紅豆杉對糖尿病腎病大鼠腎功能的影響

熊艷文 李夢可 周平樂 周圓圓

上海市普陀區利群醫院,上海 200333)

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病微小血管并發癥之一，其主要表現為進行性蛋白尿和腎功能衰退，最終發展為終末期腎病[1]。隨著人們生活水平的提高和生活習慣的改變，有調查估計全球糖尿病患者的患病率由2000年的2.8%上升到到2030年的4.4%，人數也由2000年的1.71億上升到2030年的3.66億[2]。DN 發病機制復雜，其中涉及糖代謝紊亂、腎臟血流動力學改變，多種細胞因子及遺傳背景等。本實驗采用單側腎臟結扎后STZ腹腔注射建立糖尿病腎病大鼠模型，觀察紅豆杉對DN大鼠血尿液生化指標的影響，探討紅豆杉對DN腎功能的保護作用，以便為中醫藥防治糖尿病腎病提供更好的方法和實驗研究依據。報告如下。

1 材料與方法

1.1實驗材料 選用SD大鼠雌性40只，體重(200±20)g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，實驗動物生產許可證號：SCXK(滬)2002--0001。適應性平衡飼養1周后，用于試驗。藥物與試劑為：紅豆杉購自上海信德中藥公司飲片廠，由上海市普陀區利群醫院中藥房采用水煎法制成每毫升含生藥量0.1g的中藥濃縮液體。糖脈康顆粒(四川寶鑒堂藥業有限公司，批號181002(120))，5g/袋；拜糖平片(拜耳醫藥保健公司，批號BJ44669)50 mg/片。鏈脲佐菌素(STZ)購自美國Sigma公司，-20℃保存，臨用前用pH4.5 的檸檬酸緩沖液配制為1%的應用液；尿蛋白(Urine protein,Upro)定量試劑盒購自南京建成生物工程研究所。戊巴比妥鈉購自中國醫藥(集團)上海化學試劑公司(進口分裝)，臨用前用生理鹽水配成3%的濃度待用。

1.2方法

1.2.1糖尿病腎病模型制作 40只雌性SD大鼠，適應性飼養1周后，禁食12 h，均腹腔注射3%的戊巴比妥鈉溶液45 mg/kg進行麻醉。確認麻醉后，隨機抽取8只作為假手術組。其余為模型組，行左側腎臟結扎術。術后第14天，各組大鼠禁食18 h后，大鼠一次性腹腔注射1%STZ溶液55 mg/kg。假手術組大鼠一次性注射同等劑量的檸檬酸緩沖液。STZ注射后第3天測血糖，計算尿量，測尿蛋白，并以非空腹血糖>16.6 mmol/L，尿量>原尿量150%，尿蛋白排泄>20 mg/24h為成模標準。

1.2.2分組與給藥 將40只實驗動物按體重隨機分成五組，每組8只。分別為A組：假手術組；B組：模型對照組；C 組：拜糖平組；D組：糖脈康組；E組：紅豆杉組。STZ注射后第8天開始C、D和E組每日灌胃喂藥，C組將拜糖平研磨溶于生理鹽水中，按14 mg/ kg給藥，D組給予4.5g/kg糖脈康沖劑，E組給予3.25g/kg紅豆杉水煎劑，A組和B組大鼠每日給予同體積的飲用水。

1.2.3生化指標檢測和標本提取 (1)血糖：給各組大鼠灌胃治療之后，分別于灌胃后的第1周、3周、6周時尾靜脈采血，測定大鼠血糖。(2)尿液：第6周末，用代謝籠收集大鼠24 h尿液，在代謝籠收集大鼠尿液期間禁食不禁水，收集到大鼠尿液之后，記錄各組大鼠尿量，然后用低溫離心機3 000轉10 min低速離心，吸取上層尿液，將收集到的尿液測定大鼠24 h尿微量白蛋白(ELISA試劑盒測定，檢測嚴格按照說明書)。(3)血液：6周末，用3%異戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，用固定板固定大鼠，打開腹腔，分離腹主動脈，用一次性注射器腹主動脈取血，摘取兩腎，去除包膜，稱取右腎重量，所采血液經低溫冷凍離心機3 000轉10 min低速離心，分離血清用于測定血肌酐Scr、血尿素氮BUN。

