玄參有機氯農藥殘留概貌及其限量標準研究

梁慧慧 李龍 張喜利 朱俊平 文雯 毛妍 周小江 李玲 陳乃宏 劉文龍

摘要：目的? 獲得玄參藥材及飲片有機氯農藥殘留概貌，建立玄參有機氯農藥殘留的限量標準。方法? 采用快速氣相色譜法檢測全國范圍內10個代表產地的玄參藥材及7個產地（30批次）玄參飲片中21種有機氯農藥殘留量，考察99%置信區間，制定玄參有機氯農藥殘留的限量標準。結果? 玄參樣品中21種有機氯農藥殘留量為0.000 1～0.077 7 μg/g，其中六六六、七氯、硫丹占農藥殘留總量的93%～96%，擬定了玄參中有機氯農藥殘留國家限量標準。結論? 玄參中有機氯農藥殘留主要為六六六、七氯、硫丹，制定的玄參有機氯農藥殘留限量標準為總有機氯≤0.700 μg/g。

關鍵詞：玄參;有機氯;農藥殘留;限量標準;行業標準

中圖分類號：R284.1??? 文獻標識碼：A??? 文章編號：1005-5304（2019）08-0071-05

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.08.015????? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract： Objective To obtain profile of residues of organochlorine pesticides in medicinal materials and decoction pieces of Scrophulariae Radix; To establish the limit standard for the residue of organochlorine pesticides. Methods Rapid gas chromatography was used to determine the residues of 21 organochlorine pesticides in medicinal materials of Scrophulariae Radix from ten producing areas of China and 30 batches of Scrophulariae Radix Decoction Pieces from seven producing areas. The 99% confidence interval was investigated， and the limit standard for organochlorine residue of Scrophulariae Radix was established. Results The determination of residues of 21 organochlorine pesticide in samples of Scrophulariae Radix was among 0.000 1–0.077 7 μg/g， and contents of BHC， heptachlor， and endosulfan occupying 93%–96% of total pesticide residue. The national industry standard for the limit of organochlorine pesticides was established. Conclusion The residues of organochlorine in Scrophulariae Radix are mainly BHC， heptachlor， and endosulfan. The limit standard of total organochlorine for Scrophulariae Radix was no higher than 0.700 μg/g.

Keywords： Scrophulariae Radix; organochlorine residues; pesticide residues; limit standard; industry standard

隨著人們健康意識的增強及中藥現代研究逐步深入，中藥安全性相關事件如含馬兜鈴酸致癌作用[1]及被重金屬、農藥污染而引起中毒等受到極大關注。深入研究安全性問題是中藥現代化的必要環節。中藥材生產質量管理規范（GAP）對中藥標準提出了新的要求[2]。根據“先安全再有效”的思路，首先應對中藥的安全性特別是因重金屬、農藥殘留等外源性物質引起的安全問題進行研究并制定新的限量標準[3]。據此，國家中醫藥管理局設立了國家中藥標準化項目，旨在推動中藥產業鏈的標準化建設。玄參作為傳統常用中藥之一被列入其中。

玄參為玄參科植物玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，有滋陰、降火、生津、解毒等功效。目前玄參在我國分布很廣，主產于浙江、四川、湖南、江蘇、安徽、湖北、貴州等省。玄參在種植過程中易發生蟲害病變。針對其生長過程中的特點以及經常出現的病蟲害，藥農大多會施以不同農藥[4]。一些農藥可在短期內降解為無害物質，但絕大多數有機氯農藥不易降解，容易富集而引起嚴重的神經毒性和臟器毒性，對用藥者身體造成損害，甚至危及生命[5]。目前針對有機氯農藥殘留，2015年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）的限定標準在0.20～3.00 μg/g[6]，此標準對土壤中難降解、藥材中易富集的有機氯農藥限量過高，而歐盟、美國、日本的有機氯農藥殘留標準在0.01～0.10 μg/g之間[7]。針對以上問題，本研究采用氣相色譜法快速測定全國范圍內代表產地的玄參藥材和飲片中21種有機氯農藥殘留量，并對其分布及殘留規律進行分析，以制定適合我國的玄參有機氯農藥殘留限量標準。

