高效液相色譜法同時測定醬腌菜中苯甲酸山梨酸脫氫乙酸的兩種前處理方法比較研究

黃繼紅

摘 要：為同時測定醬腌菜中苯甲酸 、山梨酸 、脫氫乙酸，以提高檢測工作效率及降低檢測成本，比較了2個現行有效的國標中高效液相色譜法對醬腌菜的前處理方法。結果表明，采用GB 5009.121-2016中高效液相色譜法關于醬腌菜的前處理方法處理樣品，可同時檢測醬腌菜中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸，幾種物質的檢測回收率在96.85%～101.99%之間。該方法具有操作簡單、重現性好、回收率高等優點。

關鍵詞：高效液相色譜法;苯甲酸;山梨酸;脫氫乙酸;比較研究

中圖分類號：S-3文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20190730018

苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸是食品中使用范圍較廣和常見的食品添加劑，在多類食品中可限量使用（詳見GB 2760-2014）[1]。在近幾年的各級食品安全監督抽檢中，這幾種物質是很常見的檢測項目。

在食品安全抽檢中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉主要是采用《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》GB 5009.28-2016標準（以下稱方法1）測定，脫氫乙酸采用《食品安全國家標準 食品中脫氫乙酸的測定》GB 5009.121-2016 標準（以下稱方法2）測定。2個國家標準均有高效液相色譜法，對于醬腌菜等樣品的前處理上雖然操作上和試劑使用上有很大的不同，但在原理上有相似之處，都是水相提取，蛋白質沉淀后上機檢測，色譜分離條件上只有流動相比例的不同，具有可同時檢測的可能性[2，3]，事實上，針對苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸這幾種物質同時測定的文獻有很多，前處理方法也多種多樣[4-9]。本文以醬腌菜為樣品將以上2個國家標準規定的檢測方法進行多方面的比較，以找出一種能同時檢測這幾種物質的檢測方法，提高日常檢測工作的檢測效率。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

苯甲酸、山梨酸、二水糖精鈉標準溶液1mg/mL，北京壇墨;脫氫乙酸標準物質（99.0%），上海安譜;甲醇、乙酸銨：色譜純;超純水;亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、冰乙酸、七水硫酸鋅、氫氧化鈉：分析純。

1.2 儀器與設備

高效液相色譜儀：島津LC-20AT，二極管陣列檢測器;KQ5200V型超聲波清洗器;TG16-Ⅱ醫用離心機;BSA224S電子分析天平。

1.3? 標準溶液的配置

準確稱取脫氫乙酸標準品0.1000g（精確至0.0001g）于100mL容量瓶中，用20g/L氫氧化鈉溶液溶解，超純水定容，臨用前與苯甲酸、山梨酸、二水糖精鈉標準溶液用水稀釋成1～100μg/mL的混合標準系列工作溶液[2-3]。

1.4? 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;柱溫：30℃;檢測波長：苯甲酸、山梨酸、糖精鈉230nm，脫氫乙酸：293nm;流動相：甲醇：0.02mol/L乙酸銨（5：95）;流速：1mL/min;進樣量：10μL[2，3]。

1.5 前處理方法

1.5.1 方法1

稱取制備好的樣品按《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》GB 5009.28-2016中第一法的一般性樣品進行處理[2]。

1.5.2 方法2

稱取制備好的樣品按《食品安全國家標準 食品中脫氫乙酸的測定》GB 5009.121-2016中第二法的醬菜、發酵豆制品類樣品進行處理 [3]。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的選擇

按照相關國標，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的高效液相法流動相為甲醇與0.02mol/L乙酸銨比例5：95，脫氫乙酸的高效液相法流動相為甲醇與0.02mol/L乙酸銨比例10：90。實驗結果表明，流動相甲醇與0.02mol/L乙酸銨比例為5：95時，4種物質有很好的分離效果，出峰順序為苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸，如圖1，流動相甲醇與0.02mol/L乙酸銨比例為10：90時山梨酸和糖精鈉無法分離，如圖2，故本實驗選擇了流動相甲醇與0.02mol/L乙酸銨比例為5：95作為色譜分離條件，雖然在流動相甲醇與0.02mol/L乙酸銨比例為5：95時脫氫乙酸的檢出限沒有流動相甲醇與0.02mol/L乙酸銨比例為10：90時低，但能滿足GB 5009.121-2016中高效液相法的檢出限要求。