2 結 果

2.1各組大鼠6周后體重、腎重指數、24h尿微量白蛋白排泄率(UAER)情況 造模成功6周后，各模型組與正常組大鼠相比較，體重均明顯下降，腎重指數和24h微量白蛋白排泄率明顯上升，差異有統計學意義(P<0.05)。各模型組之間比較，治療組的體重均明顯高于模型對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，治療組中紅豆杉組體重高于拜糖平組和糖脈康組，差異有統計學意義(P<0.05)；治療組的腎重指數和UAER均低于模型對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。治療組中比較，紅豆杉組腎重指數和UAER低于其他二組，差異有統計學意義(P<0.05)，而其他二組之間比較差異無統計學意義(P>0.05)。說明紅豆杉能夠有效降低腎重指數、降低蛋白尿。見表1，圖1-3。

表1 6周末各組大鼠體重、腎重指數、24h尿微量白蛋白排泄率的比較

圖1 各組大鼠體重比較 圖2 各組大鼠腎重指數比較

圖3 各組大鼠24h尿微 圖4 各組大鼠血肌酐比較 量白蛋白排泄率比較

2.2各組大鼠6周后血尿素氮、血肌酐、血糖情況 造模成功6周后，各模型組與正常組大鼠相比較，血尿素氮、血肌酐、血糖均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。模型組中，模型對照組的各項指標均明顯高于其他三組，差異有統計學意義(P<0.05)。拜糖平組與糖脈康組兩組組間比較各項指標差異均無統計學意義(P>0.05)。紅豆杉組在血肌酐和血尿素氮指標上均明顯低于拜糖平組和糖脈康組，差異有統計學意義(P<0.05)；而在降低血糖指標上與其他兩組比較差異無統計學意義(P>0.05)。故紅豆杉組能明顯降低血尿素氮、血肌酐，且效果優于拜糖平組和糖脈康組。見表2，圖4-6。

表2 6周末大鼠血肌酐Scr、尿素氮BUN、血糖的比較

圖5 各組大鼠血尿素氮比較 圖6 各組大鼠血糖比較

3 討 論

糖尿病腎病屬于現代醫學的病名，在祖國傳統醫學中并無明確的記載，而歷代醫學著作中 “消渴”“水腫”、“水病”、“脹滿”、“尿濁”、“關格”等病名與其甚為相似。其病因以稟賦不足、飲食失宜、情志失調、勞逸失度、失治誤治、六淫侵襲等為主。本虛標實，虛實夾雜為其主要病機[3]。

紅豆杉味甘、微苦，性平，入肺、胃、大腸經，紅豆杉具有解毒散積、活絡止痛、利水消腫的功效。現代藥理學研究發現，紅豆杉具有降血糖、抗氧化和抗應變性等多方面藥理作用[4]，而其中起主要降糖作用是紅杉醇。早期的研究表明：紅杉醇能顯著降低糖尿病模型高血糖、抑制肝糖原分解和葡萄糖吸收、降低血脂、改善自由基代謝和保護胰島β細胞，而對正常小鼠血糖沒有影響[5]。梁敬鈺等[6]報道：從紅豆衫等植物中提取的肌醇衍生物具有良好的降血糖作用，能顯著降低由四氧嘧啶誘發糖尿病小鼠的高血糖，能顯著降低腎上腺素誘發的高血糖，并使低下的肝糖原回升，能抑制葡萄糖的吸收，對葡萄糖引起的血糖升高有顯著的耐糖作用，能保護胰島細胞。

本實驗雄性SD大鼠采用單側腎臟結扎后STZ腹腔注射(55 mg/kg)的方法制作糖尿病腎病模型，在造模成功后，模型組即出現多飲、多食、體重降低等癥狀，在實驗的后期，模型組大鼠也出現了毛發暗淡、精神萎靡等表現，部分模型組大鼠還出現了白內障等眼球改變，提示采用此方法能夠成功的建立糖尿病腎病大鼠模型，能夠表現出一些糖尿病腎病的病理改變和癥狀表現。

本實驗測量血液和尿液等生化指標，發現模型組與正常組相比，體重明顯減輕，腎重指數明顯升高，紅豆杉組、拜糖平組、糖脈康組與模型對照組相比，體重升高，腎重指數明顯降低；而紅豆杉組體重高于拜糖平組和糖脈康組，腎重指數低于其他兩個治療組，差異有統計學意義。血糖、BUN、Scr、UAER等生化指標也顯示：模型組與正常組相比，上述指標都明顯升高；紅豆杉組、拜糖平組、糖脈康組上述指標均低于模型對照組；而紅豆杉組在血肌酐和血尿素氮指標上均明顯低于拜糖平組和糖脈康組，差異有統計學意義；而在降低血糖指標上與其他兩組比較無明顯差異。拜糖平組與糖脈康組之間上述指標比較均無差異。提示紅豆杉能夠有效降低腎重指數、降低蛋白尿，對糖尿病腎病大鼠腎功能有一定的保護作用。