雞胚注射碳酸化合物及提高孵化溫度對種蛋孵化率、雛雞糖原狀態(tài)的影響

常 青

（濮陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南濮陽 457000）

家禽胚胎發(fā)育是一個(gè)外部過程，雞胚發(fā)育依賴于雞蛋內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)，這些營養(yǎng)物質(zhì)在21 d孵化期為胚胎提供代謝所需的能量和其他營養(yǎng)素（王鳳華等，2007）。氧氣是唯一一種不從雞蛋中提取的營養(yǎng)物質(zhì)，因此，雞蛋的營養(yǎng)成分決定雞胚孵化的成敗。在胚胎生長的第一周，葡萄糖是主要的能量來源，而大部分碳水化合物如葡萄糖在孵化的第一周被利用。蛋黃中的脂肪酸是孵化后期的主要能量來源，卵黃營養(yǎng)物質(zhì)大量動(dòng)員進(jìn)入胚胎，并在孵化過程中得到利用（李金峰，2014）。胚胎利用卵黃營養(yǎng)物質(zhì)的能力受有氧代謝的限制，直到雞胚開始肺呼吸（Moran，2007）。因此，胚胎逐漸降低脂肪代謝，增加糖原代謝，胚胎肝臟和肌肉中儲存的糖原是孵化過程中的主要能量來源。但在孵化的這一階段，為了滿足孵化過程的高能量需求，糖原被大量利用，因此，在孵化結(jié)束時(shí)，胚胎中的糖原儲備顯著減少。雞胚在孵化過程中對能量缺乏非常敏感，可能導(dǎo)致孵化能力較弱，在更嚴(yán)重的情況下可能導(dǎo)致胚胎死亡。因此，能源供應(yīng)是小雞能否正常出殼的一個(gè)限制因素。提高胚胎中的糖原儲備是孵化過程對能量需求的關(guān)鍵。影響胚胎從有氧代謝向厭氧代謝轉(zhuǎn)變和糖原儲備平衡的因素包括孵化后期的溫度，孵育期結(jié)束時(shí)溫度的升高會導(dǎo)致出殼雞只質(zhì)量差，蛋黃殘留量大，胚胎中蛋白質(zhì)沉積量低，糖原利用率高，孵化發(fā)育和孵育期縮短（Lourens等，2007）。此外，卵黃囊膜對孵化過程中脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的吸收有影響，如溫度升高或氧氣水平降低時(shí)會導(dǎo)致胚胎死亡率提高（Powell等，2004）。因此，本研究探討了在體外注射碳酸化合物對雞胚孵化溫度升高的改善作用，同時(shí)評估其對雞胚孵化后期孵化特性和糖原狀態(tài)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本研究開展了兩個(gè)試驗(yàn)，試驗(yàn)1選擇了來自29周齡肉種雞的800枚種蛋，雞蛋被編號后分別稱重，按照均重一致原則進(jìn)行分組。雞蛋放置于孵化箱中，孵化溫度為37.5℃，相對濕度55%，每隔2 h翻蛋一次，孵化16 d時(shí)照蛋檢查，移除未受精的雞胚和死亡胚胎。檢查后，將其中的672個(gè)雞蛋平均分配到56個(gè)重復(fù)中，每個(gè)重復(fù)含12個(gè)相同重量的雞蛋。在孵育溫度為37.5℃（對照組）和38.5℃（高溫），將各重復(fù)隨機(jī)分為2組，每組28個(gè)重復(fù)。孵化結(jié)束后，對照組留在上述培養(yǎng)箱中，高溫組放置在另一個(gè)相同的培養(yǎng)箱中。恒溫箱的相對濕度設(shè)置為55%。孵化至17.5 d對雞胚體外注射碳水化合物，對照組分為正對照組（不注射）、負(fù)對照組（注射生理鹽水），處理組分別對雞胚注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物（購自Sigma-Aldrich公司）。

