YAP1、FAT4蛋白在卵巢癌組織中的表達特點及臨床意義

胡紫薇，劉顯灼，戴小財，李 維

(華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院急診科，湖北武漢 430000)

流行病學研究證實，卵巢癌的發病率在(252～627)/10萬人，近年來，其發病率或病死率等具有一定的上升趨勢[1]。臨床上卵巢癌患者的無瘤生存時間較短，治療后5年內的病死率仍然超過35%[2]。在分析研究卵巢癌發病機制的過程中發現，腫瘤相關生物學蛋白分子的表達改變，能夠影響卵巢癌的癌細胞生物學特征，導致癌細胞增殖、分化成熟障礙，促進卵巢癌的發生。Yes相關蛋白(YAP1)的表達能夠通過促進HIPPO信號通路的激活，導致下游腫瘤細胞的異常持續性增殖，促進卵巢癌的早期發生過程[3-4]。FAT4蛋白是重要的甲基化修飾因子，其能夠通過對卵巢上皮細胞的甲基化作用，增加基因突變的風險，導致基因錯配修復能力的顯著下降[5]。有研究探討YAP1蛋白在卵巢癌中的表達情況，認為YAP1蛋白的高表達是增加卵巢癌患者臨床分期進展、臨床預后惡化的重要風險[6]，但對于YAP1蛋白或FAT4蛋白與卵巢癌患者臨床病理特征的關系研究較少。為探討FAT4蛋白、YAP1蛋白與卵巢癌的發生關系，本研究選取本院2015年1月至2017年6月收集的術后卵巢癌組織，探討不同的蛋白表達情況，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2015年1月至2017年6月收集的術后卵巢癌組織80例(惡性組)、卵巢良性腫瘤組織80例(良性組)為研究對象。惡性組患者年齡34～67歲，平均(54.8±9.6)歲；臨床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期20例，Ⅲ期38例，Ⅳ期14例；分化程度：G1級14例，G2級21例，G3級45例；病理學類型：漿液性囊腺癌37例，黏液性囊腺癌28例，卵巢子宮內膜樣癌15例；發生淋巴結轉移39例。良性組患者年齡35～69歲，平均(53.5±10.0)歲，其中漿液性囊腺瘤59例，黏液性囊腺瘤21例。2組患者的年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2納入、排除標準 納入標準：(1)卵巢癌的臨床分期為Ⅰ～Ⅳ期；(2)手術后經病理學檢查證實為卵巢癌或卵巢良性腫瘤；(3)未使用放化療治療、免疫治療；(4)納入對象資料完整。排除標準：(1)未經病理學證實；(2)轉移性卵巢癌。

1.3方法

1.3.1免疫組織化學方法 石蠟切片脫蠟至水，過氧化氫封閉內源性過氧化物酶，3% H2O2，室溫 10 min(避光),10 mmol/L pH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液，PBS沖洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封閉處理，37 ℃ 15 min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加第一抗體，37 ℃ 2 h，滴加生物素化二抗，37 ℃ 40 min，PBS沖洗5 min，DAB顯色，蘇木素復染，加拿大樹膠或中性樹膠封片。

1.3.2免疫組織化學結果判定 YAP1蛋白的陽性著色表達于細胞質、細胞核， FAT4蛋白定位于細胞核，二者陽性均呈黃色、棕黃色、褐色表達。(1)根據著色強度：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色；(2)根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分，陽性細胞所占比例11%～50%為2分，陽性細胞數51%～75%為3分，陽性細胞數所占比例>75%為4分。2種積分相乘總分<3分為陰性，≥3分為陽性。

2 結 果

2.12組標本的YAP1蛋白、FAT4蛋白陽性表達率比較 惡性組患者的YAP1蛋白、FAT4蛋白陽性表達率分別為61.25%、71.25%，均顯著高于良性組的18.75%、26.25%，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組標本的YAP1蛋白、FAT4蛋白陽性表達率比較[n(%)]

2.2卵巢癌組織的YAP1蛋白、FAT4蛋白表達相關性 卵巢癌組織中的YAP1蛋白與FAT4蛋白陽性表達呈顯著正相關關系(r=0.629，P=0.000),見表2。

表2 卵巢癌組織的YAP1蛋白、FAT4蛋白表達相關性

2.3卵巢癌組織的YAP1蛋白、FAT4蛋白表達與患者臨床病理特征的關系 卵巢癌組織中的YAP1蛋的陽性表達與腫瘤分化程度、臨床分期有關(P<0.05)；FAT4蛋白陽性表達與卵巢癌患者的腫瘤分化程度、臨床分期、淋巴結是否轉移有關(P<0.05)，見表3～4。

