三七不同炮制方法色譜峰的研究

胡德美 鮑泥滿 鄭霏艷

摘要：目的 探究三七蒸制、烘焙、油炸、砂燙四種炮制方法五種皂苷（R1、Rg1、Re、Rb1、Rd）含量的變化，以及相對于生三七多出來的色譜峰的分析。方法 利用高效液相分析三七不同炮制方法下的色譜峰的情況。結果 五種皂苷的含量下降程度比較為蒸制<油炸<砂燙;烘焙這種炮制方式，除了Rb1的量有所減少，其四種皂苷含量都有所增加;相對于生三七，圖譜上明顯增加的峰的個數及含量總體來說增加比較為砂燙>油炸>蒸>烘焙。結論 三七的炮制方法不同，化學成分的比例、結構也不同。

關鍵詞：炮制;三七;化學成分

中圖分類號：R285.5 ? 文獻標志碼：A ? 文章編號：1007-2349（2019）07-0054-06

【Abstract】Objective： To explore the changes of the contents of five saponins （R1， Rg1， Re， Rb1， Rd） in steaming， baking， frying and sand-heating of Pseudo-Ginseng and analyze the chromatographic peaks of raw Pseudo-Ginseng. Methods： High-performance liquid phase analysis was used to analyze the peaks of Pseudo-Ginseng in different processing methods. Results： The reduction of the content of the five saponins was compared， steamed < frying < sand-heat< baking. In addition to the decrease in the amount of Rb1， the baking method increased the content of four saponins. Compared with raw Pseudo-Ginseng， the number and the content of the obviously increased peaks on the map generally increased to be sand-heat > frying > steaming > baking. Conclusion： The different processing methods of Pseudo-Ginseng have different proportion and structure of chemical components.

【Key words】Keywords： processing， Pseudo-Ginseng， chemical composition

三七為五加科植物三七Panax notoginseng（Burkill）F.H.Chen ex C.Chow & W.G.Huang的干燥根及根莖[1]。又名田七，主產于云南和廣西。三七為我國重要的傳統藥物，也是歷史悠久的天然資源。三七味甘，微苦，性溫，歸肝、胃、心、小腸經，具有止血、活血散瘀、消腫定痛的功效，被譽為傷科圣藥，素有“金不換”、“南國神草”等盛名，又被現代中藥學家稱為“參中之王[2]。傳統中醫醫藥在遣藥組方時非常講究“藥之生熟”，生熟用法不同且功效各異[3]。未經炮制過的三七為生三七，經炮制過的三七為熟三七?！侗静菥V目拾遺》首次記載了三七補益作用，熟三七在臨床上主要用于由生血乏源、失血過多、腎精虧損、大病久治不愈等引起的血虛證，產后血虛和習慣性產后血暈等;也可用于身體虛弱，氣血不足，癥見面色蒼白、頭昏眼花、四肢無力、食欲不振[4-6]。三七的炮制方法傳統資料記載有“蒸熟”和“油炸”兩種[7]，通過查閱文獻及其他中藥炮制的借鑒，本文還增加了烘焙和砂燙這兩種炮制方法。以期利用高效液相分析三七不同炮制方法色譜峰之間的區別，找出不同的炮制方法色譜峰的變化特征，為后續的化學及藥理研究提供基礎。2015版《藥典》[8]三七的高效液相質量控制只以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1這三個成分為指標，本實驗用高效液相法同時測定五種皂苷類成分（三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd），既很好的區別三七與人參、西洋參，又更加充分地評價三七。

1 材料與方法

1.1 藥品 三七，購自云南省昆明市官渡區土中藥材批發行，經云南中醫藥大學中藥學院炮制中心趙榮華教授鑒定為五加科人參屬植物三七Panax notoginseng（Burkill）F.H.Chen ex C.Chow & W.G.Huang的干燥根及根莖。

1.2 試劑 甲醇（購自天津市風船化學試劑科技有限公司），乙腈（購自MREDA TECHNOLOGY INC，MADE IN USA），娃哈哈純凈水，除乙腈為色譜純外，其他均為分析純。三七總皂苷標準品，（購自國家藥品生物制品檢定所，批號：110870-201002）。

1.3 儀器 Agilent 1260系列高效液相色譜儀，VWD紫外檢測器，Chemstation化學工作站;水浴鍋（型號：HH-6，國華電器有限公司）;十萬分之一天平（型號AB265-S，瑞士梅特勒-托利多公司），色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm，5μm），水浴鍋（型號：HH-6，國華電器有限公司），溫度計（購自testo，型號905-T1），電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司），微波爐（紅番茄，型號HK-0905A2T），沙子（河沙），油（金龍魚調和油）。

