吡蟲啉高效液相色譜的分析

夏天，韓耀宗

(株洲市白蟻防治管理辦公室，湖南 株洲 412000)

吡蟲啉(imidacloprid)是一種新型吡啶雜環廣譜煙堿類殺蟲劑[1]，其作用機理為抑制昆蟲中樞神經系統中乙酰膽堿受體，使昆蟲神經系統的正常傳導受到阻斷，進而使昆蟲麻痹死亡[2]，具有內吸、胃毒和觸殺特性[3-4]。以懸浮劑為劑型的農藥制劑是水基性制劑中成本低、市場發展前景好、加工工藝成熟和可加工的農藥活性成分多的新劑型，具有清潔生產對環境友好、低毒性和低刺激性、以水為介質成本低和不會發生易燃易爆的特點[5]。由于吡蟲啉在土壤中作用緩慢，環境安全性高的特性，以懸浮劑為劑型的吡蟲啉制劑目前廣泛應用于白蟻防治工程[6-11]。在對吡蟲啉懸浮劑的藥劑分析中，側重于對混配制劑的分析方法的研究[12-14]。吡蟲啉原藥的分析方法雖已有國標[15]，但對常用于白蟻防治工程中吡蟲啉懸浮劑單一制劑的分析方法報道較少。本文的分析方法具有簡便、快速，精密度和準確度高的特點，為藥劑的質量控制及應用研究提供參考和幫助。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 infinityⅡ型高效液相色譜儀；VWD紫外可變波長檢測器；1260 infinityⅡ型四元泵；自動進樣器；KQ-250TDE超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司OpenLAB CDS Chemstation工作站)；AUY220型分析天平(日本島津公司)。

吡蟲啉標準品(質量分數99.1%，上海市農藥檢定所)；針頭過濾器(0.45 μm孔徑有機膜)；乙腈(色譜純)；15%吡蟲啉懸浮劑試樣(藥劑廠家提供)。

1.2 液相色譜操作條件

色譜柱為Agilent 5 HC-C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈:水為70:30(V/V)；流量為1.0 mL·min-1；柱溫25 ℃；進樣體積5 μL；檢測波長為270 nm；保留時間約3.07 min。

上述操作參數為本單位實驗室最優化的操作要素。不同實驗室可根據自身儀器特點，為獲得最優結果，對給定的操作參數作適當調整，以期獲得最佳效果。

1.3 測定方法

1.3.1 吡蟲啉標準溶液的制備

用分析天平稱取吡蟲啉標準物質0.1 g(精確至0.000 2 g)，在分析天平中靜置1 min后，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解稀釋并定容至刻度，用移液管移取上述溶液10 mL于100 mL容量瓶中，用流動相定容于刻度，超聲波清洗器超聲溶解，冷卻備用。

1.3.2 吡蟲啉懸浮劑試樣溶液的制備

根據已制備好的吡蟲啉標準物質溶液質量濃度，得出吡蟲啉標準物質的質量，計算吡蟲啉懸浮劑有效成分理論含量，制備與吡蟲啉標準物質溶液質量濃度相近的試樣溶液的質量濃度，即用電子分析天平稱取15%吡蟲啉懸浮劑試樣0.066 7 g(精確至0.000 2 g)，在分析天平中靜置1 min后，置于100 mL容量瓶中，用流動相定容于刻度，用超聲波清洗器超聲10 min，冷卻，用針頭式過濾器過濾，置于進樣瓶中。

1.3.3 測定

在上述1.2的儀器操作條件下，待液相色譜儀泵的壓力和基線平穩后，連續注入數針吡蟲啉標準物質溶液，待連續2針吡蟲啉標準物質溶液的響應值相對變化小于1.5%后，按照吡蟲啉標準物質溶液、吡蟲啉懸浮劑試樣溶液、吡蟲啉懸浮劑試樣溶液、吡蟲啉標準物質溶液的順序進行測定。

1.3.4 吡蟲啉質量分數計算

將測得的2針吡蟲啉懸浮劑試樣溶液峰面積響應值和吡蟲啉懸浮劑試樣溶液前后2針的標準物質溶液的峰面積響應值進行平均，計算吡蟲啉懸浮劑的質量分數。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動相

根據本試驗自身條件，選用Agilent 5 HC-C18色譜柱，并依據吡蟲啉的特性，選擇水和乙腈作為流動相，分別選用水和乙腈體積比為40∶60、30∶70、20∶80、10∶90等4種條件進行測試，得出水∶乙腈體積比為30∶70時分離效果較好，出峰時間短。結果表明，吡蟲啉約3.07 min出峰，靈敏度高，出峰時間短，基線平穩，峰形對稱、尖銳。

2.1.2 檢測波長

本實驗室的高效液相色譜儀配置的是VWD檢測器，不具備DAD檢測器所具備的光譜掃描功能，查閱相關文獻[12-14]，設定檢測波長為270 nm。

2.2 線性關系的測定

根據本試驗標準品溶液濃度和試樣溶液濃度，配制具有濃度梯度的吡蟲啉標準物質溶液，使其質量濃度分別為25、50、100、200、500 mg·L-1。按照1.2節儀器條件測定，以吡蟲啉的質量濃度為橫坐標，吡蟲啉的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線(圖1)，計算得出吡蟲啉線性關系為y=22.976x+127.77，R2為0.999 7。結果表明，在所需測定的吡蟲啉懸浮劑試樣溶液濃度范圍內，呈現出符合方法要求的線性關系。

圖1 吡蟲啉線性關系

2.3 精密度測定

按照1.3節測定方法分別對同一樣品平行測定5次，測得15%吡蟲啉懸浮劑質量分數分別為14.93%，15.09%，14.89%，14.90%，14.95%，標準偏差為0.081，變異系數為0.54%。該方法具有較好的精密度，符合試驗要求。

2.4 準確度的測定

通過在已知含量的15%吡蟲啉懸浮劑添加具有濃度梯度的吡蟲啉標準物質溶液，測定本試驗方法的回收率，以驗證準確度是否符合試驗要求，即通過在已知含量15%吡蟲啉懸浮劑分別添加50、100、200 mg·L-1吡蟲啉標準物質，進行5次平行測定，測定有效成分的含量，計算得出回收率。由表1可知，此方法回收率符合準確度的要求。

表1 不同吡蟲啉添加量的回收率

3 小結

利用高效液相色譜測定吡蟲啉懸浮劑中有效成分含量的方法，具有快速、簡便，線性關系好的特點，準確度和精密度較高，適用于吡蟲啉懸浮劑的有效成分含量檢測。