疏血通注射液與2種常用溶媒配伍的穩定性研究

謝佳蓉 ，馬旭彤 ，閆宏麗 ，梁春霞 ，皮佳鑫 ，劉志東

（1.天津中醫藥大學，天津 301600；2.天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津 301600；3.天津中醫藥大學，現代中藥發現與制劑技術教育部工程中心，天津 301600）

疏血通注射液是由水蛭、地龍提取并精制而成的復方中藥注射劑，具有活血化瘀、通經活絡的功能，用于瘀血阻絡所致的中風中經絡急性期，癥見半身不遂、口舌歪斜、言語蹇澀，急性腦梗死見上述癥狀者[1]。疏血通注射液作為一種中藥注射液，成分較復雜，溶媒的選擇對臨床應用的影響較大[2]。此外，中藥注射液配伍后的各項指標超標是產生臨床不良反應的潛在風險之一，例如配伍后不溶性微粒不合格會導致發熱、畏寒、寒顫、胸悶、氣緊以及皮膚過敏等臨床癥狀[3]。為保證疏血通注射液的臨床使用安全，本文對疏血通注射液與臨床常用配伍：100、250、500 mL規格的0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液進行配伍后溶液的穩定性考察。考慮到氯化鈉注射液的鹽析作用[4]，選用多廠家不同規格的氯化鈉注射液進行考察。考察參數包括：溶液外觀、pH值、滲透壓摩爾濃度、不溶性微粒、粒徑、蛋白質及次黃嘌呤含量。

1 儀器與試劑

Sartorius酸度儀PB10，YASN滲透壓測定儀Ospmopro3250，HACH濁度儀2100Q，天河醫療不溶性微粒分析儀GWF-5JA，Malvern激光粒度分析儀Nano Zetasizer，島津高效液相色譜儀LC-20AT，水為純化水，甲醇色譜純，磷酸氫二鈉為分析純。

疏血通注射液（牡丹江友搏藥業有限責任公司，規格：2 mL，批號：161023 13）；0.9%氯化鈉注射液（河北天成藥業有限公司，規格：100 mL，批號：F18041304，配伍樣品編號：NS100-1）；0.9%氯化鈉注射液（河北天成藥業有限公司，規格：100 mL，批號：F18032505，配伍樣品編號：NS100-2）；0.9%氯化鈉注射液（回音必集團東亞制藥，規格：100 mL，批號：20171031 41，配伍樣品編號：NS100-3）；0.9%氯化鈉注射液（河北天成藥業有限公司，規格：250 mL，批號：F18032002，配伍樣品編號：NS250-1）；0.9%氯化鈉注射液（回音必集團東亞制藥，規格：250 mL，批號：20180110 43，配伍樣品編號：NS250-2）；0.9%氯化鈉注射液（河北天成藥業有限公司，規格：500 mL，批號：A18040109，配伍樣品編號：NS500-1）；0.9%氯化鈉注射液（河北天成藥業有限公司，規格：500 mL，批號：A20183107，配伍樣品編號：NS500-2）；0.9%氯化鈉注射液（回音必集團東亞制藥，規格：500 mL，批號：20180306 41，配伍樣品編號：NS500-3）；5%葡萄糖注射液（江西科倫藥業有限公司，規格：100mL，批號：A18041802，配伍樣品編號：GS100）；5%葡萄糖注射液（江西科倫藥業有限公司，規格：250 mL，批號：C18043003-1，配伍樣品編號：GS250）；5%葡萄糖注射液（江西科倫藥業有限公司，規格：500 mL，批號：C18020904，配伍樣品編號：GS500）。

2 方法與結果

2.1 配伍方法 疏血通注射液說明書中“用法用量”描述為“靜脈滴注，每日6 mL或遵醫囑，加于5%葡萄糖注射液（或0.9%氯化鈉注射液）250～500 mL中，緩慢滴入”。依據此臨床用法用量，將3支（2 mL/支）疏血通注射液用注射器吸取內容物后，分別注入以上11種溶媒（0.9%氯化鈉注射液100、250、500 mL；5%葡萄糖注射液 100、250、500 mL）中搖勻待用。設置檢測節點為配伍后 1、2、4、6、8 h，并以配伍后0 h作為對照組。