表3 卵巢癌組織的YAP1蛋白表達與患者臨床病理特征的關系[n(%)]

表4 卵巢癌組織的FAT4蛋白表達與患者臨床病理特征的關系[n(%)]

3 討 論

環境因素、遺傳因素等均可能影響卵巢癌的發生，促進卵巢癌臨床病理特征的進展。作為生殖系統常見的惡性腫瘤，卵巢癌的無瘤生存時間不足38個月[7]，包括手術在內的相關綜合性治療措施治療后的3年病死率仍然超過35%[8]。現階段臨床缺乏對卵巢癌早期診斷的有效生物學血清分子，而本研究通過探討腫瘤相關蛋白的表達，為揭示卵巢癌的發生機制提供參考，為卵巢癌的免疫靶向治療提供基礎，為卵巢癌早期高危人群的血清學篩查提供依據。

生物學因子的濃度波動，能夠在促進腫瘤細胞的早期核異型性的發生或中晚期臨床病理特征進展中發揮重要作用，能夠調控癌細胞的生物學特性，干預癌細胞的擴散和轉移速率等，進而影響患者的整體生存預后。YAP1是重要的信號通路激活因子，其對于HIPPO信號通路的激活作用，能夠提高卵巢癌上皮細胞核DNA的轉錄風險，導致啟動子的增強和增強子的激活，增加癌細胞的調控異常風險。基礎方面的研究也顯示，YAP1夠誘導癌細胞對于基底膜的黏附和浸潤，增加其突破基底膜的風險[9-10]；FAT4蛋白能夠與卵巢癌細胞膜內的轉錄基因結合，促進其甲基化的修飾，提高癌細胞的浸潤能力，從而為癌細胞變形能力的獲得及轉移風險的提升提供基礎。基礎領域的研究也認為，FAT4蛋白能夠通過誘導癌細胞的偽足形成及對于淋巴結的黏附，從而提高了其腦部轉移及肺部轉移的風險[11]。

本次研究發現，在卵巢癌病灶組織中，YAP1蛋白、FAT4蛋白的表達陽性率均明顯上升，高于良性組病灶組織，差異較為明顯，提示YAP1蛋白、FAT4蛋白二者均可能影響卵巢癌的發生過程。薈萃國內外的相關研究，筆者認為YAP1蛋白、FAT4蛋白主要通過以下幾個方面的因素影響卵巢癌的發生發展[12-13]：(1)YAP1蛋白能夠導致體內HIPPO信號通路的激活，導致癌細胞膜內的第二信使如鈣離子或者三磷酸腺苷的濃度上調，增加癌細胞的轉錄激活風險；(2)FAT4蛋白的表達能夠導致癌細胞錯配基因修復能力下降，導致癌細胞腫瘤相關基因突變風險增強，增加相關腫瘤效應分子的激活風險。安錦丹等[14]研究也通過免疫組織化學分析研究揭示卵巢癌病灶組織中的YAP1蛋白的表達情況，發現YAP1蛋白的表達陽性率可平均上升28%，同時在病死率較高或者臨床分期較晚的卵巢癌病灶組織中，YAP1蛋白的表達陽性率可進一步上升。相關關系分析結果顯示，YAP1蛋白、FAT4蛋白的表達具有一定的內在關系，二者可能相互影響，進而促進腫瘤轉錄基因的表達，在腫瘤細胞的生物學特征的變化方面發揮了重要的調控作用，但具體的機制仍然需要后續研究進一步證實。卵巢癌組織中的YAP1蛋白陽性表達與腫瘤分化程度、臨床分期具有關，提示YAP1蛋白與卵巢癌的臨床病理特征密切相關，這主要是由于YAP1蛋白能夠影響到卵巢癌細胞的分化成熟過程，提高癌細胞對臨近正常上皮組織的浸潤能力；FAT4蛋白陽性表達與卵巢癌患者的腫瘤分化程度、臨床分期、發生淋巴是否結轉移有關，這主要與FAT4蛋白能夠影響到卵巢癌細胞對于淋巴結的黏附能力等有關。

綜上所述，卵巢癌組織中的YAP1蛋白、FAT4蛋白表達上調，相互間呈正相關性，與卵巢癌的發生發展關系密切。