復方黃芩“水膜”外用治療急性濕疹抗炎和抑制金葡菌的實驗研究

王首帆 徐宜厚 徐愛琴 朱立宏 秦宗碧 邱百怡

摘要目的：探討復方黃芩“水膜”外用對急性濕疹大鼠皮膚抗炎和抑制金黃色葡萄球菌的作用機制。方法：64只雄性大鼠根據隨機數字表法分為復方黃芩“水膜”觀察組（黃芩組）、黃蒲潔膚洗液組（黃蒲組）、硼酸液組（硼酸組）和生理鹽水組（鹽水組）4組，每組16只，鼠右耳予以100%二甲苯致炎后，分別用各組藥物濕敷1 h進行干預。檢測大鼠右耳腫脹程度;常規HE染色，觀察各組每個視野100個表皮細胞中的炎性反應細胞數。采用試管稀釋法對4組所用藥物作連續對倍稀釋，觀察體外對金黃色葡萄球菌的抑制情況。結果：1）與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳腫脹度均下降（均P<0.05），其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著下降（P<0.05），而黃芩組與硼酸組間比較，差異無統計學意義（P>0.05）。2）與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳表皮細胞中炎性反應細胞數均減少（均P<0.05），其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著減少（P<0.05），而黃芩組與硼酸組間差異無統計學意義（P>0.05）。3）黃芩組最低抑菌濃度（MIC）為15.6 mg/mL（1∶16），藥物最小殺菌濃度（MBC）為7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸組（P<0.05）而低于黃蒲組（P<0.05）。結論：復方黃芩“水膜”外用治療急性濕疹能有效改善大鼠的腫脹度，具有良好的抗炎和抑制金黃色葡萄球菌的作用。

關鍵詞復方黃芩;“水膜”;急性濕疹;抗炎;金黃色葡萄球菌

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.01.017

濕疹是最常見的以皮損對稱分布、劇烈瘙癢等為臨床表現的一種過敏性炎性反應性皮膚病，根據國內普查發現其中以急性濕疹發病率最高，約占52%[13]。濕疹病因復雜，現代醫學主要歸因于環境等因素引起的皮膚過敏、感染等，因此針對濕疹病因病理主要以抗過敏藥物、抗組胺藥和皮質類固醇激素為主要治療方案，這些外用制劑的治療雖然能夠控制急性濕疹的臨床癥狀，改善皮膚丘疹、滲出和瘙癢等癥狀，但是長期使用這類藥物存在易反復發作、加重病情等不良反應[47]。因此探尋安全有效的中藥外用制劑十分必要。縱觀古今文獻未見濕疹的病名，由古籍記載參照對應臨床癥狀可得將濕疹歸屬于中醫學“瘡”“廯”和“風”的范疇。《諸病源候論·瘡病諸候》中有“瘡”的病因病機相關記載“濕熱相搏，故頭面身體皆生瘡。其瘡初如疙，須臾生汁，熱勝者則變為膿，隨痙隨發”，認為急性濕疹發病雖在表但病根在里，屬于先天稟賦不足，又外感六淫內蘊濕熱，內外合邪浸淫肌膚發瘡瘍[89]。本研究選用復方黃芩“水膜”濕敷患處以清瀉濕熱、涼血消腫止癢，標本兼治，觀察其抗炎和抑制金黃色葡萄球菌的作用。現報道如下。

1材料與方法

1.1材料

64只雄性大鼠，體重為180～200 g，購自武漢愛博泰克生物科技有限公司，許可證號：SCXX（鄂）20070029。動物飼養于本單位動物實驗中心，飼養條件：溫度（23±1）°C，濕度（50±1）%，以12/12 h為光暗周期。

1.2方法

1.2.1分組與模型制備根據隨機數字表法分為復方黃芩“水膜”觀察組（黃芩組）、黃蒲潔膚洗液組（黃蒲組）、硼酸液組（硼酸組）和生理鹽水組（鹽水組）4組，每組16只。同等環境下，正常供水和墊料，所有雄性大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，將大鼠右耳予以100%二甲苯致炎后。出現肉眼可見的右耳腫脹即為造模成功。見圖1。

1.2.2干預方法動物造模后進行干預。1）黃芩組：以復方黃芩“水膜”（即復方黃芩水煎劑精制而成的濃縮藥液“水膜”）濕敷右耳;2）黃蒲組：以黃蒲潔膚洗液（廠家五〇五藥業有限公司;國藥準字B20021012藥味組成：黃柏、蛇床子、黃連、土茯苓、白鮮皮、苦參、百部、虎杖、蒲公英、丹參、丁香、地膚子）濕敷右耳;3）硼酸組：以硼酸液（廠家東莞市輝宏化工有限公司;生產批號29182942）濕敷右耳;4）鹽水組：以生理鹽水濕敷右耳。以上4組均濕敷1 h，分6次濕敷（每次間隔10 min），10 min/次。