1? 儀器與試藥

氣相色譜儀（GC2010 Plus），日本島津;自動進樣器（AOC-20I），日本島津;氮吹儀（MTN-2800W），天津奧特賽恩斯儀器有限公司;離心機（H1850R），湖南湘儀實驗儀器開發有限公司;精密電子天平（JA3003），上海恒平科學儀器有限公司。

玄參藥材、玄參飲片由藥圣堂（湖南）制藥有限公司統一采購，經湖南中醫藥大學藥學院中藥學教研室周小江教授鑒定為玄參科植物玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，藥材產地分別為湖南新邵、湖南廉橋、安徽亳州、貴州六盤水、河南南陽、湖南龍山、湖北來鳳、四川雅安、四川北川、浙江磐安，飲片產地分別為湖南龍山（2批次）、浙江磐安（16批次）、四川雅安（1批次）、安徽亳州（1批次）、河北保定（1批次）、湖北來鳳（5批次）、河南南陽（4批次）。六氯苯、總六六六（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、順式環氧七氯、反式環氧七氯、反式氯丹、順式氯丹、α-硫丹、狄氏劑、異狄氏劑、β-硫丹、硫丹硫酸鹽、總滴滴涕（pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT）均購于農業部環境保護科研監測所，濃度100 μg/mL。

2? 方法與結果

2.1? 混合對照品溶液的制備

精密量取21種農藥對照品適量，配制混合對照品貯備液（濃度均為1.0 μg/mL，異辛烷為溶劑）;分別精密量取混合對照品貯備液，用異辛烷配制成濃度分別為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 μg/mL的對照品溶液。

2.2? 供試品溶液的制備

取玄參粉末（過3號篩）1.5 g，精密稱定，按2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則2341農藥殘留量測定法的22種有機氯類農藥殘留測定的樣品處理方法[6]進行處理，用異辛烷定容至1 mL。每個產地藥材取3批次，在相同條件下重復配制供試品溶液。

2.3? 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱為RTX-5（5%二苯基、95%二甲基聚硅氧烷為固定液的熔融石英毛細管柱，30 m×0.25 mm，0.25 μm）;柱溫為程序升溫：初始溫度70 ℃，保持1 min，以22 ℃/min升至180 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升至220 ℃，保持2 min，以0.8 ℃/min升至224 ℃，保持1 min，以2 ℃/min升至232 ℃，保持1 min，以1 ℃/min升至235 ℃，保持1 min，最后以40 ℃/min升溫至280 ℃，保持1 min;進樣量為1 μL。該條件下，混合對照品及玄參藥材供試品色譜圖見圖1。

2.4? 最低檢測限考察

將混合對照品溶液不斷稀釋后測定，通過儀器的最低響應值，獲得方法的最低檢測限（S/N=3），見表1。

2.5? 線性關系考察

分別精密吸取“2.1”項下配制的混合對照品溶液1 μL注入氣相色譜儀，按“2.1”項下氣相條件進行測定，每個質量濃度測定3次，以平均峰高為縱坐標，以質量濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程，結果見表1。21種有機氯農藥的線性范圍為0.01～0.50 μg/mL，決定系數為0.999 1～0.999 9，線性關系良好。

2.6? 精密度試驗

精密吸取（0.05 μg/mL）混合對照品溶液1 μL，重復進樣6次，測定，計算得混合對照品各個峰面積的RSD為0.98～2.69%，表明儀器精密度良好。

2.7? 重復性試驗

精密稱定湖南新邵玄參藥材粉末（過3號篩）10份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3”項下條件進行測定，計算各有機氯農藥的RSD均在2.3%～9.8%，表明方法的重復性良好。

2.8? 穩定性試驗

取供試品溶液（湖南新邵），按“2.3”項下色譜條件，于0、2、4、8、12、24 h進樣，測定六氯苯、δ-六六六、順式環氧七氯、pp′-DDE色譜峰面積的RSD分別為1.93%、2.14%、3.14%、3.71%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.9? 加樣回收率試驗