2.2? 標準曲線及檢出限

在確定的色譜分離條件下，對苯甲酸、山梨酸、二水糖精鈉、脫氫乙酸混合標準系列進行測定，以濃度為橫坐標， 峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，在1～100μg/mL范圍內均有良好的線性關系，見表1。

2.3 樣品檢測及重復性

按以上的方法對樣品進行前處理和檢測，重復測定6次，外標法定量，實驗表明，2種前處理方法對苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸的檢測重復性均很好，相關標準偏差（RSD）在2%以下，在相同樣品量與定容體積比的情況下，方法2的檢測結果要高于方法1，具體結果見表2。

2.4 加標回收率測定

在同一樣品中，添加一定量的高濃度苯甲酸、山梨酸、二水糖精鈉、脫氫乙酸混合標液，與樣品充分混合均勻，放置過夜，按相關方法進行前處理，樣品定容后，這4種標準物質的濃度分別為：5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL，檢測方法的加標回收率。總體而言，在相同樣品與定容體積比的情況下，方法2對4種物質的回收率要好于方法1的回收率，對4種物質的3個添加水平回收率在96.85%～101.99%之間，尤其對脫氫乙酸的回收率檢測中有很明顯的優勢，回收率檢測結果見表3。用方法1處理樣品時，提取液不能完全離心出來，如第1次提取時，加入約25mL水和4mL沉淀劑溶液共約29mL液體，離心出來的提取液只有近25mL，這可能是方法1苯甲酸、山梨酸和糖精鈉回收率低于方法2的原因;堿性提取條件，氫氧化鈉溶液可使脫氫乙酸形成溶解性較強的脫氫乙酸鹽，可能是方法2對脫氫乙酸的回收率明顯好于方法1的原因。

2.5 樣品量對檢測結果的影響

按樣品量與定容體積比約1：25、1：10、1：5稱取制備好的樣品，按照方法2進行處理和檢測。結果表明在樣品量與定容體積比約1：25～1：5范圍內不同樣品量對苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸的檢測結果幾乎無影響，通過樣品量與定容體積比的控制，可同時滿足2個國標方法的檢測定量限要求，見表4。相較于方法2，方法1在按樣品量與定容體積比約1：5時，加入沉淀劑后樣品料液幾乎失去流動性，不利于提取，導致難以進行下一步操作。

3 結論

本文通過對2種前處理方法的比較，發現醬腌菜樣品以前處理方法2和以GB 5009.28-2016中的液相色譜條件可同時檢測醬腌菜中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸，且同時滿足GB 5009.28-2016和GB 5009.121-2016的檢出限要求。與GB 5009.28-2016液相法關于醬腌菜的前處理相比較，以GB 5009.121-2016液相法關于醬腌菜的前處理具有操作簡單、重現性好、回收率高等優點。

由于沒收集到含糖精鈉的醬腌菜樣品，故糖精鈉的樣品檢測重復性等暫時無數據，但從糖精鈉的回收率檢測實驗結果來看，此方法同樣適用于醬腌菜中糖精鈉的檢測。

2個國家標準GB 5009.28-2016和GB 5009.121-2016中的HPLC檢測法對不同的樣品類別有不同的前處理方式，下一步將多收集其他類別的食品樣本對2種檢測方法進行進一步的比較。

參考文獻

[1] GB 2760-2014，食品安全國家標準 食品添加劑使用標準[S].

[2] GB 5009.28-2016 食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定[S].

[3] GB 5009.121-2016 食品安全國家標準 食品中脫氫乙酸的測定[S].

[4] 張劍峰，孫艷芳，王緣，孫海會.超高液相色譜法同時測定飲料中的山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、糖精鈉和安賽蜜[J].食品安全質量檢測學報，2018（7）：3801-3806.

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