during the same period were selected as control group.The levels of EPO，EPOR and MVD were compared，the expression of EPO and EPOR was observed，and the birth weight of three groups was recorded.Result：The EPO and EPOR positive expression scores and MVD in study group were lower than those of control group（P<0.05）.The birth weight of newborns in study group was lower than that of control group（P<0.05），and that in the SP group was lower than that of MP group（P<0.05）.The expression of EPO and EPOR in the placenta of two groups was similar，and the staining was the deepest in trophoblast cells，showing yellow or brown granules under the microscope，followed by capillary endothelial cells，and no obvious staining in villi stroma.Conclusion：EPO and EPOR play a certain role in the formation of placental microvasculature in PE，and are related to the severity of PE，the decrease of MVD is closely related to the occurrence of PE，clinical attention should be paid to patients with severe PE，which is beneficial to improve the prognosis of patients.

【Key words】 Preeclampsia; Erythropoietin; Receptor; Placenta; Microvessel density

First-authors address：Shajing Peoples Hospital，Shenzhen 518104，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.19.028

妊娠期高血壓疾病屬于妊娠期間較為特殊的疾病，而妊娠期高血壓中最常見的為子癇前期（Preeclampsia，PE），該疾病是導致孕產婦、新生兒死亡的主要原因[1]。目前關于PE的主要發病機制并不清楚，主要可分為母體與胎盤原因：一方面患者發病與胎盤免疫、著床之間存在一定關系;另一方面由于產婦長時間微循環出現障礙，兩者之間相互作用，使得母體血供出現不良影響，從而影響到母體狀態，并對胎兒血供造成影響[2]。PE在生理上的改變基本為全身血管痙攣，導致患者出現內皮損傷與局部缺血，從而導致患者子宮胎盤螺旋小動脈直徑明顯減少，內皮也出現一定損傷、胎盤血管發生急性改變，使得子宮胎盤血管灌注發生改變，胎盤功能受到一定限制，影響胎兒發育，甚至會出現胎兒窘迫的情況[3]。目前臨床上大多采取無創超聲設備，通過在疾病早期觀察患者是否出現微循環障礙，并及時發現母嬰不良結局，對臨床治療具有重要意義[4]。超聲微血管成像可及時計算胎盤微血管密度（Microvessel density，MVD），但僅可作為間接檢查方式，難以準確觀察PE患者胎盤微循環情況。促紅細胞生成素（Erythropoietin，EPO）屬于臨床新發現的促血管生成因子，能夠與受體（Erythropoietin Receptor，EPOR）結合引起信號轉導，可以促進血管生成和抗氧化等，并積極參與胎盤血管和腫瘤的形成[5]。本研究通過探討PE胎盤中EPO及其受體EPOR的表達情況以及與MVD的關系，為臨床早期診斷和治療此類患者提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年8月-2018年5月在本院收治的50例PE孕婦為研究組，其中輕度（Mild Preeclampsia，MP）30例、重度（Severe Preeclampsia，SP）20例，并選取同期在本院住院分娩的50例正常足月妊娠孕婦為對照組。納入標準：符合PE診斷標準;單胎;患者未出現肢體功能障礙;整個孕周情況較為穩定，對照組和除PE外的研究組患者無其他妊娠期并發癥及合并癥;研究組合并出現胎兒生長受限（Fetal growth restriction，FGR）[6]。排除標準：家族遺傳病史;合并其他并發癥;臨床資料不完整;研究對象不能積極配合完成本研究。研究對象均知曉本研究內容且自愿簽署知情同意書，本研究經過院醫學倫理委員會批準認可。

1.2 方法 （1）標本收集及處理：在胎盤娩出后，在胎盤中央切取全層胎盤組織，共分為4個0.3 cm×1.5 cm×1.5 cm大小的組織塊，添加中性甲醛，并固定24 h。石蠟包埋切片后進行HE染色，在鏡下觀察每張切片，再選取一塊母體面完整、無纖維素沉積、無明顯梗死及出血的組織塊，進行免疫組化染色。（2）EPO、EPOR及MVD測定：使用兔抗人單克隆抗體EPO、EPOR試劑（購自英國ABCAM公司）檢測EPO和EPOR表達情況，工作液濃度為1︰200。MVD使用鼠抗人單克隆抗體血小板-內皮細胞黏附因子-1（CD31）與二抗（購自福建邁新公司）進行檢測。按照二步法免疫組化檢測試劑盒說明書操作步驟進行染色。其中，EPO、EPOR以胎肝做陽性對照，CD31以血管瘤做陽性對照，陰性對照為PBS。（3）所有檢測結果的判定均使用盲法，由兩位資深病理科醫師，在顯微鏡觀察EPO、EPOR表達情況，檢測陽性率與MVD計數。當兩位醫師診斷出現分歧時需要共同閱片確定。其中EPO、EPOR陽性細胞：結構完整，染色高于背景顏色，不著色、與背景顏色一致記0分，細胞膜內淺黃色顆粒1分，胞漿中等細胞顆粒著色2分，胞漿粗大且彌散細小顆粒3分;陽性細胞比<10%為0分，1分為10%～50%，2分為50%～75%，3分為>75%;二者相加，陰性0分，弱陽性1～2分，中等陽性3～4分，強陽性5～6分。MVD計數判斷：通過100倍光鏡選擇毛微血管分布高密度位置，并使用400倍光鏡觀察，計算單個視野內微血管數量，取平均值為MVD值[7]。

