白頭翁皂苷B4對肝癌細胞Huh—7及其荷瘤裸鼠腫瘤的抑制作用及機制研究

薛淑一 李明春 苗青 周煜

中圖分類號 R965；R735.7 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2019）05-0601-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.05.06

摘 要 目的：研究白頭翁皂苷B4（AB4）對肝癌細胞Huh-7及其荷瘤裸鼠腫瘤的抑制作用及機制。方法：將Huh-7細胞分為AB4給藥組、陰性對照組（等體積培養液）、陽性對照組（5-氟尿嘧啶50 μmol/L），運用MTT法檢測0、3、6、12、25、50、100、200、400、800、 1 600 μmol/L AB4作用Huh-7細胞12、24、36、48 h的增殖抑制率，計算半數抑制濃度（IC50）；克隆形成試驗評估50 μmol/L AB4作用Huh-7細胞24 h的克隆細胞數；膜聯蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin Ⅴ-FITC/PI）染色檢測50 μmol/L AB4作用Huh-7細胞24 h的細胞凋亡率；Western blot法檢測50 μmol/L AB4作用Huh-7細胞24 h后B細胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3（Caspase-3）、活化胱天蛋白酶3（Cleaved Caspase-3）、活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶（Cleaved PARP）等凋亡蛋白的表達。將荷瘤裸鼠隨機分為陰性對照組（生理鹽水）、陽性對照組（5-氟尿嘧啶50 mg/kg）和AB4低、中、高劑量組（25、50、100 mg/kg），每組3只，每天腹腔注射相應藥物1次，連續19 d，觀察裸鼠腫瘤生長情況，計算抑瘤率；蘇木精-伊紅（HE）染色觀察腫瘤細胞形態變化。結果：AB4對Huh-7細胞的增殖抑制率隨給藥濃度的增加而增加，但50 μmol/L后增加不明顯，隨作用時間的延長而增加，但作用24 h后增加不明顯，AB4的IC50為（56.76±1.756） μmol/L。與陰性對照組比較，50 μmol/L AB4作用Huh-7細胞24 h的克隆細胞數明顯減少、Bcl-2蛋白表達明顯減弱（P<0.05），細胞凋亡率和Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表達均明顯增加（P<0.05或P<0.01），且與陽性對照組差異無統計學意義。與陰性對照組比較，AB4低、中、高劑量組和陽性對照組荷瘤裸鼠的瘤體積明顯減小（P<0.05），腫瘤細胞輪廓逐漸模糊，出現核固縮、核質不清晰、核碎裂現象，其抑瘤率分別為25.93%、39.15%、46.26%、42.83%。結論：AB4對Huh-7細胞及其荷瘤裸鼠均有抑制作用，其機制可能與上調Bax/Bcl-2比例、活化Caspase-3、裂解PARP、誘導細胞發生凋亡有關。

關鍵詞 白頭翁皂苷B4；肝癌細胞Huh-7；荷瘤裸鼠；抑制作用；機制

Inhibitory Effects and Mechanism of Anemoside B4 on Hepatocellular Carcinoma Huh-7 Cells and Tumor- bearing Nude Mice

