血漿(1,3)-β-D葡聚糖在非侵襲性真菌性鼻竇炎患者中的診斷意義

王海妹,黃繼紅,周小柳,潘 雅

(海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 耳鼻咽喉-頭頸外科,海南 海口570102)

真菌性鼻竇炎在鼻科中屬于常見的感染性疾病之一,發(fā)生可能與長時間服用抗生素、免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素等,或長期患有慢性疾病、職業(yè)接觸及環(huán)境污染等因素相關(guān)[1]。真菌性鼻竇炎在臨床上主要分為侵襲性與非侵襲性兩種,其中以非侵襲性較為多見[2,3]。血漿(1,3)-β-D葡聚糖為真菌細(xì)胞壁成分[4],本研究旨在通過檢測非侵襲性真菌性鼻竇炎患者體內(nèi)的血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平,以期為非侵襲性真菌性鼻竇炎患者快速診斷提供幫助。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年3月至2018年6月在我院接受診斷治療的43例非侵襲性真菌性鼻竇炎患者和同期在我院接受鼻內(nèi)鏡手術(shù)治療的50例非真菌性鼻竇炎患者作為本次研究的觀察組和對照組。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡22-65歲,臨床資料完整者；(2)根據(jù)病史、經(jīng)影像學(xué)及專科查體等檢查高度懷疑并術(shù)后經(jīng)病理檢查證實者；(3)未合并重要臟器功能受損及腫瘤疾患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)妊娠期或哺乳期女性患者；(2)近期接受手術(shù)及纖維素膜透析患者；(3)對抗腫瘤的多糖類藥物及輸注蛋白、免疫球蛋白不耐受者。另外選取同期在我院接受健康體檢的51例體檢健康者作為本次研究的健康對照組。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),患者及其家屬知情同意此次研究并簽署相關(guān)知情同意書。

1.2 方法

采集血樣：采集清晨空腹靜脈血2 ml,室溫下靜置2-3 h后上臺式高速離心機2 000 r/min離心1 min,提取上層清液,保存待檢。

血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平的檢測：(1)取0.1 ml血小板血漿放入0.9 ml樣品處理溶液(北京金山科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的GKT1M Set動態(tài)真菌檢測試劑盒)中,然后充分混勻后置于TO1智能恒溫儀內(nèi)保溫10 min(70℃),最后取出立即置于冰浴槽內(nèi)進(jìn)行冷卻處理3 min,即可得待測血漿樣品。(2)在酶反應(yīng)主劑內(nèi)放入0.2 ml待測血漿樣品,移取0.1 ml溶液至除熱原96孔微板孔內(nèi),后插入MB-80微生物動態(tài)快速檢測系統(tǒng)內(nèi)反應(yīng)1 h,結(jié)束后自動計算出血漿(1,3)-β-D葡聚糖的表達(dá)水平。參考范圍：≥10 pg/ml為陽性,<10 pg/ml為陰性,操作期間應(yīng)避免污染,嚴(yán)格遵守?zé)o菌環(huán)境操作。

真菌培養(yǎng)法：(1)患者服用抗菌藥物前在無菌環(huán)境下采集痰液及中段尿液等可疑分泌物標(biāo)本,并接種于顯色平板(凱林念珠菌)內(nèi),在25℃下孵育反應(yīng)24-28 h。(2)同時采集2套血培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)(上海躍進(jìn)SPX-400-II生化培養(yǎng)箱),7 d后均接種顯色平板培養(yǎng),如果平板出現(xiàn)真菌,則分純處理后予以重屬鑒定(ATB Expression半自動微生物分析儀和法國生物梅里埃酵母菌鑒定試劑盒)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 基線資料

表1結(jié)果可見,三組患者的基線資料無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

表1 三組患者的基線資料比較

2.2 治療前后的血漿(1,3)-β-D葡聚糖表達(dá)情況

表2結(jié)果可見,治療前觀察組患者的血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平及其陽性表達(dá)率明顯高于對照組和健康對照組(t=12.66、21.35,P<0.01；χ2=33.95、82.58,P<0.01)；治療后觀察組患者的血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平及其陽性表達(dá)率明顯低于治療前(t=17.41、12.34,P<0.01；χ2=67.20、20.48,P<0.01),治療后觀察組血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平明顯高于對照組和健康對照組(t=2.891,4.882,P<0.01),但血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平陽性表達(dá)率與對照組、健康對照組均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(χ2均=2.377,P=0.12)。