1.2.3檢測指標與方法

1.2.3.1大鼠右耳腫脹程度每組8只大鼠麻醉處死，切除大鼠左右兩耳，右耳腫脹程度為兩耳的重量差。

1.2.3.2大鼠表皮細胞形態學每組隨機選取8只大鼠，麻醉處死后取大鼠右耳于10%多聚甲醛中固定，并根據標準組織學技術石蠟包埋，連續切片，4 μm/片，常規HE染色，觀察各組每個視野100個表皮細胞中的炎性反應細胞數。

1.2.3.3體外對金黃色葡萄球菌的抑制將金黃色葡萄球菌（ATCC25923，中國藥品生物制品檢定所）接種于營養肉湯培養基，培養傳代，配成2×108/mL的菌液，采用試管稀釋法對4種藥物作連續對倍稀釋（每個試管總量為1 mL），再加入10 μL菌液，比較找出對金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度（MIC）;同時再轉種于固定培養基，觀察有無細菌生長，找出藥物的最小殺菌濃度（MBC）。

1.3統計學方法采用SPSS 18.0統計軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗或秩和檢驗;計數資料以例數（百分率）表示，采用非參數χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1復方黃芩“水膜”對大鼠右耳腫脹度的影響與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳的腫脹度均下降（P<0.05），其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著下降（P<0.05），而黃芩組與硼酸組間差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2各組大鼠表皮細胞的形態學觀察與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳表皮細胞中炎性反應細胞數均減少（P<0.05），其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著減少（P<0.05），而黃芩組與硼酸組間比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1、圖2、表2。

2.3各組對金黃色葡萄球菌的抑制作用黃芩組MIC為15.6 mg/mL（1∶16），MBC為7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸組（P<0.05）而低于黃蒲組（P<0.05）。見表2。

3討論

《黃帝內經》原文以“諸痛癢瘡，皆屬于心”和“營氣不從，逆于肉里，乃生癰腫”道出急性濕疹的病因病機，心火旺盛，脾虛生濕，心火旺而耗血傷陰，脾虛，脾失健運，濕熱內蘊而血燥風動，不能及時滋養肌膚;又外感風濕熱邪，心主血脈，血熱偏虛，濕熱淫邪內外相搏，肌膚浸淫而發瘡。中醫外治法歷史悠久、療效確切，采用在急性濕疹患者局部外用藥，使藥力直接作用于病所，從而達到治病的目的[1013]。急性濕疹好發于皮膚，其病位表淺，丘疹、膿皰等病灶外露可見，采用中藥外治的方法不僅可以使藥力直達病所，藥物直接作用于患處而透達腠理，疏暢患處所處經脈，調和氣血，扶正祛邪，還能通過腠理毛竅，經皮給藥透皮吸收循經深入臟腑，內外合治，治標的同時兼顧治本，療效更顯著。經皮給藥具有諸多優勢，比如使藥效不被胃腸道酶、消化液、PH值等口服藥物必經的渠道所虛弱，因此近年來醫者對中藥外用制劑的研究從透皮吸收機制研究、透皮吸收促進劑研究等方面展開，并取得不錯的研究成果。目前中藥外用制劑劑型繁多，有水劑、油劑、酊劑、糊劑和軟膏劑等，其中水劑屬于“水膜”療法，即將外用中藥以水煎煮獲得濃縮藥液后濕敷于患處，形成一個“水膜”的隔離效應，使外界與皮損暫時隔斷，促進藥物發揮透達腠理，疏暢患處所處經脈、調和氣血、扶正祛邪的作用;而其他諸如油劑、酊劑、糊劑和軟膏劑等劑型，需要復雜的制備工藝才能實現，不如“水膜”便利、價廉[14]。因此本研究選擇復方黃芩“水膜”的外用治療方法，結果顯示復方黃芩“水膜”可有效改善急性濕疹大鼠耳廓腫脹程度。

急性濕疹一種具有急性炎性反應的常見過敏性炎性反應性皮膚病，中醫學臨床癥狀主要體現在局部患處皮膚紅、腫、熱;全身癥狀則以心煩、口渴、舌紅、苔黃、尿黃、便干等表現出炎性反應。現代醫學研究[1517]中發現，急性濕疹皮損處組織炎性反應時釋放炎性反應遞質，比如組胺、5羥色胺（5HT）、前列腺素E2（PGE2）等，這些炎性反應遞質的釋放造成皮損局部血流速度增速，血管擴張;血液代謝增加充血;血液產熱增加而導致皮損處皮膚顏色變紅，溫度升高;而這些炎性反應又會進一步引起局部充血和毛細血管壁通透性增高，積聚滲出物而致局部皮膚紅腫。本研究結果顯示：與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳的表皮細胞中炎性反應細胞數均減少，其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著減少，而黃芩組與硼酸組間未見明顯統計學意義，提示復方黃芩“水膜”治療急性濕疹具有一定的抗炎作用。