稱取湖南新邵玄參藥材粉末6份，每份1.5 g，分別加入一定量濃度為0.05 μg/mL的混合對照品溶液，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算回收率。結果21種有機氯農藥殘留量的平均回收率為94.99%～111.00%，RSD為1.10%～3.21%，滿足農藥殘留量分析的要求。

2.10? 樣品測定

取“2.2”項下10個代表產地玄參藥材的3份平行供試品溶液，按“2.3”項下條件進樣測定，取3批平行樣品含量的平均值，農藥殘留測定結果見表2。同法測定7個產地玄參飲片農藥殘留，結果見表3。

2.11? 農藥殘留限量標準制定

根據有機氯農藥殘留量測定結果，考察99%置信區間，使用—x±2.58SD進行統計學分析，未檢測出的農藥殘留以最低檢測限制定標準[8]，擬定玄參中有機氯農藥殘留量國家限量標準（行業標準），見表4。

3? 討論

我國藥材種植施用的農藥種類繁多，按其理化性質可分為有機氯類、有機磷類、氨基甲酸酯類和擬蟲菊酯類等，其中有機氯農藥因在土壤中性質穩定且有脂溶性，降解極為緩慢，易被藥材富集導致其含量超標[9]。玄參的揮發油含量較高，易吸收脂溶性的有機氯農藥[10]。盡管我國早已禁止有機氯農藥的施用，但土壤中殘留的有機氯農藥被玄參富集吸收，含量仍然較高，患者服用玄參后，有機氯農藥將在人體內進一步富集，從而產生積累性中毒。故考察玄參中有機氯農藥殘留并制定其限量標準十分必要。

本研究通過分析10個代表產地玄參藥材及7個產地玄參飲片中有機氯農殘分布發現，藥材及飲片的有機氯農藥殘留出現頻次及含量最多者均為δ-六六六，占殘留總量的60%～75%，藥材中δ-六六六、六氯苯、順式環氧七氯、硫丹硫酸鹽的殘留量之和占殘留總量的96%，飲片中δ-六六六、七氯、順式環氧七氯、β-硫丹、硫丹硫酸鹽的殘留量之和占殘留總量的93%，其余農藥殘留較為分散且殘留量低。由此推測，農藥δ-六六六、七氯、硫丹的性質穩定，極難代謝與降解。分析其原因，這些農藥基本上為穩定的苯環結構，故苯環類結構的農藥不適用于中藥種植。

因有機氯農藥對瘧疾、登革熱等傳染病有很好的預防作用，能有效殺滅傳染病菌的蚊蟲，故世界上仍有少數國家和地區在大量使用這類農藥。鑒于控制瘧疾和減少有機氯農藥使用之間的矛盾，使開發能替代有機氯的新型農藥成為當務之急，但在開發新型農藥時，要牢記有機氯農藥的啟示，具有穩定苯環類結構和其他穩定結構農藥成分，不利于代謝與降解，應避免此類農藥的使用。

本研究中，玄參藥材選取10個代表產地進行考察，如湖南、浙江等玄參道地產區，飲片抽取7個產地進行檢測，其中浙江產地16批次，湖南產地2批次，占檢測批次的60%，同時檢測了河北玄參飲片，旨在找出除代表產地外的其他地區玄參中有機氯農藥殘留規律，結果顯示，河北產玄參的有機氯農藥殘留含量明顯高于其他產地。河北不是玄參道地產區，種植規模較小，農民連續種植的可能性較小，而玄參本身極易富集有機氯農藥，故河北產地的玄參有機氯農藥殘留含量較高，因其數據不具代表性，故不做標準制定用[11]。其他產地飲片和藥材的選取整體較為一致，數據來源可靠，故采用統計學方法，考察99%置信區間，制定了中藥玄參有機氯農藥殘留的行業標準[12]。此行業標準與歐盟、美國、日本的農藥殘留標準基本一致，充分說明重新制定玄參有機氯農藥殘留限量標準的必要性與合理性，為進一步提高玄參的質量奠定了基礎。

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（收稿日期：2018-11-26）

（修回日期：2018-12-13;編輯：陳靜）