XUE Shuyi1，2，LI Mingchun2，MIAO Qing2，ZHOU Yu2，3（1.Dept. of Pharmacology， School of Pharmacy， Qingdao University， Shandong Qingdao 266021， China；2.Dept. of Pharmacy， No. 971 Hospital of the Navy of PLA， Shandong Qingdao 266071， China；3.College of Pharmacy， Dalian Medical University， Liaoning Dalian 116044， China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the anti-tumor effect of anemoside B4 （AB4） on hepatocellular carcinoma Huh-7 and tumor-bearing nude mice and its mechanism. METHODS： Huh-7 cells were divided into AB4 treatment group， negative control group （constant volume of culture medium） and positive control group （5-fluorouracil 50 μmol/L）. The inhibitory rate of Huh-7 cell proliferation was tested by MTT after treated with 0， 3， 6， 12， 25， 50， 100， 200， 400， 800， 1 600 μmol/L AB4 for 12， 24， 36， 48 h； IC50 were calculated. The number of clone cells was evaluated by clone formation tests after Huh-7 cells were treated with 50 μmol/L AB4 for 24 h. The apoptosis rate of Huh-7 cells was tested by Annexin Ⅴ-FITC/PI double staining after treated with 50 μmol/L AB4 for 24 h. The expression of apoptotic proteins such as Bcl-2， Bax， Caspase-3， Cleaved Caspase-3 and Cleaved PARP were tested by Western blot after Huh-7 cells were treated with 50 μmol/L AB4 for 24 h. Tumor-bearing nude mice were randomly divided into negative control group （normal saline）， positive control group （5-fluorouracil 50 mg/kg）， AB4 lwo-dose， medium-dose and high-dose groups （25， 50， 100 mg/kg）， with 3 mice in each group. They were given relevant medicine intraperitoneally， once a day， for consecutive 19 d. The growth of tumor was observed， and anti-tumor rate was also calculated. HE staining was used to observe the morphology of tumor cells. RESULTS： The inhibition rate of AB4 on Huh-7 cell proliferation increased with the increase of concentration of AB4， but it did not increase significantly after reaching 50 μmol/L； it increased with the increase of time， but it did not increase significantly after 24 h. The IC50 of AB4 was （56.76±1.756） μmol/L. Compared with negative control group， the number of clone cells was decreased significantly after Huh-7 cells were treated with 50 μmol/L AB4 for 24 h， while the protein expression of Bcl-2 was decreased significantly （P<0.05）； the apoptotic rate， the protein expression of Bax， Caspase-3， Cleaved Caspase-3 and Cleaved PARP were increased significantly （P<0.05 or P<0.01）， there was no statistical significance， compared with positive control group. Compared with negative control group， the volume of tumor was decreased significantly in AB4 low-dose， medium-dose and high-dose groups， positive control group （P<0.05）； the outline of tumor cells become more and more blurred； there were nuclear pyknosis， unclear nucleoplasm and nuclear fragmentation； its anti-tumor rates were 25.93%， 39.15%， 46.26%， 42.83%， respectively. CONCLUSIONS： AB4 inhibits Huh-7 cells and tumor-bearing mice， the mechanism of which may be associated with up-regulating the proportion of Bax/Bcl-2， activating Caspase-3， cracking PARP and inducing apoptosis.

KEYWORDS Anemoside B4； Hepatocellular carcinoma Huh-7； Tumor-bearing nude mice； Inhibitory effect； Mechanism

肝癌是常見的惡性腫瘤，發病率位于世界總癌癥的第6位，病死率位于第4位，是導致男性死亡的第二大癌癥[1]。導致肝癌發生的危險因素主要包括以乙型、丙型肝炎病毒為代表的病毒因素；遺傳、變質食物中的黃曲霉毒素、水質污染導致泛濫的藍綠藻類毒素、過度吸煙飲酒、非酒精性脂肪肝等非病毒因素[2]。中國是肝癌高發地區，尤其是乙肝導致的肝癌[1]。目前索拉菲尼是美國FDA唯一批準的晚期肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）治療的藥物[3]，一旦耐藥，就沒有其他標準治療方案適用[4]。為此，尋找能夠治療肝癌的新的化學結構實體并研究其作用機制尤為重要。白頭翁皂苷B4（Anemoside B4，AB4）來源于毛茛科的植物白頭翁，傳統醫學記載，白頭翁有清熱解毒、涼血止痢的功效[5]，其主要成分為三萜皂苷、三萜酸、胡蘿卜苷、木脂素等[6]。白頭翁皂苷（Pulsatilla chinensis saponin）作為一種三萜皂苷，具有抗腫瘤活性，中國民間有應用其治療乙肝的實例[7]。而單體AB4是白頭翁皂苷的主要活性成分，但其抗癌活性與機制尚不清楚。因此，本研究擬從體內和體外探究AB4對肝癌細胞Huh-7的潛在抑制作用，并初步探討其分子機制，以期為AB4更好地開發利用提供理論依據。