2.2 疏血通配伍溶媒后溶液顏色及外觀檢查 參照《中國藥典（2015版）》第四部0901溶液顏色檢查法[5]，配制標準色號。按照表1中比例使用移液器和量筒配制0.5、1、2色號各10 mL，轉移至25 mL奈式比色管中。用量筒量取10 mL不同溶媒不同規格配伍后的注射液于25 mL奈式比色管中，分別與現配藥典標準色號0.5、1、2號進行比色。

配伍后溶液顏色均為淡黃色，100 mL規格配伍后比色號2淺，250 mL規格配伍后比色號1淺，500 mL規格配伍后比色號0.5淺。0～8 h期間顏色穩定無變化。且以上配伍樣品8 h內均澄清。

2.3 疏血通配伍溶媒后pH穩定性考察 參照《中國藥典（2015版）》第四部0631pH測定法[5]，分別測定配伍 0、1、2、4、6、8 h 后樣品溶液的 pH，以考察配伍后溶液pH的穩定性。酸度儀使用前用pH4.00、pH6.86、pH9.18標準緩存液進行校準。

配伍溶液樣品的pH測量結果見表2。從結果可以看出，疏血通注射液與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液配伍后pH均分布在5～6之間，ΔpH≤0.7，8 h內無顯著變化，酸度穩定，符合人體注射條件，也符合疏血通注射液國家標準中的規定。

表2 疏血通注射液與2種溶媒配伍后的溶液p H穩定性考察（n=3）

2.4 疏血通配伍溶媒后滲透壓摩爾濃度穩定性考察 參照《中國藥典（2015版）》第四部0632測定法[5]，分別測定配伍 0、1、2、4、6、8 h 后樣品溶液的滲透壓，以考察配伍后溶液滲透壓的穩定性。滲透壓測定儀使用前用290 mOsmol/kg標準氯化鈉溶液校正。

配伍溶液樣品的滲透壓測定結果見表3。從結果可以看出，疏血通注射液與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液配伍后滲透壓均分布在人體血液的滲透壓摩爾濃度范圍（285～310 mOsmol/kg）內，0～8 h內RSD≤2%，滲透壓無顯著變化。

表3 疏血通注射液與2種溶媒配伍后的溶液滲透壓穩定性考察（n=3，Mean）mOsmol/kg

2.5 疏血通配伍溶媒后不溶性微粒考察 參照《中國藥典（2015版）》第四部0903不溶性微粒檢查法第一法（光阻法）[5]，分別測定配伍 0、1、2、4、6、8 h 后樣品溶液的不溶性微粒。結果見圖1及圖2。

圖1 疏血通與2種溶媒配伍后不溶性微粒（≥10μm）散點分布圖（參考線為25粒/mL）

圖2 疏血通與2種溶媒配伍后不溶性微粒（≥25μm）散點分布圖（參考線為3粒/mL）

以上結果表示，疏血通注射液與0.9%氯化鈉注射液 100 mL（NS100-1、NS100-2）、250 mL（NS250-2）配伍后2 h不溶性微粒穩定，符合中國藥典標準；與0.9%氯化鈉注射液500 mL（NS500-2）配伍后1 h或配伍后即刻不溶性微粒穩定，符合中國藥典標準；其中，配伍規格越大，不溶性微粒越穩定。疏血通注射液與5%葡萄糖注射液100 mL（GS100）配伍后2 h不溶性微粒穩定，符合中國藥典標準；與5%葡萄糖注射液250、500 mL配伍后即刻穩定，符合中國藥典標準。綜合來看，在臨床使用中，應盡量選取大規格溶媒進行配伍；若選擇0.9%氯化鈉溶液，應搖勻靜置后進行使用（中國藥典規定：標示裝量100 mL或100 mL以上的靜脈注射液，每1 mL中含10及10μm以上的微粒數不得過25粒，含25及25μm以上的微粒數不得過3粒）。

2.6 疏血通配伍溶媒后粒徑考察 參照《中國藥典（2015版）》第四部0102注射劑要求[5]，將按照上述方法配伍后的溶液用移液管吸取1 mL至樣品池，用激光粒徑測定儀測量配伍 0、1、2、4、6、8 h 后樣品溶液的粒徑。配伍溶液樣品的粒徑測定結果見圖3及圖4。

