IVF/ICSI周期中≥3PN胚胎用于囊胚培養方案優化的探討

秦祖興 唐永梅 牟聯俊 徐麗湘 梁明明 羅婷 李楠 李忻琳

【關鍵詞】 囊胚培養;微滴培養;異常受精胚胎

Optimization of blastocyst culture using ≥ 3PN embryos in IVF/ICSI cycle Qin Zuxing， Tang Yongmei，

Mu Lianjun， Xu Lixiang， Liang Mingming， Luo Ting， Li Nan， Li Xinlin. Reproductive Center， Liuzhou Maternal and Child Health Care Hospital， Liuzhou 545001， China

Corresponding author， Li Xinlin

【Abstract】 Objective To investigate the effect of the number of embryos cultured in a single blastocyst medium droplet and the volume of blastocyst medium droplet on blastocyst formation. ?Methods ? With the informed consents of the patients， the abnormally fertilized embryos （ ? ≥3PN embryos） with pronuclear number ≥ 3 from July 2016 to June 2018 were utilized for blastocyst culture. The inclusion criteria were cell number ≥ 6 and fragment ≤ 30%. The 3PN embryos on the 3rd day of insemination were randomly divided into one， two， three， and four combinations and cultured in a single blastocyst medium droplet in a volume of 30 μl. Subsequently， the 3PN embryos on the 3rd day of insemination were randomly cultured in 10 μl， 20 μl， 30 μl， 40 μl， and 50 μl of blastocyst medium droplet. The formation rate of blastocysts was observed and statistically compared. ?Results The number of embryos did not affect the formation rate of≥stage 3 or early blastocysts （both P > 0.05）. The difference was not statistically significant in the formation rates of ≥stage 3 blastocysts and ≥early blastocysts in groups of different volume of culture droplets （both P > 0.05）. ?Conclusion The number of embryos cultured in a single blastocyst medium droplet and the volume of culture droplets exerts no effect on the blastocyst formation.

【Key words】 Blastocyst culture;Microdroplet culture;Abnormally fertilized embryo

輔助生殖技術中，囊胚移植在第5 ～ 6日進行，較卵裂胚移植晚2 ～ 3 d。相比卵裂胚移植，囊胚移植可以提高臨床妊娠率、種植率、繼續妊娠率，降低早期流產，還可以提高活產率[1-2]。體外培養條件下囊胚形成率和囊胚質量是囊胚移植的關鍵。在助孕過程中常能見到一定數量的多原核（≥3PN）異常受精胚胎。臨床工作中，≥3PN胚胎屬于不可用胚胎，通常是廢棄處理。將≥3PN胚胎應用于科研，倫理方面更易被接受。同時，≥3PN胚胎也具有一定潛能，經體外培養可發育至囊胚階段。本研究嘗試將≥3PN胚胎用于囊胚培養方案的優化，探討單個囊胚培養滴中培養的胚胎數目和囊胚培養滴體積對囊胚形成的影響，為今后的臨床工作提供參考。

材料與方法

一、材 料

2016年7月至2018年6月在我中心使用輔助生殖技術助孕患者的≥3PN胚胎中，選擇細胞數≥6、碎片≤30%者，在患者了解研究方案并簽署知情同意書后用于研究。本研究方案經醫院醫學倫理委員會批準。

二、方 法

1. 胚胎培養數目對囊胚形成的影響

授精第3日的≥3PN胚胎隨機分為1、2、3、4個的組合分別置于體積為30 μl的單個囊胚培養液滴中培養，觀察囊胚培養情況。按Gardner系統進行囊胚評級。卵裂期培養液為卵裂培養基（COOK， 澳大利亞）或G-1（Vitrolife， 瑞典），囊胚培養液為相對應的Blastocyst Medium （BM，COOK， 澳大利亞）或G-2（Vitrolife， 瑞典）。本研究采用COOK桌面三氣培養箱（型號：K-MINC-1000）培養胚胎。培養條件為37℃、6% CO2、5%O2。

2. 囊胚培養滴體積對囊胚形成的影響