超高效液相色譜法檢測(cè) 肉制品中4種食品添加劑

周宏霞 鄶鵬 王楠

摘要：目的：建立UPLC-DAD法檢測(cè)肉制品中的4種食品添加劑的方法。方法：采用 Poroshell 120-C18 柱 （3.0 mm×150 mm×2.7 μm）反相色譜柱，流動(dòng)相為甲醇+0.01 mol/L 磷酸二氫銨，梯度洗脫，流速為0.3 mL/min，柱溫度為25℃。采用外標(biāo)法定量。結(jié)果：該方法在0～50 mg/L范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.9996。測(cè)定低限為0.5 mg/kg， 回收率為91.1%～100.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.18%～3.27%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、靈敏、可靠，適合于肉制品中多種食品添加劑的同時(shí)檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：UPLC;苯甲酸;脫氫乙酸;山梨酸;糖精鈉

食品添加劑被廣泛地應(yīng)用到食品加工過(guò)程中。適當(dāng)?shù)厥褂檬称诽砑觿┛梢蕴岣呤称焚|(zhì)量，防止食品變質(zhì)，保持食品營(yíng)養(yǎng)，但亂用或?yàn)E用會(huì)損害消費(fèi)者健康[1]。因此，對(duì)食品添加劑的使用必須進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)控[2]。我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB 2760—2014 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中已經(jīng)明確規(guī)定了食品添加劑允許使用的范圍和用量[3]。肉制品在制作過(guò)程中會(huì)加入一些食品添加劑。目前肉制品中食品添加劑的主要監(jiān)控項(xiàng)目有：苯甲酸、脫氫乙酸、山梨酸、糖精鈉。GB5009.28-2016明確規(guī)定了食品中山梨酸、苯甲酸、糖精鈉的測(cè)定。GB5009.121-2016明確規(guī)定了食品中脫氫乙酸的測(cè)定。采用兩種方法分別檢測(cè)會(huì)比較繁瑣費(fèi)時(shí)，不利于樣品量大時(shí)的檢測(cè)。因此，需要研究一種能同時(shí)檢測(cè)這四種食品添加劑的方法。目前，關(guān)于這方面的研究報(bào)道也有很多。金悅敏等[4]利用HPLC法測(cè)定糕點(diǎn)類食品中的8種常用防腐劑。孫美娜等[5]采用HPLC法檢測(cè)飲料中常見(jiàn)的8種防腐劑和2種甜味劑。陳松潤(rùn)等[6] 采用液相色譜法同時(shí)測(cè)定肉制品中5種防腐劑。但是未見(jiàn)采用超高效液相色譜法檢測(cè)肉制品中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉。本文采用超高效液相色譜法檢測(cè)肉制品中的苯甲酸、脫氫乙酸、山梨酸、糖精鈉，采用DAD檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)定性，排除了雜質(zhì)峰的干擾。

儀器與材料

儀器與設(shè)備。超高效液相色譜儀;電子天平; Milli-Q型超純水器，超聲波清洗儀;漩渦混合器，臺(tái)式高速離心機(jī)。

試劑。甲醇（色譜純），乙酸鋅，亞鐵氰化鉀，氫氧化鈉（分析純），磷酸二氫銨（優(yōu)級(jí)純），苯甲酸、山梨酸、糖精鈉（標(biāo)準(zhǔn)品，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）、脫氫乙酸（標(biāo)準(zhǔn)品，德國(guó)DR.）

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：準(zhǔn)確稱取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0500 g（精確至0.0001g）于50 mL容量瓶中，用5 mL氫氧化鈉溶液（20 g/L）溶解，用水定容，此標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濃度為1 mg/mL。

色譜條件。色譜柱：Poroshell 120-C18 柱 （3.0 mm×150 mm×2.7 μm）;流速：0.3 mL/min;柱溫：25 ℃;進(jìn)樣體積：10 μL;流動(dòng)相：甲醇（A）+0.01 mol/L 磷酸二氫銨（B）。流速為：0.3 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為：230 nm，并且采集190 nm～400 nm的光譜。梯度洗脫的程序如下：0～2.00 min 5% A～5% A，2.00～10.00 min 5%A～35%A，10.00～10.10 min 35%A～5%A，10.10～15.00 min 5% A～5% A。

樣品處理。稱取粉碎好的樣品2.5 g（精確至0.01 g）于25 mL比色管中，加入2.0 mL亞鐵氰化鉀溶液和2.0 mL乙酸鋅溶液，加水至約15 mL，混勻，超聲提取30 min，后用水定容至刻度25 mL，混勻。后轉(zhuǎn)移至離心管中5000 r /min離心5 min，取上清液，過(guò)0.45 um的濾膜，待上機(jī)檢測(cè)。

結(jié)果與討論

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇。用DAD檢測(cè)器在190nm～400 nm下對(duì)四種標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)苯甲酸的最大吸收峰在225nm處，脫氫乙酸的最大吸收峰在230 nm和292 nm兩處，山梨酸的最大吸收峰為255 nm，糖精鈉的最大峰為270 nm。綜合考慮這四種物質(zhì)的吸收情況，選擇230 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，同時(shí)采集190nm～400 nm的光譜圖。利用光譜圖可以排除雜質(zhì)峰的錯(cuò)判。

流動(dòng)相的選擇。采用甲醇-磷酸二氫銨作為流動(dòng)相，采用不同的流動(dòng)相比例進(jìn)行摸索，最后確定1.3中的梯度洗脫條件。在此梯度下各物質(zhì)能很好的分離，目標(biāo)物質(zhì)峰與雜質(zhì)峰也能分開(kāi)，大大降低了雜質(zhì)的干擾。

線性范圍和檢出限。利用4種濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制成濃度為0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3的儀器條件進(jìn)行色譜檢測(cè)。以峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，四種物質(zhì)在0～50 mg/L濃度范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。應(yīng)用 3 倍的信噪比來(lái)計(jì)算檢出限。 回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見(jiàn)下表1。

回收率和精密度。稱取粉碎好的空白肉制品樣品2.5 g，加入高、中、低三個(gè)水平的四種添加劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.4的方法進(jìn)行前處理操作，按照1.3的儀器條件上機(jī)檢測(cè)。每個(gè)水平做6個(gè)平行，來(lái)計(jì)算各種添加劑的回收率以及精密度。其結(jié)果見(jiàn)表2。從表中可以看出樣品的回收率為91.1%～100.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.18%～3.27%。

結(jié)果

本文建立了肉制品中苯甲酸、脫氫乙酸、山梨酸、糖精鈉的超高效液相檢測(cè)方法，該方法操作簡(jiǎn)單，定量檢測(cè)準(zhǔn)確，靈敏度準(zhǔn)確度均能達(dá)到要求。檢測(cè)器采用二極管陣列檢測(cè)器，利用對(duì)照光譜吸收?qǐng)D的方法排除雜質(zhì)干擾，能達(dá)到準(zhǔn)確定性的目的。結(jié)果表明，該方法在0～50 mg/L濃度范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)在0.9996以上，檢出限為0.5 mg/kg，平均回收率為91.1%～100.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.18%～3.27%。四種物質(zhì)能達(dá)到很好的分離，分離效果好，回收率高，適合于肉制品中食品添加劑的快速檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

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[6]陳松潤(rùn)，何權(quán)，黃娟.液相色譜法同時(shí)測(cè)定肉制品中5種防腐劑[J].廣州化工，2018，46（7）：94-95.