東莞地區2 9 6 0例女性宮頸脫落細胞H P V基因分型結果分析

張七二，鐘錦開 ，蒲榮 ，鄺樹華 ，王占科

(1、東莞市寮步醫院，廣東 東莞523400；2、南昌市解放軍第九四醫院，江西 南昌330002)

流行病學和基礎研究已證實人乳頭狀瘤病毒(Human papilloma virus，HPV)感染是宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的主要病因，特別是持續的高危型HPV感染[1]。目前已發現的HPV亞型有100多種，其中40余種與生殖道疾病相關[2]，不同HPV亞型其致病性不同，且不同地區及不同年齡段女性，HPV分布及感染率亦存在差異，因而非常有必要對不同地區女性HPV感染狀況進行流行病學檢查，為制訂適合本地區HPV感染防治工作提供理論依據。HPVDNA檢測是從病因學角度進行宮頸病變的篩查，診斷方面具有檢查快速、特異性高等特點[3]。本研究采用基因擴增及導流雜交技術對我院2960例女性患者宮頸脫落細胞中HPV21種亞型進行檢測，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 病例來源 2014年1月至2014年8月來我院就診女性患者2960例，年齡為16~81歲。

1.2 標本采集 由臨床醫師以窺陰器暴露宮頸，將宮頸刷置于宮頸口輕輕搓動宮頸刷，順時針旋轉5圈后慢慢取出，置于裝有細胞保存液的取樣管中，擰緊瓶蓋及時送檢，若不能馬上檢測者則應保存于4℃冰箱，長期保存者應置于-20℃低溫冰箱中。

1.3 主要試劑與儀器 HPV-DNA檢測試劑盒 (潮州凱普生物化學有限公司)，ABI-7500熒光定量PCR儀，HHM-2型凱普醫用核酸分子快速雜交儀。

1.4 檢測步驟

1.4.1 DNA提取 取含有宮頸脫落細胞的細胞混懸液0.5ml，14000r/min離心去上清液后，嚴格按照試劑說明書提取DNA。

1.4.2 PCR擴增 將1μlDNA模板加至0.75μlDNA Tag酶及23.25μlPCR Mix反應體系中，瞬間離心并上機擴增。PCR擴增條件為，95℃變性9min；95℃、20s，55℃、30s，72℃、30s循環 40 次；72℃延伸5min。

1.4.3 雜交及結果判讀 嚴格按照試劑說明書操作，膜上出現清晰可見的藍紫色圓點者為陽性，不同位點代表不同亞型，其中低危型有6、11、42、43、44，高危型有 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、Cp8304，另設陰、陽性對照。

1.5 統計學處理 所有數據均采用SPSS13.0軟件進行統計學處理。

2 結果

2.1 HPV檢測情況 2960例標本中共檢測出20種HPV亞型，未檢測到43亞型，830例標本陽性，陽性率為28.04%。

2.2 HPV多重感染情況 830份陽性標本中共檢出1090株HPV病毒，單一HPV亞型感染654例，占78.80%，多重亞型感染176例，占21.20%(以二重、三重感染為主)，另見一例七重亞型感染者。感染前五位亞型分別為 16(17.16%)、52(15.23%)、58(12.30%)、Cp8304(7.16%)、11(6.15%)；其中低危型 129 例，占 14.54%，以11、6 亞型為主；高危型 701 例，占 84.46%，以 16、52、58亞型為主，具體結果見表1、表2。

表1 830份HPV陽性標本中HPV亞型分布情況(%)

表2 HPV亞型多重感染情況

2.3 不同年齡段HPV感染情況 不同年齡段HPV檢出率存在差異性，其中21~30歲、>50歲陽性檢出率分別為38%、33%，明顯高于28.04%平均水平(χ2=6.02 和 χ2=5.43，P<0.01)，具體結果見表 3。

表3 不同年齡段HPV感染情況

3 討論

宮頸癌在全球婦女惡性腫瘤中居第2位，僅次于乳腺癌，是威脅婦女健康的重要疾病。且其發病有年輕化趨勢。早期診斷和治療宮頸上皮內瘤變是降低宮頸癌發病率和死亡率的關鍵。人們正在努力尋找與腫瘤生物學行為關系更密切、更客觀、可重復性好的指標[4]。

HPV是一類具有嚴格宿主范圍和組織特點特異性病毒，主要通過性傳播，低危型主要引起尖銳濕疣等癥狀，而高危型則與宮頸癌密切相關。大量研究證明持續HPV感染是引起宮頸癌的主要病因，且HPV載量與宮頸癌轉歸密切相關。HPV與CIN和宮頸癌有密切關系,HPV感染應視為與CIN相關的早期病變[5]從CIN到浸潤性宮頸癌的演變過程中，高危HPV感染是宮頸癌的主要致癌因子之一。當宮頸上皮感染HPV后細胞增殖活性升高，抑制及破壞人體局部的免疫功能，從而促進細胞過度增殖最終癌變[6]。吳兵[7]等報道HPV基因亞型分布與地區分布有關，存在一定的地區差異；Munoz[2]等示不同地區引起宮頸癌的HPV病毒亞型也不盡相同。本研究對本地區2960例婦女HPV感染情況及21種基因亞型分布情況進行流行病學回顧性分析，結果顯示，共檢測到20種亞型，未發現43亞型，與王長奇等報道基本一致[8]，符合亞洲高危HPV的流行現狀[9]。28.04%的感染率低于浙江地區的33.08%[9]及北京地區的57.10%[10]，高于呼和浩特地區13.04%[11]及深圳地區的17.50%[12]，高危型HPV感染 (23.68%)明顯高于低危型HPV感染(4.36%)，高危型以 16、52、58 亞型為主，而低危型以11、6亞型為主，與國際癌癥研究協會(IARC)最新調查結果基本一致[13]；在HPV感染患者中，單一亞型感染654例，占78.80%，明顯高于多重亞型感染，說明該地區主要以單一亞型感染為主；多重感染者中以二重感染為主(占60.00%)，另見一例七重感染者。據報道單一亞型感染可使宮頸癌的發病風險增加19.9倍，而多重HPV亞型感染可使宮頸癌的發病風險增加31.8倍[14]，表明HPV多重感染增加了宮頸癌患病率。年齡是HPV及宮頸癌發病的另一相關因素，在所分析各年齡段中，以20~30歲、>50歲年齡段陽性率較高，呈現“雙峰”狀，與Giulianu[15]報道基本一致，多數學者認為呈現此現象原因可能與性行為、性伴侶、激素及抵抗力等因素有關。

綜上所述，HPV感染及HPV亞型分布存在地區差異，且與女性年齡相關，因此非常有必要對不同地區的HPV感染特點進行流行病學調查，為當地衛計委因地制宜地制訂最佳宮頸癌方案提供理論依據。

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[3]董玉蘭,徐冉,陳龍山,等.3394例女性患者宮頸人乳頭瘤病毒基因分型及臨床意義[J].實驗與檢驗醫學,2014,32(4):440-442.

[4]孫曉燕.高級別宮頸上皮內瘤變的臨床診斷治療分析[J].中國實用醫藥,2014,9(11):35-36.

[5]王敏,丁悅,溫展,等.宮頸上皮內瘤變臨床特點及危險因素分析[J].現代診斷與治療,2013,24(16):3754-3755.

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