三種麻醉劑對(duì)小鼠免疫功能的影響研究

杜俊勇 曲宇霆 蘇比努爾 沙達(dá)爾丁

【摘要】探究水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥對(duì)小鼠免疫功能的影響。方法：通過(guò)給小鼠短期注射水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥測(cè)定小鼠免疫器官生長(zhǎng)指數(shù)測(cè)定、適應(yīng)性免疫和固有性免疫功能等，檢測(cè)水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥對(duì)小鼠外周免疫器官脾臟和胸腺生長(zhǎng)指數(shù)、B細(xì)胞生成抗體及巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響。結(jié)果：注射水合氯醛，烏拉坦和戊巴比妥的小鼠在免疫器官的重量，固有性免疫和適應(yīng)性免疫功能均顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論：水合氯醛，烏拉坦，戊巴比妥均可使小鼠免疫功能下降。

【關(guān)鍵詞】水合氯醛;烏拉坦;戊巴比妥;免疫功能

【中圖分類(lèi)號(hào)】R821.4+2 ? ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ? 【文章編號(hào)】2095-6851（2019）08-034-02

水合氯醛在醫(yī)學(xué)上常用作麻醉藥和抗驚厥藥，用于失眠煩躁不安及驚厥，對(duì)胃腸道有很強(qiáng)的刺激性;烏拉坦常用于試驗(yàn)動(dòng)物麻醉，癌癥模型建立;戊巴比妥用于動(dòng)物麻醉實(shí)驗(yàn)，僅供科研使用，為作用的巴比妥類(lèi)催眠藥，用作催眠和麻醉前給藥，亦可用于治療癲癇和破傷風(fēng)的痙攣。

1 動(dòng)物與試劑

1.1 動(dòng)物

健康雄性昆明小鼠，體重（35

SymbolqB@ 2）g，由武漢科技大學(xué)校醫(yī)院提供。

1.2 試劑

水合氯醛，烏拉坦，戊巴比妥，根據(jù)查閱文獻(xiàn)結(jié)果將其加水配成分別為350mg/kg、750mg/kg、40mg/kg的溶液，該劑量均為最適劑量。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將小白鼠隨機(jī)分為3個(gè)大組，每組數(shù)量分別為35只、20只、20只，分別用于免疫器官生長(zhǎng)指數(shù)的測(cè)定、特異性免疫功能測(cè)定、非特異性免疫功能測(cè)定。小鼠的生理狀況大致一致，每一大組又均分為4個(gè)小組。

2.2 免疫器官生長(zhǎng)指數(shù)測(cè)定 試驗(yàn)第一天，將第一大組的35只小鼠分為4組，一組為空白組5只小鼠;其它三組分別10只小鼠，分別用三種麻醉劑進(jìn)行腹腔注射，之后將其放置飼養(yǎng)箱中。麻醉后第七天，再次對(duì)小鼠分別進(jìn)行腹腔注射，麻醉后放入飼養(yǎng)箱。麻醉后第八天，三個(gè)小組隨機(jī)抽取5只小鼠勁椎脫臼處死后剖殺;麻醉后第十五天，將三個(gè)小組的剩余老鼠處死后剖殺。每次剖殺時(shí)，剖殺前空腹稱(chēng)重，剖殺后立即取出脾臟、胸腺稱(chēng)重，并計(jì)算生長(zhǎng)指數(shù)。生長(zhǎng)指數(shù)=免疫器官重量（mg）/小鼠重量（g）。

2.3 適應(yīng)性免疫功能測(cè)定 試驗(yàn)第一天，將20只小鼠等分成4組，一組為空白組，其他3組分別用三種麻醉劑進(jìn)行腹腔注射，之后將其放置飼養(yǎng)箱中;麻醉后第7天，再次對(duì)小鼠分別進(jìn)行腹腔注射麻醉劑，麻醉后放入飼養(yǎng)箱。麻醉后第8天，取無(wú)脂載玻片，用雙面膠帶在載玻片兩端和中間各粘一條，然后再覆蓋上同樣的載玻片，即形成兩個(gè)小室。將此雙層玻片的一側(cè)長(zhǎng)邊浸入融化的石臘池中以封閉小室的一邊。將5%綿羊紅細(xì)胞 0.4 mL注射入小白鼠腹腔。麻醉后第13天后拉脫頸椎處死，取出脾臟稱(chēng)重后放在已加入6 mL Hanks液的平皿中，用不銹鋼網(wǎng)研磨后，經(jīng)尼龍布過(guò)濾放入試管，1000r/min離心5min，洗2次。將沉淀的脾細(xì)胞重懸Hanks液中，細(xì)胞計(jì)數(shù)配成1×107/mL。將上述脾細(xì)胞 Hanks液50μL、15% SRBC 50μL、1∶6 ～ 1∶8補(bǔ)體50μL、Hanks液250 μL混勻，用微量加樣器將混合液注入事先制備好的小室中，然后以石蠟封口，放37℃溫箱1h，取出。借助放大鏡，進(jìn)行空斑計(jì)數(shù)，計(jì)算1×106個(gè)脾細(xì)胞所含空斑數(shù)。

2.4 固有性免疫功能測(cè)定 試驗(yàn)第一天，將20只小鼠等分成4組，一組為空白組，其它3組分別用三種麻醉劑進(jìn)行腹腔注射，以后將其放置飼養(yǎng)箱中。麻醉后第7天再次對(duì)小鼠分別進(jìn)行腹腔注射麻醉劑，麻醉后放入飼養(yǎng)箱。麻醉后第8天，經(jīng)小白鼠腹腔注射6%淀粉肉湯1mL，刺激小白鼠產(chǎn)生無(wú)菌性炎癥，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞在腹腔的聚集、活化。麻醉后第12天腹腔注射1%雞紅細(xì)胞1mL，30分鐘后注射2mL Hanks液，頸椎脫臼法處死小白鼠，解剖小白鼠暴露腹腔，用尖吸管盡可能多地沖洗出小白鼠腹腔的巨噬細(xì)胞，并取脾臟稱(chēng)重。收集腹腔液，置于潔凈試管內(nèi)，加1-2滴1%堿性美蘭染色，涂片于載玻片上， 37℃溫箱干燥，油鏡鏡檢。

3 結(jié)果

3.1 免疫器官重量和生長(zhǎng)指數(shù)測(cè)定 水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥這三組小鼠的脾臟和胸腺的生長(zhǎng)指數(shù)均顯著低于對(duì)照組。

3.2 適應(yīng)性免疫（B細(xì)胞）功能測(cè)定 由于B細(xì)胞所分泌的抗體和綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，在補(bǔ)體作用下可使紅細(xì)胞溶解于特制的小室內(nèi)，形成肉眼可見(jiàn)的溶血空斑，1個(gè)空斑即代表1個(gè)PFC。對(duì)照組、水合氯醛組、烏拉坦組、戊巴比妥組小鼠1×106個(gè)B細(xì)胞所含PFC個(gè)數(shù)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的PFC個(gè)數(shù)顯著低于對(duì)照組。

4 討論

研究表明正常劑量的水合氯醛，烏拉坦和戊巴比妥均對(duì)人體有毒性，對(duì)免疫系統(tǒng)也有較大損傷。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了免疫器官生長(zhǎng)指數(shù)的測(cè)定、吞噬細(xì)胞功能的測(cè)定、B細(xì)胞功能的測(cè)定，其結(jié)果表明了機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱。研究結(jié)果表明，三種麻醉劑對(duì)小鼠的免疫功能均有影響。

參考文獻(xiàn)：

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