1.3 觀察指標 觀察兩組EPO、EPOR、MVD水平，并記錄EPO、EPOR的表達情況及三組新生兒出生體重[8]。

1.4 統計學處理 使用SPSS 19.0軟件對數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組基線資料比較 兩組一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 兩組EPO和EPOR陽性表達評分、MVD比較 研究組EPO和EPOR陽性表達評分、MVD均明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 兩組胎盤中EPO、EPOR的表達情況 EPO與EPOR在兩組胎盤中的表達情況較為一致，均在滋養層細胞中的染色最深，鏡下呈現黃色或棕黃色顆粒;毛細血管內皮細胞次之，而絨毛間質無明顯染色。見圖1。

2.4 各組新生兒體重比較 研究組新生兒出生體重（2 561.54±325.52）g，低于對照組的（3 241.52±215.41）g，差異有統計學意義（t=12.318，P=0.000），且SP組新生兒體重（2 141.58±305.52）g，低于MP組的（2 841.52±256.69）g，差異有統計學意義（t=8.752，P=0.000）。

3 討論

PE為妊娠期間的特殊疾病，大多為孕20周后出現，患者大多表現為蛋白尿與高血壓，近年來其發病率不斷上升[8]。臨床對于PE的發病機制與原因探究不斷深入，主要涉及遺傳因素、免疫機制、炎癥、營養等，目前公認的發病機制主要為血管重塑功能障礙，炎癥因子出現釋放，使得全身營養物質微循環出現障礙，導致患者器官出現缺血，引發患者出現頭昏、惡心等，進而造成FGR等情況發生[9]。而胎盤微循環障礙屬于功能異常的主要原因，會直接影響胎兒發育，對胎兒生命安全造成一定影響，因此臨床需要及時觀察患者胎盤情況，并觀察子宮內胎兒發育情況[10]。

EPO作為糖蛋白激素，可經過靶細胞表面發揮作用，但其大多自身缺乏酶活性，無法通過自身完成信號轉導，而是通過與EPOR結合發生信號轉導，并發揮其生物學作用[11-12]。EPO與EPOR能夠有效促進血管生長，并具有抗缺氧的作用，參與了胎盤血管發生腫瘤的形成與轉移，近年來在各個醫學領域成為研究熱點[13]。本文對比PE患者與正常孕婦體內EPO、EPOR、MVD水平，結果顯示研究組EPO和EPOR陽性表達評分、MVD均低于對照組（P<0.05）。以往相關研究顯示，EPO與EPOR在胎盤中的蛻膜細胞中呈現大量黃色或棕黃色顆粒，較背景染色相比更深高，提示為陽性表達，而在胎盤絨毛血管內皮細胞胞漿中則較少表達[14-15]。EPO作為近年新發現的血管生成調節因子，能夠參與多種病理與生理過程，合成與釋放受到多種因素的調控，主要是由于缺氧所導致，組織缺氧對EPO調控在于低氧誘導因子調控[16-17]。而這種缺氧情況往往在妊娠早期胚胎發育時出現，造成胎盤微血管形成減少，加重胎盤缺氧[18-20]，進一步會對胎兒的生長發育造成一定阻礙，使得其出生體重較輕。本研究結果顯示，研究組新生兒出生體重低于對照組（P<0.05），且SP組新生兒體重低于MP組（P<0.05），證實了文獻[18-19]的結論。

綜上所述，EPO和EPOR在PE胎盤微血管的形成中發揮一定作用，且與PE嚴重程度有關，MVD降低與PE的發生存在密切關系。臨床上需要重點關注重度PE患者，有利于改善患者預后。

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