農村散養家禽禽流感和新城疫免疫程序探討

林顯湛　盧偉全　陳世文　彭志超　黃自立

摘 要 農村散養家禽雖然在整個家禽飼養行業所占份量很小，但依然普遍存在。飼養散養家禽的多為老年人以及他們在家幫帶的學齡前兒童，是散養家禽容易傳播的禽流感包括H5亞型、H7N9的易感人群。為切合農村實際，加強散養家禽H5+H7N9以及新城疫免疫工作，對35羽試驗雞進行了禽流感（H5 Re-8+H7N9 Re1）+新城疫同時免疫，抗體水平合格率分別達到97.14%、97.14%和94.29%，證明對農村散養家禽禽流感和新城疫同時免疫效果理想。

關鍵詞 H5;H7N9;重組疫苗;免疫抗體水平

中圖分類號：S855.3 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.12.078

禽流感（Avianinfluenza，AI）是由禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的禽類高度接觸性、急性傳染病。禽流感病毒屬于正黏病毒科流感病毒屬A型禽流感病毒[1]。禽流感病毒由很多亞型，其中認為H5和H7亞型多為高致病性強毒株[2]。東莞市一直以來重視高致病性禽流感免疫工作，但在散養家禽方面，經常遇到的是散養戶認為免疫滅活苗后容易出現不良反應，甚至影響產蛋、個別出現死亡等，拒不履行強制免疫主體責任。為了探索更切合農村基層、更便于操作的免疫程序，對5個家禽散養戶飼養的家禽進行了禽流感+新城疫同時免疫，并與單純免疫禽流感的方法進行比對，其中H5 Re-8株和H7N9 Re1株免疫抗體水平均為97.14%，遠高于單純免疫組的60.00%和55.00%，證明在農村基層應可完善免疫程序。

1 材料與方法

1.1 家禽血清

在2019年3月采自東莞市農村雞散養戶，日齡均在120～150 d，一組為同時免疫1次禽流感滅活苗+新城疫弱毒苗，劑量為0.5 mL和1羽份，一組為單純免疫1次禽流感滅活苗，劑量為0.5 mL。以翅靜脈采血，以3 500 r·min-1離心15 min 分離獲得待檢血清，-20 ℃保存備檢。

1.2 試劑

1.2.1 1%雞紅細胞懸液

采集實驗室飼養的3只禽流感和新城疫非免疫的健康公雞的血液與阿氏液等體積混合，用pH值7.2的0.01 mol·L-1 PBS液洗滌3次，每次以1 000 r·min-1離心10 min，洗滌后用PBS液配成體積分數1%雞紅細胞懸液，4 ℃保存備用。

1.2.2 抗原和陽性血清

H5亞型禽流感抗原（Re-8株）、H7N9（Re1株）、ND（La Sota株）及相對應毒株的陽性血清。

1.2.3 主要耗材和儀器

96孔“V”型反應板，離心機，8道移液器，微量震蕩器。

1.3 方法

按照高致病性禽流感診斷技術、新城疫診斷技術規定的血凝與血凝抑制方法操作。根據東莞市動物疫病監測方案規定，家禽免疫后21天進行免疫效果監測，以完全抑制4單位抗原的血清最高稀釋倍數作為HI的滴度，H7N9、ND以HI效價大于或等于41og2判陽性、H5以大于或等于5log2判陽性，判定為抗體合格。

2 結果與分析

2.1 同時免疫禽流感+新城疫的免疫抗體水平

共檢測35份血清樣品，H5 Re-8株和H7N9 Re1株免疫抗體水平均為97.14%，ND為94.29%，未發現不良反應，詳細結果見表1。

2.2 單純免疫禽流感的免疫抗體水平

共檢測20份血清樣品，H5 Re-8株免疫抗體水平為60.00%，H7N9 Re1株為55.00%，ND不作比較，有3羽雞出現不良反應，其中1例為精神沉郁，1例為食欲不振，1例為下痢。詳細結果見表2。

3 討論

農村散養家禽免疫難度不僅在免疫密度上，而且在免疫效果上。例如2019年春防期間，東莞市調查摸底應免散養家禽為17.38萬羽，經過集中免疫后，免疫密度達到97.89%，仍有接近0.37萬羽散養家禽由于散養戶認為免疫禽流感滅活苗后，容易出現不良反應如精神沉郁、食欲不振、下痢以及產蛋下降等，嚴重者出現死亡，而拒絕履行強制免疫義務。在已免疫的散養家禽方面，由于難以做到像規模養殖場一樣多次免疫，滅活苗單靠一次免疫，未必能達到良好的免疫效果。因此，探索針對農村散養家禽的、可操作性強的免疫程序，對防控高致病性禽流感，尤其是保障散養戶以及其家人身體健康尤為重要。本次試驗探索同時免疫禽流感+新城疫，一方面降低了不良反應的概率和癥狀，另一方面通過一次免疫可以產生較高的免疫抗體水平，適合在農村基層進一步試驗推廣。

本次試驗所選取的試驗雞，均來自三鳥批發市場，蓄肥養殖50～70 d，日齡均在120～150 d。由于散養戶拒絕多次采集血清，因此未能在免疫前檢測原有抗體水平以作比較，目前正在物色合適的散養場點作相關比較。

同時免疫可能和目前規模養殖場免疫程序不相符，但同時免疫并不是首次使用，目前我國一直在使用的禽流感-新城疫基因工程苗，包括H9亞型+ND、H5亞型+ND，都已在實際生產中得到廣泛使用，并取得一定效果。以往存在質疑的ND抗原血凝素受體位點借助于自身病毒空間結構優勢，比AI的血凝素結合受體位點更具有優勢[3]，在本次試驗中并未得到明顯體現，相關機理有待進一步研究。

我國自2018年12月開始已轉換禽流感新毒株，在東莞市家禽規模養殖場已全部清理的情況下，農村散養家禽是防控高致病性禽流感的重點，春防期間正逐步過渡新毒株疫苗進行免疫注射，在8—9月秋防集中免疫期間，將進一步探索完善針對農村散養家禽的免疫程序，爭取達到一次免疫就可以達到良好免疫效果的目標，降低高致病性禽流感疫情和人感染病例發生的風險。

參考文獻：

[1] Y.M.Saif，H.J.Barnes，J.R.Glisson，等.禽病學[M].第11版.北京：中國農業出版社，2005.

[2] 張進.高致病性禽流感免疫程序的優化及應用[D].長沙：湖南農業大學，2010.

[3] 陸桂麗，汪萍，沙依蘭古麗，等.禽流感-新城疫重組二聯活疫苗（rL-H5株）接種肉雞后免疫抗體水平消長規律分析[J].中國獸醫雜志，2010（12）：39-42.

（責任編輯：劉昀）