熒光免疫層析技術(shù)定量檢測蓖麻毒素

聶聰 王靜 侯寶翠 楊宇

（中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院 北京 100000）

1 前言

蓖麻是含油量高的農(nóng)作物， 但蓖麻籽果實(shí)中含有的蓖麻毒素（Ricin Toxin，RT）是最強(qiáng)的植物毒蛋白之一[1,2]，是氰化鉀毒性的近10 倍[3,4]。 成人致死量為1 mg，生食3～12 粒可導(dǎo)致其嚴(yán)重中毒或死亡[5]。蓖麻毒素蛋白約占蓖麻蛋白的5%，相對分子質(zhì)量65kDA，由A、B 兩條肽鏈構(gòu)成，其中，A 鏈?zhǔn)嵌拘宰饔玫年P(guān)鍵中心，B 鏈?zhǔn)墙Y(jié)合鏈[6,7]。 蓖麻毒素具有毒性強(qiáng)、存在范圍廣、易獲取、易純化的特點(diǎn)[8,9]，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，蓖麻毒素中毒病例已有上百例，最著名的有“馬克夫毒傘案”[10]。近年來，我國也發(fā)生了誤食蓖麻致死的現(xiàn)象，并且蓖麻毒素中毒無解藥[11]，因此蓖麻毒素的檢測尤為重要。 目前蓖麻毒素的檢測方法有免疫標(biāo)記分析法、酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫檢測法、高效液相色譜法、生物質(zhì)譜技術(shù)、生物傳感法等，已被廣泛應(yīng)用。本研究利用免疫層析法與羧基熒光微球結(jié)合，通過熒光免疫層析試劑信號掃描儀獲取信號，15 min 完成了蓖麻毒素高靈敏、高特異性的定量檢測。

2 材料與方法

2.1 材料

蓖麻（山東），鼠抗蓖麻毒素IgG 單克隆抗體、兔抗蓖麻毒素IgG 多克隆抗體 （華大蛋白有限公司），巰基-β-D-半乳糖苷瓊脂糖親和介質(zhì)（Sigma）、SephacrylTMS-200 G75 凝膠柱（GE）；熒光微球（Bangs）；正常人血清（長春海關(guān)檢驗(yàn)檢疫中心）；蓖麻毒素標(biāo)準(zhǔn)品（中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院）；相思子毒素、相思子凝集素由實(shí)驗(yàn)室制備；羊抗鼠IgG 多克隆抗體（Sigma公司）；標(biāo)記墊（Ahlstrom）、NC 膜（Sartorius）、樣品墊及吸水墊（上海杰一生物）；牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）（北京沫之東）；其他化學(xué)試劑均為分析純試劑。……