圖3 疏血通與0.9%氯化鈉注射液配伍粒徑折線圖

圖4 疏血通與5%葡萄糖注射液配伍粒徑折線圖

結果可見，由于氯化鈉注射液的鹽析作用，0.9%氯化鈉注射液作為溶媒的粒徑普遍大于5%葡萄糖注射液。疏血通與0.9%氯化鈉注射液配伍后粒徑大部分在1μm以內，其中NS100-1（1 h）；NS250-2（0 h、1 h、4 h）；NS500-3（4 h）粒徑大于1μm，小于 1.5μm，人體血管直徑大約在 4～7μm[6]，人體可耐受；疏血通與5%葡萄糖注射液配伍后粒徑大部分在0.5μm以內，粒徑均合理。

2.7 疏血通配伍溶媒后有關物質檢查（蛋白質） 參照《中國藥典（2015版）》第四部2400注射劑有關物質檢查法[5]，取疏血通注射液配伍以上11種溶媒后的溶液，精密吸取1 mL，加入新配制的30%磺基水楊酸溶液1 mL，混勻，靜置5 min，以上配伍樣品0～8 h內均未出現沉淀。結果表明，配伍后的溶液中蛋白質符合限度規定。

2.8 疏血通配伍溶媒后次黃嘌呤含量測定 照高效液相色譜法測定。色譜條件：色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠填充色譜柱；柱溫為室溫；檢測波長為254 nm；流動相為0.1%磷酸氫二鈉水溶液，流速為 1 mL/min；進樣量：6μL。

對照品溶液的制備：精密稱取次黃嘌呤對照品約10 mg，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL含次黃嘌呤0.1 mg）。

供試品溶液的制備：將疏血通注射液3支（2 mL/支）用注射器吸取內容物后分別注入以上11種溶媒中，搖勻，即得。

如表4及圖5所示，疏血通注射液與0.9%氯化鈉注射液配伍后次黃嘌呤含量2 h內穩定（含量百分比＞90%），2 h后隨時間呈緩慢降解趨勢；疏血通注射液與5%葡萄糖注射液配伍后8 h內基本穩定（含量百分比＞90%）。

表4 疏血通與溶媒配伍后次黃嘌呤含量（μg/mL，%）

3 討論

為了更大限度地涵蓋各種臨床用藥情況，除采用說明書中配伍規格外，還增添了100 mL的配伍規格進行穩定性考察。實驗表明，疏血通注射液與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液配伍后8 h內溶液顏色和外觀、pH值、滲透壓摩爾濃度均無顯著性變化。溶液澄清，未檢出蛋白質，溶液基本穩定，適合疏血通注射液臨床配伍使用。

圖5 疏血通與溶媒配伍后8 h內含量變化折線圖

在不溶性微粒檢查中，疏血通注射液與5%葡萄糖注射液配伍后不溶性微粒穩定，符合《中國藥典》要求；疏血通注射液與0.9%氯化鈉注射液配伍后不溶性微粒2 h內呈不穩定狀態，其中，配伍規格越大，不穩定的時間相應縮短。中藥注射劑中成分復雜，有一些物質例如鞣質、皂苷等可能在配伍過程中由于氯化鈉注射液的鹽析作用而析出[7]，導致不溶性微粒增多。報道中也提及疏血通注射液與0.9%氯化鈉注射液配伍后溶液變渾濁的情況，也有報道說明疏血通注射液中分子量大于5 800的物質少于1%，但其不良反應的發生可能與此殘留的少量高分子蛋白等刺激機體有關[8]。考慮到臨床用藥安全，筆者建議在臨床使用中，盡量選用5%葡萄糖注射液作為溶媒，若選用0.9%氯化鈉注射液，應配伍大規格，并細心觀察配伍后溶液的澄清情況再進行使用。

在次黃嘌呤含量測定中，疏血通注射液與0.9%氯化鈉注射液配伍后次黃嘌呤含量2 h內穩定，2 h后隨時間呈緩慢降解趨勢；疏血通注射液與5%葡萄糖注射液配伍后次黃嘌呤含量8 h整體穩定。綜合其他實驗研究結果[9-11]，0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液可用于疏血通注射液臨床配伍。但在臨床使用中，為保證藥效，應即配即用。