急性濕疹最常見的并發癥就是繼發感染，最常見因素是患者由于瘙癢難忍而搔抓，造成原來的濕疹皮損感染出現周圍現膿皰及膿性分泌物。研究表明，在急性濕疹中感染菌種以金黃色葡萄球菌陽性率最高，且高于亞急性、慢性濕疹的金黃色葡萄球菌檢出率，說明金黃色葡萄球菌與急性濕疹繼發感染密切相關。臨床上在瘙癢搔抓皮膚增厚瘙癢的循環中，細菌感染反復加重，增加急性濕疹的皮損滲出分泌物，而這些分泌物可能為金黃色葡萄球菌寄生提供了一定生存條件[1819]。本研究結果顯示，黃芩組MIC為15.6 mg/mL（1∶16），MBC為7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸而低于黃蒲組，提示復方黃芩“水膜”在體外急性濕疹研究中具有一定的抑制金黃色葡萄球菌的作用。

總之，復方黃芩“水膜”外用治療急性濕疹能有效改善大鼠的腫脹度，減少大鼠右耳的表皮細胞中炎性反應細胞數，同時抑制金黃色葡萄球菌，有效改善大鼠急性濕疹的癥狀，療效顯著，為臨床廣泛應用提供了基礎實驗依據。

參考文獻

[1]賈潔，王長奎.中西藥物聯合治療嬰幼兒急性濕疹的療效觀察[J].當代醫學，2011，17（20）：152153.

[2]林清，張建軍，李偉，等.五倍子與黃柏外用治療急性濕疹的配伍合理性研究[J].中華中醫藥雜志，2011，31（9）：21262129.

[3]劉彬.自擬方皮炎康湯治療急性濕疹療效觀察[J].中國社區醫師：醫學專業，2011，13（30）：208209.

[4]Ferreira eVEC，Pimentel MI，ValeteRosalino CM，et al.Resolution of cutaneous leishmaniasis after acute eczema due to intralesional meglumine antimoniate[J].Rev Inst Med Trop Sao Paulo，2014，56（4）：3612.

[5]Zhao T，Liu WL，Wu P，et al.A randomized，placebo controlled study on Fangfeng Tongsheng granule in treatment of subacute eczema[J].Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2015，40（7）：14158.

[6]樊梅，林軍.苦參荊芥飲濕敷治療急性濕疹療效觀察[J].陜西中醫，2012，33（7）：861862.

[7]霍亞蘭，李凡，蔡華，等.白芍總苷聯合阿維A治療掌跖部慢性角化性濕疹療效觀察[J].中國醫藥，2012，7（1）：9192.

[8]單敬文.龍膽瀉肝湯治療急性濕疹60例[J].光明中醫，2013，28（1）：8788.

[9]霍偉紅.抗過敏湯對急性濕疹抗過敏的實驗研究[J].中國醫藥指南，2010，08（30）：6162.

[10]黃早發，王冰.裸花紫珠膠囊聯合除濕止癢洗液治療急性濕疹療效觀察[J].中國臨床醫生，2013，41（6）：6162.

[11]羅繼紅，鐘江.龍膽瀉肝湯合六一散治療急性濕疹療效觀察[J].遼寧中醫藥大學學報，2013，18（3）：116117.

[12]薛文輝.中藥黃芩外用治療急性濕疹的療效觀察及其藥理分析[J].現代診斷與治療，2014，22（9）：20122013.

[13]于希軍.雙黃連粉針濕敷治療急性濕疹臨床觀察[J].安徽中醫學院學報，2013，32（5）：3133.

[14]覃永健，溫志娟.急性濕疹外洗方組方規律探討[J].中醫外治雜志，2012，21（1）：5758.

[15]Yao J，Li NF.Clinical observation on pricking and bloodletting and cupping with a threeedge needle for treatment of acute eczema[J].Chinese Acupuncture and Moxibustion，2007，27（6）：4246.

[16]葛一漫，張朝明，胡一梅，等.馬齒莧提取物對急性濕疹大鼠皮膚TNFα與IL4表達的影響[J].中國免疫學雜志，2014，30（12）：16371640，1646.

[17]姚春海，遲慧彥，宋艷麗，等.清熱除濕對急性濕疹患者細胞因子的影響[J].第四軍醫大學學報，2008，29（1）：9495.

[18]Acute eczema Research Group.Acute eczema[J].Concours Med，1965，87（24）：4102.

[19]李曉睿，李詠梅，宋瑜，等.苦黃注射液聯合復方甘草酸苷治療急性濕疹30例臨床觀察[J].江蘇中醫藥，2011，43（4）：5052.

（2017-07-07收稿責任編輯：張雄杰）