1.2 樣品收集與測定 孵化第19天清晨，將雞胚轉(zhuǎn)移到孵化盤的不同部位，以便在孵化時(shí)鑒定雛雞。孵化托盤被分成單獨(dú)的孵化網(wǎng)格，兩個(gè)孵育箱的孵化溫度分別設(shè)置在37℃和38℃，分別作為對照組和高溫組，相對濕度65%，孵育至21 d結(jié)束。此時(shí)，統(tǒng)計(jì)未孵化的蛋與活的或死的小雞以及死亡的胚胎。每12 h記錄一次孵化時(shí)間，孵化444～504 h間隔12 h觀察雛雞，孵化重量記錄至最近0.1 g。在孵化結(jié)束時(shí)，從每個(gè)實(shí)驗(yàn)處理中隨機(jī)選擇6只雛雞，測定雛雞體重，取其肝臟和胸肌進(jìn)行稱重。肝臟和胸肌樣品采集后立即冷凍于液氮中，-80℃保存，進(jìn)行糖原測定。取肝臟和胸肌樣品0.25 g加入8%高氯酸1 mL，在冰中勻漿 1 min，4℃下 14000 g離心 30 min，取上清，加入石油醚1 mL，混合后去除石油醚餾分，將底層樣品轉(zhuǎn)移到新的管中測定糖原。糖原的測定采用碘-碘化鉀法，在460 nm分光光度計(jì)比色法。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間均值的差異采用Ducan’s法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示組間均值存在顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 種蛋孵化率 胚胎注射碳水化合物和高溫對種蛋孵化的影響結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，胚胎注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物和對照組對胚胎孵化率、胚胎后期死亡率、活胚胎移植率和死胚胎移植率的影響均無顯著差異（P＞0.05）。胚胎注射200和250 mg碳水化合物較50 mg碳水化合物組顯著降低了胚胎的孵化時(shí)間（P＜0.05）。正對照、負(fù)對照組和其他組對胚胎的孵化指標(biāo)均無顯著影響（P＞0.05）。孵化溫度和兩個(gè)試驗(yàn)處理對各指標(biāo)無顯著影響（P＞0.05）。

表1 胚胎注射碳水化合物對高溫下?雞蛋孵化率的影響

2.2 種蛋孵化和仔雞出殼重量 胚胎注射碳水化合物對高溫下雞蛋孵化重量和出殼小雞重量的影響見表2。對照組與各處理組以及孵化溫度、兩個(gè)試驗(yàn)處理對孵化蛋重?zé)o顯著影響（P＞0.05）。胚胎注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物較正對照組顯著提高了出殼雞只重量及相對重量（P＜0.05），各處理組較對照組顯著提高了出殼雞只相對重量（P＜0.05）。除了100 mg碳水化合物組外，其他處理組較兩對照組均顯著提高了出殼雞只重量（P＜0.05），而各處理組之間對出殼雞只重量和相對重量均無顯著影響（P ＞ 0.05）。

2.3 出殼仔雞肝臟重量和肝糖原含量 胚胎注射碳水化合物對雞蛋高溫下孵化后出殼仔雞肝臟重量和肝糖原含量的影響見表3。胚胎孵化溫度和兩個(gè)試驗(yàn)對出殼雞只肝臟相對重量和肝糖原含量均無顯著影響（P＞0.05）。正對照組、50、150、200和250 mg碳水化合物組較負(fù)對照組顯著提高了出殼雞只重量（P＜0.05），而正對照組和碳水化合物處理組較負(fù)對照組顯著降低了肝臟相對重量（P＜0.05）。胚胎注射250 mg碳水化合物組肝糖原含量最高（P＜0.05），而正對照、負(fù)對照和50 mg碳水化合物組肝糖原含量最低（P＜ 0.05）。