1 材料

1.1 儀器

YXQ-LS-50A型全自動立式電熱壓力蒸汽滅菌器（上海博迅醫療生物儀器股份有限公司）；CB型CO2培養箱（德國Binder公司）；XDS-1B型顯微鏡（上海光學儀器廠）；SW-CJ-2F型超凈工作臺（上海蘇凈實業有限公司）；HH-2型數顯恒溫水浴鍋（常州億通分析儀器制造有限公司）；TGL16型離心機（長沙英泰儀器有限公司）；ELx800型酶標儀（美國Bio-Tek公司）；Accuri C6型流式細胞儀（美國BD公司）；910型凝膠成像系統（上海山富科學儀器公司）；Mini-Protean Tetra型垂直電泳槽（美國Bio-Rad公司）；WH-1型微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

AB4（上海愛必信生物科技有限公司，批號：wkq16032901，純度：98%）；5-氟尿嘧啶（5-FU，北京索萊寶科技有限公司，批號：F8301，純度：98.0%～102.0%）；DMEM培養基、胰蛋白酶、青霉素/鏈霉素雙抗（美國Hyclone公司，批號：AD16191267、J170046、J170042）；胎牛血清（澳大利亞AusGeneX公司，批號：FBSSA01016-2）；Matrigel膠（美國BD公司，批號：356234）；B細胞淋巴瘤2（Bcl-2）兔單克隆抗體、Bcl-2相關X蛋白（Bax）兔多克隆抗體、胱天蛋白酶3（Caspase-3）兔多克隆抗體、活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶（Cleaved PARP）兔多克隆抗體、β-肌動蛋白（β-actin）兔單克隆抗體、辣根過氧化物酶（HRP）標記山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）（美國CST公司，批號：3498、2772、9662、5625、8457、7074）；四甲基偶氮唑鹽（MTT）試劑盒、膜聯蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin Ⅴ-FITC/PI）細胞凋亡檢測試劑盒、蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（上海碧云天生物技術有限公司，批號：C0009、C1062、C0105）；HRP底物化學發光液（美國Millipore公司，批號：1702302）。

1.3 細胞

人肝癌細胞Huh-7購自中國科學院典藏培養物保藏委員會上海細胞庫。

1.4 動物

BALB/c裸鼠，SPF級，♂，4 周齡（28～34 d），體質量 15～18 g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXK（京）2016-0006；將裸鼠置于22～26 ℃、濕度40%～60%的環境中，自由攝食與飲水，籠具等均經高壓滅菌處理后使用，保持墊料干燥清潔，適應性飼養1周后用于實驗。本實驗遵守實驗動物福利與倫理原則，經解放軍海軍第九七一醫院倫理委員會批準，編號為401LL-2017010。

2 方法與結果

2.1 細胞培養

將Huh-7細胞置于含有10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素雙抗溶液的DMEM培養基中，于37 ℃、5% CO2飽和濕度培養箱中培養。2～3 d傳代，取對數生長期細胞進行試驗。

2.2 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統計學分析，計量資料以 x±s表示，多組間比較采用單因素和雙因素方差分析，組間兩兩比較采用Dunnett’s t檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2.3 MTT試驗檢測細胞增殖抑制率

收集對數生長期的Huh-7細胞，用0.25%的胰酶消化，調整細胞懸液的濃度至5×104 mL-1，以每孔5 000 個/200 μL的接種量接種于96孔板，放回培養箱中繼續培養，待細胞貼壁融合至70%～80%，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）配制的AB4（終濃度分別為0、3、6、12、25、50、100、200、400、800、1 600 μmol/L），同時設置空白對照組（無細胞）、陽性對照組（50 μmol/L 5-FU），每組3個復孔。藥物與細胞作用12、24、36、48 h后，每孔加入 5 mg/mL的MTT溶液10 μL，繼續孵育4 h，加入100 μL Formazan溶解液，混勻后孵育4 h，光學顯微鏡下觀察紫色結晶全部溶解，用酶標儀在570 nm波長處測定吸光度（A），試驗重復3次，計算細胞增殖抑制率[細胞增殖抑制率（%）=（ 1-A給藥組/A陰性對照組）×100%]和半數抑制濃度（IC50）。不同濃度AB4對Huh-7細胞增殖抑制率的影響見圖1，AB4作用不同時間對Huh-7細胞增殖抑制率的影響見圖2。