2 樣品的制備

2.1 供試品溶液的制備 精密稱取三七粉末600 mg，置250 mL圓底燒瓶中，加入50 mL甲醇溶液，80℃回流2h，放冷，補重，搖勻，靜置后用0.45μm濾膜過濾，取續濾液[9]。

2.2 對照品溶液的制備 按照2015版《藥典》要求，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1三者含量不低于5.0%。配三七總皂苷對照品溶液，以Rg1的濃度為0.4 mg/mL標準。精密稱量0.1429 g的三七總皂苷，置于10 mL的容量瓶，加甲醇定量至10 mL，得到三七總皂苷溶液濃度為1.429 mg/mL。其中五種皂苷成分的濃度為三七皂苷R 10.099 mg/mL、人參皂苷Rg1 0.400 mg/mL、人參皂苷Re 0.054 mg/mL、人參皂苷Rb1 0.424 mg/mL、人參皂苷Rd 0.104 mg/mL。

3 色譜分析

3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×150 mm，5μm）;流動相：乙腈-水，梯度洗脫，梯度見表1;柱溫：20℃;進樣量：10μL;流速：1 mL/min;檢測波長：203nm[10]，結果見表1。

3.2 線性關系考察 精密吸取三七總皂苷對照品溶液4、6、8、10、12、14 uL，根據表1色譜條件測定峰面積，以進樣量（ug）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得出五種皂苷成分的回歸方程、相關系數與線性范圍見表2。五種皂苷的回歸曲線、回歸方程、線性相關系數、以及線性范圍見圖1-圖5。

通過以上線性關系可以看出，通過此方法測定三七的五種皂苷含量，數據相關性較好，說明該方法用于測定和評價三七的五種皂苷含量可行。同時，將生三七的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的峰面積代入回歸方程，可以得出三種皂苷的含量為8.10%，符合藥典對三七質量標準要求。

4 三七不同炮制品的制備及圖譜的比較

4.1 三七的炮制 蒸制：常溫蒸制6 h，切片，干燥，打粉，過80目篩;油炸：用植物油炸至表面呈金黃色，冷卻，打粉，過80目篩;砂燙：將片狀三七砂燙至表面呈金黃色，打粉，過80目篩;烘焙：將生三七粉用微波爐中檔烘焙至三七粉散發獨特香味。

4.2 三七及不同炮制品材料圖 見圖6-圖11。

4.3 四種炮制方法的供試品制備 分別準確稱量0.6 g四種炮制三七粉及生三七粉，按照2.1供試品溶液的制備方法，并且以3.1色譜條件進樣分析，得出四種炮制方法和生三七的五種皂苷峰面積如表3。

4.4 四種三七炮制方法的HPLC圖譜分析與比較 見圖12-圖21。

5 討論

由圖（6-11）可以看出，與生三七比較，炮制品的外觀顏色都有所變化，砂燙和油炸的三七表面都呈金黃色，而烘焙品和蒸制品的顏色與未炮制的三七粉比較，顏色稍微加深。

從五種皂苷含量來分析，由表3可以看出，和生品比較，四種炮制方法里除了烘焙方法，其他三種炮制方法的五種皂苷含量均有所下降，且下降程度為砂燙>油炸>蒸。而烘焙與生品比較，除了Rb1有所下降，其他均有所升高。

從新產生的成分來分析，由圖（12-21）可以看出，峰的個數及含量總體來說增加比較為砂燙>油炸>蒸>烘焙。發生這一現象的原因可能是加熱溫度不同而導致，溫度越高，變化越顯著。其次，還發現了烘焙與油炸這兩種炮制方法較其他炮制方法更有意義的地方，在Rb1出峰之后與Rd出峰之前的這段時間段，新產生的成分以及原有成分的變化較明顯，這些變化有待進一步的深入研究。

熟三七在臨床上的應用還不普及，物質基礎研究得并不深入，本實驗初步探索出三七不同的炮制方法化學成分的區別，為后續熟三七的研究可提供一定的指導和選擇，以期在熟三七化學成分及藥理作用方面都有更加深入和全面的研究。

參考文獻：

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[4]徐冬英.三七補益功效考[J].中藥材，2002，25（12）：906-908.

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[7]廣西壯族自治區衛生廳編.廣西中藥炮制規范[M].南寧，廣西人民出版社，1985：18.

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[9]周新惠，趙榮華，張榮平，等.三七不同加熱炮制品中五種種皂苷類成分的含量測定[J].云南中醫學院學報.2013，36（6）：11-13.

[10]周新惠，趙榮華，張榮平，等.三七不同加熱炮制品中五種種皂苷類成分的含量測定[J].云南中醫學院學報.2013，36（6）：12-14.