表2 三組患者的血漿(1,3)-β-D葡聚糖表達(dá)情況比較

2.3 不同檢測方法在非侵襲性真菌性鼻竇炎患者中的診斷價值

表3結(jié)果可見,血漿(1,3)-β-D葡聚糖試驗在非侵襲性真菌性鼻竇炎患者中的敏感度、陰陽性預(yù)測值及準(zhǔn)確率均明顯高于真菌培養(yǎng)試驗(P<0.05)。

表3 兩種檢測方法在非侵襲性真菌性鼻竇炎患者中的診斷價值比較(例,%)

3 討論

真菌性鼻竇炎主要由真菌感染引發(fā),具有一定的特征性,此類患者往往會有明顯鼻塞癥狀,鼻內(nèi)分泌物為膿性,有些患者會同時存在頭痛、頭暈及耳鳴等臨床癥狀,嚴(yán)重影響了患者的日常生活[5,6]。根據(jù)病理類型不同,真菌性鼻竇炎可以分成急性暴發(fā)型、慢性侵襲性、真菌球型和變應(yīng)性真菌性四種,其中前兩類為侵襲性,感染對附近結(jié)構(gòu)及組織的侵犯較為顯著,根據(jù)影像學(xué)檢查及病史體征較易診斷；后兩類為非侵襲性,在臨床上較為常見,其臨床癥狀不明顯,發(fā)病也較隱匿,不易被發(fā)現(xiàn),往往確診時已錯過最佳治療時間[7],故如何及早、有效、精準(zhǔn)地診斷非侵襲性真菌性鼻竇炎是臨床上亟待解決的難題。

以往臨床上主要通過患者的癥候群、病史及病理學(xué)、影像學(xué)、真菌學(xué)等檢查結(jié)果進(jìn)行診斷,臨床實踐結(jié)果顯示,影像學(xué)變化較為典型的患者一般診斷準(zhǔn)確率較高,而影像學(xué)表現(xiàn)不夠典型的患者則不易被診出[8,9]。盡管術(shù)后真菌學(xué)或病理學(xué)檢查可以幫助確診,但錯過了最佳治療方案的選擇時機,不利于患者術(shù)后恢復(fù)。血漿(1,3)-β-D葡聚糖為真菌細(xì)胞壁成分,占有率超過50%,一旦真菌侵入機體血液及深部組織內(nèi),會受到吞噬細(xì)胞吞噬及消化等處理,此時(1,3)-β-D葡聚糖就會從胞壁內(nèi)大量釋放及逃逸,血液或其他體液內(nèi)的(1,3)-β-D葡聚糖水平就會迅速上升[10,11]。本研究結(jié)果顯示,治療前觀察組患者的血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平及其陽性表達(dá)率明顯高于對照組和健康對照組(t=12.66、21.35,P<0.01；χ2=33.95、82.58,P<0.01)；治療后觀察組患者的血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平及其陽性表達(dá)率明顯低于治療前(t=17.41、12.34,P<0.01；χ2=67.20、20.48,P<0.01),血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平明顯高于對照組和健康對照組(t=2.891,4.882,P<0.01),但血漿(1,3)-β-D葡聚糖水平陽性表達(dá)率與對照組、健康對照組均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=2.377、2.424,P=0.12),提示血漿(1,3)-β-D葡聚糖可輔助快速、簡便、正確地診斷非侵襲性真菌性鼻竇炎患者。此外,血漿(1,3)-β-D葡聚糖試驗在非侵襲性真菌性鼻竇炎患者中的敏感度、陰陽性預(yù)測值及準(zhǔn)確率均明顯高于真菌培養(yǎng)試驗(P<0.05),提示血漿(1,3)-β-D葡聚糖在非侵襲性真菌性鼻竇炎患者中具有突出的診斷價值。

總之,血漿(1,3)-β-D葡聚糖試驗對非侵襲性真菌性鼻竇炎患者具有突出的診斷價值,且操作簡便、檢測時間短、結(jié)果較可靠,值得大力推廣。