由圖1可知，與AB4 0 μmol/L比較，AB4 6～1 600 μmol/L作用12、24、36、48 h對Huh-7細胞增殖均有抑制作用（P<0.05或P<0.01），其增殖抑制率均隨AB4給藥濃度的增加而增加，6～50 μmol/L濃度間增加幅度較大，50～1 600 μmol/L濃度間細胞抑制率增加幅度減小。其中50 μmol/L AB4的細胞增殖抑制率與陽性對照組最接近。因此后續試驗中AB4的給藥濃度均定為50 μmol/L。

由圖2可知，AB4對Huh-7細胞的增殖抑制率隨作用時間的延長而增加，作用24 h后增殖抑制率的增加幅度減緩，因此后續試驗作用時間定為24 h。根據以上結果，計算50 μmol/L AB4作用24 h對Huh-7細胞的IC50為（56.76±1.756） μmol/L。

2.4 克隆形成試驗評估AB4的長期抑制效果

將Huh-7細胞以2.5×106個/孔的密度接種在6孔板中，37 ℃下孵育24 h，加入50 μmol/L的AB4（AB4組），同時設置陰性對照組（等體積培養液）、陽性對照組（50 μmol/L 5-FU），作用24 h后，臺盼藍染色計數，以每孔 1 000個細胞重新鋪板到6孔板中，孵育14 d，用冷PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定20 min，0.1%結晶紫染色20 min后流水清洗染色液，放置空氣中干燥，肉眼計數。結果顯示，與陰性對照組比較，AB4組和陽性對照組均能夠顯著抑制Huh-7細胞的克隆形成，AB4的抑制效果與 5-FU無明顯差異。各組細胞的克隆形成圖見圖3。

2.5 Annexin Ⅴ-FITC/PI染色評估細胞凋亡率

收集對數生長期的Huh-7細胞，以2.5×105個/孔接種到24孔板中，37 ℃、5% CO2孵育過夜后，加入50 μmol/L的AB4（AB4組），同時設置陰性對照組（等體積培養液）、陽性對照組（50 μmol/L 5-FU），作用24 h后，PBS清洗2次，以1×106 mL-1重懸至結合緩沖液（Binding buffer），加入Annexin Ⅴ-FITC和PI混勻，室溫避光孵育10～30 min，隨后置于冰浴中，上流式細胞儀檢測，試驗重復3次，計算細胞凋亡率（凋亡細胞數/細胞總數×100%）。結果顯示，陰性對照組、AB4組、陽性對照組的細胞凋亡率分別為2.99%、68.63%、64.94%。與陰性對照組比較，AB4組和陽性對照組的細胞凋亡率明顯增加（P<0.01），AB4組與陽性對照組的細胞凋亡率差異無統計學意義（P>0.05）。這表明AB4可顯著提高Huh-7細胞凋亡率。各組細胞凋亡的分布圖見圖4。

2.6 Western blot法檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表達水平

將Huh-7細胞接種于6孔板中，繼續培養至細胞貼壁融合至70%～80%，加入50 μmol/L的AB4（AB4組），同時設置陰性對照組（等體積培養液）、陽性對照組（50 μmol/L 5-FU），作用24 h，用細胞裂解液裂解各組細胞獲得細胞總蛋白，BCA試劑盒測定總蛋白含量，100 ℃下5 min蛋白變性后，進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳，濕轉至PVDF膜，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，加入凋亡相關蛋白Bcl-2兔單克隆抗體、Bax兔多克隆抗體、Caspase-3兔多克隆抗體、Cleaved PARP兔多克隆抗體、β-actin兔單克隆抗體（稀釋比例均為1 ∶ 1 000），4 ℃孵育過夜。隔日加入HRP標記山羊抗兔IgG（稀釋比例為1 ∶ 1 000），室溫孵育1 h，將增強型化學發光（ECL）顯色劑覆蓋于膜的蛋白面，于化學發光凝膠成像儀中顯影拍照，用Image J對蛋白條帶進行分析，以目標蛋白灰度值與β-actin蛋白灰度值的比值評價目標蛋白的表達量，將陰性對照組各蛋白相對表達量設為“1”，評價其他組各蛋白的相對表達量，試驗重復3次。各組細胞凋亡相關蛋白的電泳圖見圖5，測定結果見圖6。

