NFATC2基因變異在某區(qū)兒童急淋白血病中的分布調(diào)查

韓怡波 劉 伶* 孫 智 張世恒 楊月明 慕萬穎 曲 暢 李 婷

（大連市婦女兒童醫(yī)療中心，遼寧 大連 116034）

近年兒童急性淋巴細胞性白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）的診斷治療取得顯著進步，發(fā)達國家對兒童ALL的總治愈率接近85%[1-2]。目前ALL復(fù)發(fā)的治療仍是難點，即使通過高強度聯(lián)合化療及異基因造血干細胞移植治療，也僅30%～50%的復(fù)發(fā)ALL患者可獲長期緩解[3-4]，提示此SNP可能與ALL復(fù)發(fā)相關(guān)，基于此項研究，我們對該SNP在我院治療ALL患兒中的分布作了調(diào)查。

1 資料與方法

1.1 一般資料：2014年11月至2017年11月在我院明確診斷的初診有治療意向ALL患兒，共30例。患兒年齡最小1.0歲，最大13.2歲，中位年齡6.5歲。其中男性20位，女性10位。ALL類型B系A(chǔ)LL 28位，T系A(chǔ)LL 2位。其中1位男性T系患兒髓外ALL復(fù)發(fā)。白血病危險度分型依據(jù)《兒童急性淋巴細胞白血病診療建議（第四次修訂）》，高危9例，中低危21例。本研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，所有入組患兒家屬均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 診斷方法：所有患兒均根據(jù)骨髓細胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細胞遺傳學(xué)、特殊融合基因檢測診斷為ALL。

1.2.2 樣本SNP采集及檢測：取非抗凝靜脈血，由我院生殖遺傳實驗室采集樣本DNA，送由大連寶生物科技有限公司通過PCR擴增直接測序法檢測NFATC2 rs6021191核苷酸序列。

1.2.3 門冬酰胺酶使用及過敏反應(yīng)觀察方法：我院使用兩種門冬酰胺酶制劑化療，大腸桿菌源左旋門冬酰胺酶（L-ASP）（誘導(dǎo)緩解用法：6000 U/m2，隔日1次，共10次；繼續(xù)治療中2次再誘導(dǎo)治療用法：6000 U/m2，隔日1次，10次）；聚乙二醇化門冬酰胺酶（Peg-ASP）（誘導(dǎo)緩解用法：2000 U/m2，第6及26天各用1次；繼續(xù)治療： 2000 U/m2/3周×6次）。患兒對門冬酰胺酶過敏反應(yīng)由臨床觀察，任何一種門冬酰胺酶過敏反應(yīng)，包括皮疹、騷癢、皮試陽性等均記為有過敏反應(yīng)，不包括肝功能損害、胰腺炎、高血糖、神經(jīng)系統(tǒng)異常等門冬酰胺酶其他不良反應(yīng)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，相關(guān)因素分析采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 NFATC2 rs6021191檢測結(jié)果：30例樣本，rs6021191位點AA 20例（66.67%），AT 9例（30%），TT 1例（3.33%）。

2.2 門冬酰胺酶過敏反應(yīng)：30例患者共觀察到4例過敏反應(yīng)，1例使用PEG-ASP后皮疹，1例使用L-ASP后發(fā)生皮疹，2例L-ASP皮試陽性。s6021191變異與門冬酰胺酶過敏反應(yīng)發(fā)生比較，P=0.107＞0.05，未提示統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。在本次調(diào)查中此SNP與門冬酰胺酶過敏反應(yīng)未表現(xiàn)顯相關(guān)性，有趣的是我院的門冬酰胺酶制劑過敏反應(yīng)臨床報告率遠未達到文獻中的30%左右，一方面是由于過敏反應(yīng)的觀察有相當(dāng)?shù)闹饔^性，另一方面我院主要使用Peg-ASP，治療方案中使用次數(shù)減少也有可能減少臨床過敏反應(yīng)發(fā)生概率。

表1 rs6021191與門冬酰胺酶過敏反應(yīng)的比較

2.3 ALL復(fù)發(fā)：本次調(diào)查中，僅有1位T系A(chǔ)LL患者發(fā)生髓外復(fù)發(fā)，rs6021191變異與ALL復(fù)發(fā)比較，P=0.772＞0.05，無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。由于復(fù)發(fā)樣本過少僅作參考。

表2 rs6021191與ALL復(fù)發(fā)比較

2.4 ALL危險度分層：rs6021191變異與白血病危險度比較，無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。雖然此SNP的變異（T及A/T）總發(fā)生率與按此次調(diào)查中判定為高危患者比率恰巧相似，但二者無統(tǒng)計學(xué)聯(lián)系，也無臨床意義。

表3 rs6021191與高危ALL比較

3 討 論

ALL復(fù)發(fā)是目前兒童ALL治療中的重點難點，在臨床工作中，我們發(fā)現(xiàn)有部分復(fù)發(fā)ALL患兒來自中、低危組，其原因可能是目前已確定的預(yù)后不良因素未對初診ALL患兒進行精準(zhǔn)的危險度分級，致使部分高危患兒納入低危組或中危組，導(dǎo)致復(fù)發(fā)率升高，因此發(fā)現(xiàn)新的ALL復(fù)發(fā)相關(guān)因素就有重要的意義。目前有研究認(rèn)為ALL復(fù)發(fā)的主要機制包括腫瘤細胞對化療藥物的耐藥現(xiàn)象等，在Kawedia、Fernandez等人的一系列研究中發(fā)現(xiàn)門冬酰胺酶抗體與地塞米松暴露及白血病復(fù)發(fā)有相關(guān)性，并進一步篩選出rs17885382（HLA-DRB1）及rs6021191（NFATC2）兩組單基因可能與此相關(guān)，并在以人種分組的研究中發(fā)現(xiàn)前者與歐洲裔相關(guān)性較高，后者與亞裔相關(guān)性較明顯。

NFATC2是NFAT轉(zhuǎn)錄子家族中的一員。NFATC2在藥物致過敏風(fēng)險性中的作用并不明確。NFATC2 rs6021191變異定位于基因內(nèi)含子并且是HUVEC（人血管內(nèi)皮細胞）和K562細胞系弱增強子激活區(qū)域，提示此SNP可以影響NFATC2的表達。當(dāng)前NFATC2 rs6021191作為ALL復(fù)發(fā)相關(guān)因素的研究尚不完善，國內(nèi)外關(guān)于此SNP與ALL間關(guān)系的文獻并不多，這種SNP與ALL相關(guān)性的研究必然需要多中心、大樣本調(diào)查才有價值，我們此次試驗僅就此SNP在我院ALL患兒中的分布作初步調(diào)查，也是為我們進一步研究此類基因的臨床意義所做的前期工作。