表2 胚胎注射碳水化合物對高溫下雞蛋孵化重量和出殼小雞重量的影響

表3 胚胎注射碳水化合物對雞蛋高溫下孵化后出殼仔雞肝臟重量和肝糖原含量的影響

2.4 出殼仔雞胸肌重量和肌糖原含量 胚胎注射碳水化合物對雞蛋高溫下孵化后出殼仔雞胸肌重量和肌糖原含量的影響見表4。胚胎注射100、150、200和 250 mg碳水化合物較 50 mg碳水化合物和對照組顯著提高了胸肌相對重量（P＜0.05），而各組對肌糖原含量的影響均無顯著差異（P＞ 0.05）。同時(shí)，胚胎注射 150、200和250 mg碳水化合物較對照組、50和100 mg碳水化合物組顯著提高了出殼雞只的糖原指數(shù)（P＜0.05）。雞胚孵化溫度和兩個(gè)試驗(yàn)對胸肌相對重量、肌糖原含量及糖原指數(shù)均無顯著影響（P＞0.05）。

表4 胚胎注射碳水化合物對雞蛋高溫下孵化后出殼仔雞胸肌重量和肌糖原含量的影響

3 討論

本研究結(jié)果表明，雞胚注射碳水化合物提高了幼雛孵化重與蛋重的比例，但對幼雛孵化性狀無明顯影響。Smirnov等（2006）結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雞胚腸道腔內(nèi)注射碳水化合物可以改善腸道形態(tài)，提高營養(yǎng)吸收。Zhai等（2011）發(fā)現(xiàn)，雞胚注射0.25 g/mL葡萄糖、果糖、蔗糖等復(fù)合物對孵化率無顯著影響，但雛雞重量與注入體積呈正相關(guān)。上述結(jié)果表明，雞胚注射碳水化合物對胚胎代謝有一定影響。但影響雞胚孵化性能的因素有很多，如碳水化合物類型、雞只品種、雞胚大小和種雞的生長階段。

雛雞糖原狀況分析結(jié)果表明，雞胚注射碳水化合物增加了雛雞肝糖原濃度，但對肌糖原無顯著影響，這與Uni等（2005）的研究結(jié)果一致。此外，肝糖原濃度高于肌糖原說明肝糖原對胚胎的營養(yǎng)狀況比肌糖原更敏感，這可能與調(diào)節(jié)肌糖原的機(jī)制不受營養(yǎng)狀況的影響有關(guān)（Uni等，2005）。

兩個(gè)試驗(yàn)結(jié)果表明，周齡較大的母雞（35周齡）產(chǎn)蛋和孵出的小雞更重，孵出小雞的肝糖原濃度和糖原指數(shù)較年輕母雞低。此外，孵化性狀不受母雞年齡的影響，這些結(jié)果與Oloyo（2003）的研究結(jié)果一致。蛋的大小與雛雞孵化體重呈正相關(guān)，大種蛋孵出的小雞體重較高，是因?yàn)榕c小雞蛋孵出的小雞相比，大雞蛋孵出的小雞營養(yǎng)供應(yīng)過剩，孵化時(shí)剩余的卵黃囊大（Lourens等，2006）。不同周齡母雞孵出的小雞糖原水平的差異可能表明其代謝率的差異，因?yàn)槔夏鸽u的胚胎比年輕母雞的胚胎產(chǎn)生更多的代謝熱和二氧化碳?xì)猓@也表明糖原需求存在差異。較年長母雞孵出的小雞糖原水平較低，表明胚胎代謝率較高，因此，與較年輕母雞相比，對糖原的需求較高（O’Dea等，2004）。

4 結(jié)論

提高雞胚孵化后期（16～21 d）的孵化溫度和種雞日齡會對出殼小雞的體重和糖原狀態(tài)產(chǎn)生負(fù)面影響，但不影響孵出小雞的孵化特性。雞胚注射100 mg碳水化合物會緩解雞胚高溫孵化對仔雞生長的抑制，使糖原狀態(tài)得以恢復(fù)。