由圖6可知，與陰性對照組比較，AB4組和陽性對照組細胞中Bcl-2蛋白相對表達量明顯降低（P<0.05），Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白相對表達量均明顯增加（P<0.05或P<0.01），且AB4組與陽性對照組間差異無統計學意義（P>0.05）。由此表明，AB4抑制肝癌細胞增殖的作用可能與細胞凋亡有關。

2.7 荷瘤裸鼠的抑瘤作用檢測

收集對數生長期的Huh-7細胞，1 000 r/min離心5 min后重懸于PBS中，與Matrigel膠等體積混合，調整細胞濃度為1×107 mL-1，皮下注射于裸鼠右側腋下部位，接種量為0.2 mL，5 d后，裸鼠右上肢腋下觀察有黃豆大小腫瘤生成（體積約為20～40 mm3），即為造模成功。隨后，用游標卡尺測量腫瘤長徑與短徑，計算瘤體積=（長×寬2）/2。待裸鼠瘤體積長至100～150 mm3，將荷瘤裸鼠隨機分為陰性對照組（生理鹽水）、陽性對照組（50 mg/kg 5-FU）和AB4低、中、高劑量組（25、50、100 mg/kg），每組3只，按預實驗結果設置給藥劑量，每日腹腔注射相應藥物1次，給藥體積均為10 mL/kg，連續給藥19 d。從第1次腹腔注射藥物開始，每隔1 d測量1次腫瘤的長徑與短徑，并計算瘤體積。末次給藥后處死裸鼠，剝離腫瘤，稱體質量，計算抑瘤率，同時將腫瘤組織放入10%甲醛中固定待用。抑瘤率（%）=（1-給藥組瘤質量/陰性對照組瘤質量）×100%。結果顯示，注射藥物19 d后，荷瘤裸鼠無中毒癥狀，體質量無明顯差異（P>0.05）。與陰性對照組比較，AB4低、中、高劑量組和陽性對照組荷瘤裸鼠瘤體積明顯減小（P<0.05或P<0.01），第19天的瘤體積分別減小了24.18%、33.31%、43.20%、37.57%；抑瘤率分別為25.93%、39.15%、46.26%、42.83%。不同給藥時間后各組荷瘤裸鼠瘤體積的變化曲線見圖7。

2.8 腫瘤組織病理學檢查

將固定在10%甲醛中的腫瘤組織進行脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、貼片等步驟后，進行HE染色并封片，光鏡下觀察腫瘤組織結構的改變。病理切片顯示，陰性對照組細胞核大小較均一，無明顯的形態學改變；AB4低、中、高劑量組和陽性對照組腫瘤組織細胞輪廓模糊，細胞邊界不清晰，形狀不規則，大小不一，出現核固縮、核質不清晰、核碎裂等現象，上述現象隨AB4劑量的增加越明顯。各組荷瘤裸鼠腫瘤細胞的形態圖見圖8。

3 討論

原發性肝癌包括HCC、肝內膽管細胞癌（Intrahepatic cholangi-Ocarcinoma，ICC）和混合性肝細胞膽管癌（Combined hepatocellular-cholangiocarcinoma，CHC）[8]，其中最常見的為HCC。當前對肝癌的治療方法主要有手術治療[9]、放射治療[10]、化學[11]及生物治療[12]等，盡管我國一直致力于對肝癌的研究，并在肝癌的檢測和治療方面取得進展，但由于肝癌發病機制復雜、早期診斷困難、治療水平限制及腫瘤進展迅速且易轉移等，導致患者復發率高、預后較差[13]。關于肝癌的藥物治療現況，目前主要是化療藥物與小分子靶向藥物及之間的聯合用藥。化療藥物毒性強、特異性差，在殺死癌細胞時，往往正常細胞也會“受災”；小分子靶向藥物特異性強、毒性小，但是仍存在耐藥問題。這主要是因為細胞信號通路非常復雜，抑制一種信號通路，很可能會使其他信號通路產生代償性改變。

