日照市規模牛羊場O型口蹄疫免疫效果監測分析

韓 勇 李 英 劉玉潔

1.山東省日照市畜牧獸醫管理服務中心，山東日照276800；

2.山東省五蓮縣畜牧獸醫管理服務中心叩官畜牧獸醫站，山東五蓮262300

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性的傳染病，主要感染豬、羊、牛等動物，尤其以牛、羊發病率為多。本病具有流行性快、傳播廣、發病急、危害大等流行病學特點。病畜和帶毒畜是主要的傳染源，它們既能通過直接接觸傳染，又能通過間接接觸傳給易感動物?？谔阋甙l生有嚴格的季節性，它可以發生在全年的任何月份[1]。

目前，我國主要采取以免疫注射為主的綜合性防控措施來預防和控制口蹄疫。通過免疫監測，可以及時了解口蹄疫免疫后的效果，準確掌握疫情動態，根據免疫抗體水平科學地進行綜合免疫預防，以便預測疫病的動態，控制疫病的發展。為此，日照市動物疫病預防控中心在全市牛羊場進行隨機抽樣，開展免疫效果監測，以掌握全市牛羊場O 型口蹄疫抗體水平。

1 材料與方法

1.1 試驗時間、地點

本試驗研究于2019年7月7—10日在日照市動物疫病預防控中心進行。

1.2 血清樣品

為配合日照市春季防疫檢查工作，進行牛羊口蹄的免疫效果監測，日照市動物疫病預防控制中心于2019年6月下旬對全市4 個區縣共8 家規模化牛羊場進行了抽樣檢測，共抽查240 份血清。

1.3 檢測試劑

O 型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 試劑、標準陽性血清和標準陰性血清均購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所，生產批號為20190610101-1。

1.4 儀器設備

MultIIskan GO 酶標儀，美國賽默飛（Thermo-Fisher）公司；GZX9140 恒溫培養箱，上海博迅公司；移液器，德國賽多利斯（Sartorius）公司。

1.5 口蹄疫抗體的檢測

1）抗原抗體反應：在U 型血凝板上將待檢血清從1∶16 倍比稀釋至1∶128，然后每孔加稀釋的病毒抗原50 μL，封板，4 ℃過夜。

2）ELISA 板洗5 次，將抗原抗體混合物50 μL移至ELISA 板上，37 ℃1 h。

3）洗5 次，加入50 μL 豚鼠抗血清，37 ℃30 min。

4）洗5 次，加入50 μL 酶結合物，37 ℃30 min。

5）洗5 次，加入50 μL 底物，37 ℃15 min。

6）加入50 μL 終止液，立即在波長450 nm 處讀取光吸收值（OD 值）。

7）結果判定：陽性對照效價≥1∶（1 024±1），陰性對照效價≤1∶8。臨界值=抗原對照OD 值/2。被檢樣品大于臨界值為陰性，小于臨界值為陽性。

2 牛羊O 型口蹄疫檢測結果

O 型口蹄疫抗體檢測結果見表1。由表1可見，血清檢測240 份，免疫合格220 份，抗體總體合格率91.7%。其中奶牛、肉牛、羊三者的免疫合格率分別為100.0%、83.3%和75.0%。

表1 O 型口蹄疫抗體檢測結果

3 討 論

3.1 檢測總體情況分析

抽檢了全市4 個區縣8 家規模化牛羊場，其中奶牛場5 家，肉牛場1 家，羊場2 家。樣品共240份。從檢測結果來看，O 型口蹄疫總體免疫合格率為91.7%，符合國家要求。其中奶牛、肉牛、羊三者的免疫合格率分別為100.0%、83.3%和75.0%。

3.2 抗體水平差異原因

奶牛的抗體水平最高，免疫合格率達到100%，這是因為奶牛生長周期長，一般經過多次免疫，抗體水平普遍高。肉牛和羊由于飼養周期短，僅免疫1～2 次，抗體水平明顯低于奶牛。

3.3 疫苗免疫效果分析

通過養殖戶了解到有些動物群體在接種疫苗后的整體狀況較差，對疫苗的刺激反應比較大。表明不同個體即使是相同的免疫程序，所產生的免疫效果也不一樣，主要與群體先天狀況和養殖場環境、飼養管理水平有關。

3.4 口蹄疫液相阻斷ELISA 試驗分析

所采取的口蹄疫液相阻斷ELISA 試驗，不僅能判定口蹄疫抗體的陰陽性，還能判定口蹄疫抗體的滴度，從而可以根據滴度制定科學的免疫程序?？谔阋咭合嘧钄郋LISA 試驗檢測1 個樣品可以設計4～8 個滴度，而1 個ELISA 板只能檢測10～20 個樣品，成本較高[2]。因此，實驗室可以根據具體的實際情況，自行設計布局，增加檢測樣品數量。

目前，日照市進行免疫的豬口蹄疫疫苗主要有2 種，一是口蹄疫O 型滅活苗，二是口蹄疫合成肽疫苗。在進行口蹄疫免疫抗體檢測時，對豬免疫口蹄疫合成肽疫苗，要使用專門的口蹄疫合成肽ELISA 試劑盒進行檢測，不能使用液相阻斷ELISA 試劑盒。