Bax和Bcl-2是參與Caspase依賴性細胞凋亡過程中的相關蛋白，Bax作為促凋亡蛋白，Bcl-2作為抑凋亡蛋白，共同調節細胞凋亡過程[14-15]。Bax可單獨形成同源二聚體，促進細胞發生凋亡；也可以與Bcl-2一起形成異同源二聚體，抑制細胞發生凋亡，同源二聚體的穩定性小于異同源二聚體[16]。研究發現，Bcl-2和Bax的比例關系對于細胞凋亡至關重要[17]，降低抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白水平的表達，增強促凋亡蛋白Bax蛋白水平的表達，從而使Bax/Bcl-2比例升高，可促使細胞發生凋亡。另外，Caspase家族是細胞凋亡過程中重要的半胱氨酸蛋白酶，其中Caspase-3蛋白酶是凋亡級聯反應中的主要角色。Bcl-2是通過抑制細胞色素C釋放[18]，從而抑制Caspase家族相關蛋白酶激活，阻止細胞凋亡發生；相反，作為線粒體膜的離子通道成分的Bax能促使細胞色素C釋放入線粒體，激活Caspase家族，活化Caspase-3，裂解PARP[19]，使其失去生物活性，損傷核內DNA，引發細胞凋亡發生[17]。本研究初步發現，AB4可能通過下調Bcl-2，上調Bax，增大Bax/Bcl-2比例，激活Caspase家族，活化Caspase-3，作用于PARP，進而促使肝癌細胞發生凋亡，從而發揮抗腫瘤作用，其誘導凋亡的具體關系機制則需進一步研究。

本試驗結果發現，AB4作為白頭翁皂苷的主要活性成分，具有抗肝癌活性。先前研究表明，從P. chinensis saponins中提取的其他活性化合物也具有抗腫瘤活性，如白頭翁皂苷A（PSA）、白頭翁皂苷D（PSD）及23-羥基白樺酸（23-HBA）。PSA通過誘導DNA損傷，調節p53、細胞周期蛋白B（Cyclin B）和Bcl-2蛋白表達誘導細胞發生凋亡[20]。PSD的分離物SB365能通過抑制Akt、mTOR和p70S6K的磷酸化，調節PI3K/Akt/mTOR通路抑制細胞生長和血管生成[21]，該通路在細胞凋亡方面占據重要地位[22]。23-HBA的衍生物B4G2則能增強活性氧介導的細胞內鈣積累，刺激線粒體Ca2+滲透性轉換孔開放，導致線粒體形態改變，引發線粒體依賴的細胞凋亡，抑制肝癌細胞增殖[23]。因此，可嘗試采用AB4聯合白頭翁皂苷其他活性成分，通過作用不同的通路共同誘導肝癌細胞發生凋亡，產生協同作用。另外，白頭翁皂苷提取的活性產物還能與化療藥物聯合用藥。研究表明，SB365能協同化療藥物增強對宮頸癌細胞HeLa的敏感性，增強其抗癌活性[24]； 23-HBA與阿霉素有協同抗癌作用[25]，若將AB4與化療藥物聯用，也會為化療藥物聯合用藥多提供了一種選擇。這表明AB4未來可能是一種很有價值的抗癌藥。

當前，來源于植物的天然產物已在臨床上有廣泛的應用，是目前的研究熱點，特別是應用于臨床無法治愈的惡性腫瘤，因此，AB4具有良好的開發應用前景。本研究率先證明AB4能夠抑制肝癌細胞Huh-7的增殖，抑制肝癌裸鼠異種移植模型腫瘤的生長，并初步探索了其誘導凋亡的機制，這為AB4將來在臨床上可能作為一種小分子靶向藥物的輔助治療藥物提供了依據。下一步實驗可補充AB4對肝癌的藥效學及機制研究，全面進行AB4的藥物代謝、生物毒性、穩定劑型的研究，以期研發一種治療效果好、副作用小、質量穩定的中藥新制劑。

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（收稿日期：2018-10-11 修回日期：2019-01-11）

（編輯：鄒麗娟）